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顯微ct,又稱微型CT、小動物CT,是一種非破壞性的3D成像技術(shù),可以在不破壞樣本的情況下清楚的了解樣本的內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu),它與普通CT最大的差別在于分辨率極高,空間分辨率達到1~10μm,也就是“能看見組織和細(xì)胞圖像的CT”,因此具有良好的“顯微”作用,它的這一分辨率可以達到病理活檢的標(biāo)準(zhǔn),通過顯微CT,觀察者可以直接看到組織和細(xì)胞的圖像;因此無論是數(shù)據(jù)還是圖像處理,顯微CT擁有許多不可替代的優(yōu)勢,尤其是在骨科研究中的應(yīng)用.
1在測骨礦物密度中的優(yōu)勢
骨密度(BMD):是骨質(zhì)量的一個重要標(biāo)志,反映骨質(zhì)疏松程度,預(yù)測骨折危險性的重要依據(jù).是描述骨組織礦物含量的一個宏觀指標(biāo).目前臨床上測量BMD的主要手段為雙能x線系統(tǒng)(dualenergyX-rayabsorptiometry,DEXA)檢查,通過X射線管球經(jīng)過一定的裝置所獲得兩種能量、即低能和高能光子峰.此種光子峰穿透身體后,掃描系統(tǒng)將所接受的信號送至計算機進行數(shù)據(jù)處理,得出骨礦物質(zhì)含量.該儀器可測量全身任何部位的骨量,精確度高,對人體危害較小,檢測一個部位的放射劑量相等于一張胸片1/30,QCT的1%,不存在放射源衰變的問題,這種方法是相對較新的方法,精度較高,測試時間長(每人10~20min),由于設(shè)計DEXA時,人為將掃描的部位設(shè)定為興趣區(qū)域(regionofinterest,ROI)內(nèi)的組織,而實際上ROI內(nèi)的組織不僅僅只含有骨組織,還有骨髓、肌肉及周圍的脂肪等成分.這些成分都可以吸收x線,使得DEXA系統(tǒng)錯誤的將上述組織當(dāng)作骨礦物質(zhì),從而導(dǎo)致骨礦物密度的測量誤差;HHBolotln[1]研究表明:在骨質(zhì)疏松、低骨量的個體中,骨密度的測量的準(zhǔn)確性誤差可達20%~30%,因此DEXA系統(tǒng)應(yīng)用于活體檢測BMD時所得到的結(jié)果缺乏可信度.顯微CT能夠提供樣本內(nèi)部的密度分布的客觀信息,具有良好的密度分辨率,并且可以通過軟件計算在ROI內(nèi)的BMD和微觀結(jié)構(gòu),從而可以排除骨髓、骨外肌肉及脂肪等成分的干擾,因而可以精確的測量ROI內(nèi)的骨礦物密度,還可以分別評估皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨的骨礦密度,測量真正的骨礦含量(BMC)和皮質(zhì)骨厚度等骨參數(shù);NuzzoS[2]在研究中表明,顯微CT在骨密度測量中有良好的分辨率,并且可通過軟件在三維空間觀察骨標(biāo)本的BMC和微結(jié)構(gòu),測量真正的BMC和皮質(zhì)骨厚度.而BagiCM[3]也在研究中發(fā)現(xiàn),與DEXA檢測骨密度相比,顯微CT的測量值更能反映骨的力學(xué)強度.
2在三維結(jié)構(gòu)分析中的優(yōu)勢
骨組織切片,是一種二維結(jié)構(gòu)切片,供光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡觀察的骨組織薄片,因要求不同,可用刀片進行徒手切片,也可將組織塊包埋于石蠟或火棉膠中或以低溫冰凍,用切片機切片,切成5~10μm薄片,供光學(xué)顯微鏡觀察,用環(huán)氧樹脂或甲基丙烯酸包埋組織塊切制的超薄切片,其厚度在20~50納米,專供在電子顯微鏡下觀察,InariS4[4]認(rèn)為其制作過程繁瑣復(fù)雜,而且對技術(shù)和人員的技能要求比較高,不同的人所做的結(jié)果存在一定的誤差;與二維組織切片相比,顯微CT的標(biāo)本制備過程就簡單了很多,可將新鮮的取材標(biāo)本直接放入掃描,也可將標(biāo)本固定、脫水后放入掃描,還可以將包埋好的標(biāo)本塊放入掃描,MPAkhter[5]研究認(rèn)為顯微CT不僅省去了制作切片標(biāo)本中的復(fù)雜的切片、制備、染色過程,而且在其測試后還可將同一標(biāo)本做進一步的切片處理.顯微CT能對樣本內(nèi)的感興趣區(qū)域進行3D分析,可進行目標(biāo)體整體分割測量,在任意方向直接測定骨三維結(jié)構(gòu),具有連續(xù)性和完整性的優(yōu)勢,所獲取的分析數(shù)據(jù)在標(biāo)本真實,而且重復(fù)性好,同時可產(chǎn)生非失真性圖像,可以辨別很多細(xì)小的病理變化;UchiyamaH[6]在研究中,通過對不同時間的鼠顱骨的再生過程的掃描,實現(xiàn)了連續(xù)觀察骨修復(fù)的動態(tài)三維結(jié)構(gòu),范猛[7]在研究中以亞納米級硫酸鋇作為造影劑,對動物股骨頭微血管進行顯影,實現(xiàn)了微血管的精確三維顯像;而常規(guī)使用骨切片是骨二維圖像形態(tài)的分析方式,使得觀察者無法獲得直觀的三維結(jié)構(gòu)模型,無法對其進行全面、立體的觀察;而且組織學(xué)切片方法會破壞標(biāo)本的完整性,從而使得一個標(biāo)本不能同時用于結(jié)構(gòu)參數(shù)分析以外的其他檢測.
