兒童MP感染診斷評價范文

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肺炎支原體（Mycoplasmapneumoniae，MP）是呼吸道感染的常見病原體，尤其是社區(qū)獲得性肺炎和兒童原發(fā)性非典型肺炎的最常見病原體[1－3]。盡管mp感染后有一定特殊的臨床表現(xiàn)和影像學(xué)改變[4，5]，但有時仍很難與其他病毒或細菌感染相鑒別。本研究通過對153例MP感染患兒進行為期3個月的MP-DNA、MP-IgM檢測和MP快速培養(yǎng)三種方法的動態(tài)檢測，系統(tǒng)比較和評價三種方法在兒童MP感染中的臨床診斷價值。

1對象與方法

1．1對象

選取2009年9月—2010年6月因MP感染入住深圳市兒童醫(yī)院呼吸科的153例患兒。根據(jù)患兒的年齡，分為＜3歲組和≥3歲組；根據(jù)患兒入院前病程分為＜7d組和≥7d組；根據(jù)入院前是否用過大環(huán)內(nèi)酯類藥物分為用藥組和未用藥組。MP感染診斷標準參照《實用兒科學(xué)》[6]：有呼吸道感染癥狀；MP-DNA、MP-IgM和MP快速培養(yǎng)，至少1項陽性；并經(jīng)阿奇霉素或紅霉素治療有效。所有患兒在入院時均檢測MP-IgM、MP-DNA及快速培養(yǎng)MP，并分別在病程1、3個月時針對陽性結(jié)果重復(fù)檢測。同時觀察患兒有無發(fā)熱、咳嗽等情況。所有診斷為MP感染的患兒均進行為期3周的標準治療。

1．2方法

1．2．1MP-IgM檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法，嚴格按照試劑盒（深圳博卡生物有限公司）說明書進行操作及結(jié)果判定。

1．2．2MP-DNA檢測采用PCR法，操作及結(jié)果判定嚴格按照MP-DNA擴增熒光檢測試劑盒（中山大學(xué)達安基因股份有限公司）說明書。檢測儀器為LightCycler3．5熒光定量PCR儀（瑞士Roche公司）。

1．2．3MP快速培養(yǎng)按MP快速鑒定培養(yǎng)液（陜西百盛園生物科技信息有限公司）說明書操作。培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，若培養(yǎng)液顏色由原來的紅色變?yōu)辄S色則為陽性，而培養(yǎng)液顏色保持原來的紅色不變則為陰性。

1．3統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件，率的比較采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2．1一般情況

共入選153例患兒，其中臨床和影像學(xué)診斷為肺炎者141例，氣管支氣管炎12例。男79例，女74例；年齡6個月～14歲，平均（4．6±2．9）歲，≤3歲48例，＞3歲105例；入院時病程2～15d，其中≤7d者102例，＞7d者51例；入院前用過大環(huán)內(nèi)酯類藥物者82例，未用過者71例。患兒平均住院時間（7．58±2．30）d。所有患兒出院時體溫已正常2～3d，咳嗽和（或）喘息等癥狀明顯好轉(zhuǎn)，影像學(xué)診斷為肺炎的141例患兒在出院前均復(fù)查胸片或胸部CT，肺炎均已基本吸收，其中71例較前明顯吸收，70例僅存兩肺紋理增多。

2．2患兒入院時三種方法MP感染檢出率比較

患兒入院首次檢測MP-DNA檢出率為96％（147／153），MP-IgM為71％（108／153），MP快速培養(yǎng)為24％（37／153）。三種方法的檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝175．5，P＜0．05）。MP-DNA的檢出率在＜3歲組和≥3歲組間、不同病程組之間，及入院前是否用藥組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；MP-IgM檢測法在病程＞7d組檢出率高于≤7d組，在不同病程和是否用藥組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；培養(yǎng)法檢出率在≤3歲組明顯高于＞3歲組（χ2＝9．04，P＜0．05），在不同病程組之間及是否用藥組之間的差異則均無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。患兒入院時三種方法檢測同時陽性者22例，MP-DNA和MP-IgM同時陽性者73例，MP-DNA和MP快速培養(yǎng)法同時陽性者11例，MP-IgM和MP快速培養(yǎng)法同時陽性者2例。6例MP-DNA陰性患兒中，有4例MP-IgM抗體陽性，2例MP快速培養(yǎng)法陽性。

2．3三種方法動態(tài)檢測結(jié)果比較

三種方法動態(tài)檢測MP感染結(jié)果見表2。MP-IgM在1個月陽性率達高峰，并持續(xù)至3個月時仍然維持高水平；MP-DNA的陽性率在病程1～3個月時有明顯下降；MP快速培養(yǎng)則在病程1、3個月時因復(fù)檢率過低，而未顯示出變化。

