食品微生物檢測技術(shù)和方式范文

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《生物技術(shù)世界雜志》2015年第四期

1免疫學(xué)的方法

在食品微生物的檢測當(dāng)中免疫學(xué)技術(shù)主要是建立在抗原、抗體特異性結(jié)合的反應(yīng)基礎(chǔ)上,并且以免疫放大技術(shù)為輔,利用病原體刺激生成免疫球蛋白。這種方法的優(yōu)勢在于不需要進(jìn)行樣品選擇性增菌之后分離,就可直接進(jìn)行篩選,具備了靈敏度高的特點(diǎn),按照檢測方法的差異可以分為凝集反應(yīng)、免疫擴(kuò)散反應(yīng)和免疫熒光反應(yīng)等。

1.1凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)從本質(zhì)上來講也是利用抗原、抗體相結(jié)合的原理,將特異性抗體包被于乳膠顆粒之上,進(jìn)而產(chǎn)生了肉眼可見、便于觀察的凝集反應(yīng)。這種方法因其特異性需要獲得較純的細(xì)菌培養(yǎng)物,然后使培養(yǎng)物和致敏乳膠發(fā)生反應(yīng),通常應(yīng)用于大腸桿菌類細(xì)菌中H7和O157的鑒定。

1.2免疫擴(kuò)散反應(yīng)免疫擴(kuò)散反應(yīng)的本質(zhì)是生成一種不溶性的抗原、抗體復(fù)合物,是將抗體放入固體或者液體的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),生成一種肉眼可見的沉淀性物質(zhì),這種反應(yīng)需要在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行,在實(shí)際的食品微生物檢測方法中,應(yīng)用了這一技術(shù)的有VIP免疫擴(kuò)散的試劑條還有Salmonella1-2的TestTM,這一類產(chǎn)品在實(shí)際當(dāng)中應(yīng)用也頗為廣泛。

1.3免疫熒光反應(yīng)免疫熒光學(xué)反應(yīng)的本質(zhì)是一種免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù),利用熒光素對檢測抗原或者抗體進(jìn)行標(biāo)記,而后產(chǎn)生的特異性抗原反應(yīng)能夠形成帶有熒光的抗原、抗體結(jié)合物,在儀器中得到檢驗(yàn)。這種方法在實(shí)際應(yīng)用的過程中按情況不同可以分為直接方法和間接方法。直接方法就是直接在檢測的樣品上滴加已知特異性的熒光標(biāo)記抗血清,在洗滌之后進(jìn)行觀察。間接方法就是將細(xì)菌特異性抗體上滴加在檢測樣本上,經(jīng)過反應(yīng)后再洗滌,然后加入熒光標(biāo)記第二抗體,實(shí)現(xiàn)檢測。這種方法因其熒光性更加有利于觀察,也因其特異性主要適用于沙門氏菌、葡萄球菌、李斯特菌以及單核細(xì)胞增生的李斯特氏菌等方面的檢測。

2分子生物學(xué)法

2.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)是一種體外的選擇性DNA或RNA擴(kuò)增技術(shù)。其根本目的就是將人工無法培養(yǎng)出的微生物進(jìn)行相應(yīng)DNA或者RNA的片段擴(kuò)增,通過檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的含量來快速檢測飼料當(dāng)中存在的致病菌含量。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)簡稱為PCR,可以直接對樣品當(dāng)中的肉毒梭菌、大腸桿菌、乳酸桿菌和痢疾桿菌進(jìn)行檢測,PCR能夠克服核酸定量敏感性低的缺點(diǎn),分析出極為微量的DNA,對任何模板的標(biāo)本都能夠?qū)崿F(xiàn)定量擴(kuò)增及分析。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)克服了基因探針技術(shù)靈敏度不高的缺陷,其中引入的Taq聚合酶還能夠簡化反應(yīng)程序,實(shí)現(xiàn)半自動化。以同位素標(biāo)記基因探針的PCR反應(yīng)為例,這種方法應(yīng)用于水源E.Coli的檢測,能夠使檢測量達(dá)到100%,能夠快速檢驗(yàn)出食品當(dāng)中帶有污染的病原,并能夠保證其準(zhǔn)確性。美國杜邦快利康公司已經(jīng)建立了BAX+病原菌的檢測系統(tǒng),PCR技術(shù)在細(xì)菌檢測方面的應(yīng)用前景十分廣闊。

2.2核酸探針技術(shù)核酸探針本身是一種帶標(biāo)記的DNA特異性片段,核酸探針技術(shù)的原理是利用堿基互補(bǔ)的原則,使核酸探針和目的DNA進(jìn)行雜交,最終以特定方法進(jìn)行標(biāo)記物測定,核算探針技術(shù)大致可以分為非放射性標(biāo)記和放射性標(biāo)記兩大類。核酸探針具有特異性。傳統(tǒng)的檢測方法都是以基因表達(dá)產(chǎn)物為檢測目標(biāo),會受到多種因素的干擾,檢測病毒要在組織培養(yǎng)之后對蛋白質(zhì)的囊膜進(jìn)行檢測,還須采取超低溫的保存技術(shù),但仍然會因其一些編碼蛋白的基因變化,核算探針則避免了這一復(fù)雜的程序,無需改變目的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),更方便應(yīng)用。但是要注意這其中要將RNA除外,因?yàn)镽NA探針不耐受堿處理,需要采取不同的方法來制備出檢測用的RNA。核酸探針特異性主要取決于使用條件和堿基序列,還會受到探針長度的影響,其敏感性主要受標(biāo)記系統(tǒng)和探針本身的控制,延長培養(yǎng)的時間也能夠提高探針靈敏度。在當(dāng)前的核酸探針應(yīng)用過程中還存在一些問題,要實(shí)現(xiàn)更快更簡潔的制備還需要一段時間的研究和探討,逐步克服因待檢菌種繁多而產(chǎn)生的核酸探針制備問題,突破局限性。

3結(jié)語

食品安全問題不僅影響到全人類的健康,還關(guān)系到國家的發(fā)展和穩(wěn)定。近年來基因芯片技術(shù)和自動微生物測定系統(tǒng)的興起,進(jìn)一步推動了社會發(fā)展和科技進(jìn)步,將從根本上變革微生物檢測方法和技術(shù),食品微生物的技術(shù)檢驗(yàn)定會隨著手段的提高和方法的更新逐步邁向更高標(biāo)準(zhǔn)、更高效率和更高精度的層面,為人類食品安全和營養(yǎng)健康保駕護(hù)航。

作者：張葉葉單位：包頭輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院