3在松質(zhì)骨測量方面的優(yōu)勢
骨小梁厚度、骨小梁間隙、骨小梁數(shù)目、骨小梁體積傳統(tǒng)方法測量松質(zhì)骨的微觀結(jié)構(gòu)參數(shù)主要有骨小梁面積、骨小梁厚度、骨小梁數(shù)目、孔隙數(shù)、這些參數(shù)基于單層組織切片獲得,這種方法需要高水平的專家技術(shù)評估骨小梁的微結(jié)構(gòu),存在很大的人為誤差;顯微CT評價骨微結(jié)構(gòu)的空間參數(shù)包括:骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)目、骨小梁間隙、骨連接密度.所有這些都是有顯微CT形態(tài)測量軟件測的,LarsMulder[8]研究表明,這些參數(shù)比傳統(tǒng)方法測得的結(jié)果更加精確,DavidV[9]在對小鼠骨骼的研究表明,顯微CT可以全面、立體、實時的觀察骨質(zhì)量的改變,說明顯微CT是觀察骨組織顯微結(jié)構(gòu)的有效方法.IlanK[10]在研究中認(rèn)為顯微CT在骨修復(fù)過程中也可以方便的觀察骨量的變化.李展春[11]方玲娜[12]的研究中,顯微CT可以直接觀察和定量骨小梁的微結(jié)構(gòu).
4在測試精度方面的優(yōu)勢
4.1骨體積分?jǐn)?shù)骨體積分?jǐn)?shù)(BVF)是描述松質(zhì)骨細(xì)微結(jié)構(gòu)一個非常重要的參數(shù),其意義在于能反應(yīng)松質(zhì)骨樣本內(nèi)骨組織體積的含量.從顯微CT的三維重建圖像和數(shù)據(jù)中,可以直接得出BVF準(zhǔn)確值,ThomsenJS[13]應(yīng)用顯微CT與組織學(xué)切片分別對脛骨樣本進行了測量結(jié)果的比較,認(rèn)為兩種方法測量所得的BVF高度相關(guān)(r=0.95).
4.2構(gòu)造模型指數(shù)構(gòu)造模型指數(shù)(SM)I是描述空間物體三維幾何形態(tài)的附加變量,是骨小梁的結(jié)構(gòu)特性的表達參數(shù),用于描述物體表面的曲率信息.ThomsenJS[13]在比較了人脛骨樣本SMI和組織切片法測量松質(zhì)骨結(jié)構(gòu)因子(TBPf)關(guān)系,發(fā)現(xiàn)SMI與TBPf存在良好的相關(guān)性(r=0.95).YangJ[14]研究,使用顯微CT分析去卵巢大鼠和假手術(shù)組大鼠骨微結(jié)構(gòu),實驗結(jié)果表明,去卵巢大鼠比假手術(shù)組大鼠SMI增加,其結(jié)果具有顯著性.精確、方便、快捷、高效是顯微CT的一大優(yōu)點,但是目前顯微CT也存在的很多問題.
4.2.1產(chǎn)生偽影王軍[15]GE顯微CT對松質(zhì)骨塊標(biāo)本,可進行同水平多標(biāo)本掃描,重建顯示無明顯偽影存在.帶金屬釘松質(zhì)骨標(biāo)本水平雙標(biāo)本同掃時,會相互產(chǎn)生強烈偽影響,周邊骨組織測試影響較大,且無法進行有效的密度校正.BevillG[16]研究顯示顯微CT是以x線吸收程度產(chǎn)生影像,對新生軟骨、類骨質(zhì)等目標(biāo)不是特別敏感,實際應(yīng)用中應(yīng)注意控制CT窗口與水平.
4.2.2價格昂貴顯微CT檢測很先進、很精確,但成本很高.設(shè)備本身200萬元,3000h壽命球管價值36萬元,目前單一標(biāo)本的一次掃描重建費用在1000~2000元左右,因此大樣本量的統(tǒng)計實驗價格昂貴,目前較多采用的方法是在二維切片基礎(chǔ)上選擇代表性樣本的精確表達與定量,或做完顯微CT掃描重建的標(biāo)本再進行二維切片的大樣本統(tǒng)計;此外在滿足掃描分辨率、偽影影響不大的情況下,可選擇大號樣品杯,一次多標(biāo)本同時掃描,分別重建,可大大降低掃描成本.
4.2.3應(yīng)用范圍窄顯微CT的空間分辨率與探頭的大小屬于同一數(shù)量級,空間分辨率越高,探頭體積越小;觀測的樣本越大,所需的探頭越多.由于探頭變小,單個探頭檢測的信號變?nèi)?,需要高靈敏低噪聲放大系統(tǒng),這就直接限制了顯微CT在大型動物和人身上的應(yīng)用.由于顯微CT的分辨率很高,其能夠掃描的樣品體積很小,只有幾個厘米,因此目前顯微CT只應(yīng)用在科研方面,還無法在臨床上使用.顯微CT目前尚無法進行類骨質(zhì)觀測,因此,顯微CT與病理切片在骨形態(tài)計量應(yīng)用中是互補的,而不能完全替代同時.顯微CT在骨科研究中的應(yīng)用優(yōu)點很多,雖然目前顯微CT還有不少問題需要解決,但隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,顯微CT的適用范圍、偽影消減以及圖像清晰度都將會有很大的提高,隨著這些缺點的不斷改善,顯微CT在骨科研究中的應(yīng)用將會越來越廣泛.