2．4臨床癥狀與檢測結(jié)果的相關(guān)性

在病程1個月MP-DNA檢測78例陽性，75例陰性。在78例陽性患兒中，有28例（36％）持續(xù)存在咳嗽；而在75例陰性患兒中16例（21％）仍有咳嗽。MP-DNA檢測陽性患兒的臨床癥狀（咳嗽和或喘息）持續(xù)陽性率高于陰性患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝3．959，P＜0．05）。以上44例仍有持續(xù)咳嗽的患兒中，28例MP-DNA陽性者，其MP-IgM檢測均為陽性，另16例MP-DNA陰性者，9例MP快速培養(yǎng)陽性；7例MP-IgM抗體仍為陽性。隨訪至3個月時，仍然有4例（3％）持續(xù)存在咳嗽，2例MP-DNA和MP-IgM檢測均為陽性；另外2例MP-DNA均為陰性，但MP-IgM檢測仍為陽性。有30例（20％）患兒在病程3個月隨訪過程中，重新出現(xiàn)發(fā)熱和咳嗽等呼吸道感染癥狀，經(jīng)證實有21例（70％）為非MP感染；2例再次檢測MP-DNA或（和）MP快速培養(yǎng)，由陰性變?yōu)殛栃裕硗?例再次檢測仍持續(xù)為陽性，并經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療有效，證實為MP再次感染。5例再次檢測雖然仍為陰性，但經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療有效，推測可能為MP再次感染。

3討論

MP是兒童肺炎和其他呼吸道感染的重要病原體之一。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)Q-PCR法檢測MP敏感率最高（96％），其次為ELISA法（71％），快速培養(yǎng)法的敏感率最低（24％），與國內(nèi)外報道一致[7－10]。FQ-PCR法是檢測MP-DNA，不管MP是否存活，只要有微量基因拷貝，就可以檢測到。本研究結(jié)果提示，F(xiàn)Q-PCR法不受患兒年齡、病程及用藥情況等多方面因素的影響，可以作為早期診斷MP感染的手段之一。大量文獻表明，ELISA法檢測MP-IgM，主要受患兒年齡、病程、免疫功能以及不同試劑盒等多方面的影響。但本研究表明，在各年齡組中，首次ELISA法檢測MP-IgM的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，考慮與住院患兒病情相對較重、外院治療效果不佳，或本組樣本數(shù)過少等有關(guān)。在病程＞7d時，檢測MP-IgM的陽性率明顯高于≤7d組，故在高度懷疑MP感染時，ELISA檢測最好在病程1周后進行或進行2次檢測，以提高檢出率，避免造成漏診。大量文獻表明，MP感染后其特異性IgM抗體在第2～3周達高峰，2～4個月逐漸消失，但本研究提示隨訪至3個月時MP-IgM陽性率仍保持較高水平。因此，ELISA法檢測時只作MP定性試驗不作滴度檢測是不可取的，可能在某些只產(chǎn)生較低滴度MP-IgM的患兒中無法區(qū)分是近期感染還是既往感染，客觀上容易導(dǎo)致過度治療。本研究中，6例FQ-PCR檢測陰性的患兒中，有4例MP-IgM陽性，提示ELISA法在一定程度上可以彌補FQ-PCR的缺陷，聯(lián)合檢測可以提高MP感染的檢出率[11－13]。MP培養(yǎng)法仍然是目前診斷MP的金標準[14]，傳統(tǒng)培養(yǎng)法由于耗時長，一般不用于臨床。快速培養(yǎng)法是近年來興起的早期診斷MP感染的手段之一，但其易受多方面因素的影響。Ma等[15]認為影響MP陽性檢出率的主要因素為年齡、性別和季節(jié)，尤其氣候和溫度是影響MP檢出率的最主要因素，而檢測前是否使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物對檢出率的影響不大，與本研究結(jié)果相似。

目前，關(guān)于MP感染后進行PCR動態(tài)檢測的文獻報道較少，國外曾報道使用PCR法動態(tài)檢測MP感染后其MP-DNA持續(xù)攜帶的中位數(shù)時間為7周，個別長達7個月之久，即使足夠抗生素治療也不能縮短其攜帶時間[10]。本研究使用FQ-PCR動態(tài)檢測MP-DNA，發(fā)現(xiàn)有60％以上MP患兒MP-DNA轉(zhuǎn)陰時間＞1個月，至3個月時DNA基本轉(zhuǎn)陰，故推測MP-DNA轉(zhuǎn)陰時間應(yīng)該處于病程1～2個月之間，與國外研究結(jié)果相似。提示在治療MP肺炎患兒時，使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素療程應(yīng)該在3～4周以上。在隨訪至病程1個月時，仍然有78例患兒MP-DNA陽性，其中28例存在咳嗽，表明MP感染后臨床癥狀的持續(xù)存在與MP-DNA的持續(xù)陽性可能有關(guān)，也表明部分患兒MP-DNA轉(zhuǎn)陰時間明顯落后于臨床癥狀消失時間。MP感染后，患兒病情輕重差別較大，有些可自愈，有些病情兇險，為難治性肺炎支原體肺炎。目前研究表明，病情輕重主要與機體免疫反應(yīng)過強、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素出現(xiàn)耐藥、混合感染、MP不同表型以及MP數(shù)量多少等有關(guān)[14，16，17]。在本研究中，大多數(shù)患兒經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類藥物正規(guī)治療3周后基本痊愈，未遺留任何后遺癥及其他并發(fā)癥，個別患兒難治性MP肺炎經(jīng)纖維支氣管鏡沖洗后也得到迅速好轉(zhuǎn)。