胃腸道損傷中醫(yī)學(xué)模型建立方法評(píng)價(jià)范文

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摘要：目的：為開展突發(fā)核事件導(dǎo)致急性胃腸道輻射傷的中醫(yī)學(xué)理論及防治研究，探索急性胃腸道輻射損傷適宜模型的制備方法，并評(píng)價(jià)其特點(diǎn)和適用性。方法：SD大鼠80只，隨機(jī)分為16、12、8Gy3個(gè)劑量組及對(duì)照組各20只。以60Co-γ射線對(duì)各照射組進(jìn)行單次全身照射，觀察大鼠的進(jìn)食、排便等生存狀況，以及照射后第5天存活大鼠胃腸道組織學(xué)變化。結(jié)果：8Gy組照射后短期煩躁，隨后精神略差，鏡下觀察小腸黏膜出現(xiàn)絨毛短突等；12Gy組出現(xiàn)鼻周紅赤、亢奮、便干，照射后第3天出現(xiàn)水樣便，拒食，鏡下觀察小腸黏膜糜爛、壞死、部分剝脫，多發(fā)出血灶，兩周大鼠存活率20%；16Gy組出現(xiàn)亢奮、爭搶飲水、便干，第3天出現(xiàn)血水樣便，拒食水，精神淡漠，毛發(fā)枯少，大量死亡，鏡下觀察小腸黏膜廣泛壞死、剝脫，絨毛萎縮、短禿及多發(fā)出血灶，9d內(nèi)全部死亡、運(yùn)用中醫(yī)望診觀察，各組均不同程度呈現(xiàn)熱毒致病的特點(diǎn)和動(dòng)態(tài)演變過程。結(jié)論：以60Co-γ為放射源，單次全身照射大鼠，源皮距3m，劑量率90.65cGy/min，劑量12Gy，可成功制備適宜開展中醫(yī)學(xué)理論及防治研究的急性胃腸輻射損傷模型，適用于進(jìn)行其中醫(yī)病因病機(jī)、證候演變和防治方法的研究。

關(guān)鍵詞：急性胃腸道輻射損傷；中醫(yī)學(xué)模型；建立方法；評(píng)價(jià)

核輻射損傷的救治一直是世界難題，目前尚無有效治療手段[1]。前蘇聯(lián)切爾諾貝利及日本福島核電站事故所造成的嚴(yán)重危害和恐慌，嚴(yán)重影響人類開發(fā)利用核能的安全信心，也使對(duì)防治輻射損傷的關(guān)切與有效防治手段匱乏的現(xiàn)狀之間的矛盾日益突出。中醫(yī)藥對(duì)造血、免疫、胃腸道系統(tǒng)輻射損傷有一定防治效果，但作用機(jī)制尚不清楚[2-4]，療效尚待提高。由于臨床實(shí)踐不足，對(duì)突發(fā)急性輻射損傷的病、因、證、治難有深入而系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)[5]，限制了中醫(yī)藥防治作用的發(fā)揮。為了彌補(bǔ)這一不足，借鑒現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的實(shí)證思維，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，從活體、大體，再到微觀，延伸望診，進(jìn)行系統(tǒng)觀察和分析成為必然選擇，而制備符合中醫(yī)學(xué)研究需要的適宜動(dòng)物模型是前提條件。本實(shí)驗(yàn)旨在探索制備這樣的模型，并評(píng)價(jià)其特點(diǎn)和適用性，為開展急性胃腸道輻射傷的中醫(yī)學(xué)理論和防治研究奠定基礎(chǔ)。

材料與方法

1.動(dòng)物及分組

SPF級(jí)健康2月齡雄性SD大鼠80只，體質(zhì)量（200±20）g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（軍）2012-0004。在SPF級(jí)別動(dòng)物房常規(guī)飼養(yǎng)，觀察3d無異常者入組。用隨機(jī)數(shù)字法將80只大鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組及16、12、8Gy組，各20只。

2.造模方法

輻射源為軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所60Co-γ射線源。大鼠于照射前8h禁食，照射組大鼠固定于特制照射盒內(nèi)，源皮距3m；采用單次全身照射，劑量率90.65cGy/min，劑量分別為16、12、8Gy。對(duì)照組大鼠經(jīng)同樣固定但不照射。

3.取材及標(biāo)本處理

各組隨機(jī)抽取10只大鼠，用于觀察輻射后大鼠生存情況；其余10只，于照射后第5天將各組存活大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈抽血處死、解剖，肉眼觀察各臟器損傷情況后，取出食管、胃、小腸及大腸，觀察漿膜、黏膜及剖切面情況，然后置于10%甲醛溶液中固定24h，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4μm石蠟切片，HE染色。實(shí)驗(yàn)過程中的死亡大鼠以及第14天尚存活的大鼠，均解剖取材觀察。

4.觀察指標(biāo)

①動(dòng)物生存情況；包括進(jìn)食及飲水量、活動(dòng)量、毛發(fā)、球結(jié)膜、大便、體質(zhì)量等，記錄死亡情況；②胃腸道管壁、管腔、黏膜及切面特征的變化；③胃腸道切片HE染色光鏡下特征的變化。

結(jié)果

1.各組大鼠活體特征的變化及動(dòng)物死亡情況

見圖1-圖3，表1。對(duì)照組：體質(zhì)量近于均勻增加、食欲好，毛發(fā)光澤、活躍、大便如常。8Gy組照射后短期煩躁，隨即精神略差，大便不成形，其余無明顯變化；12Gy組出現(xiàn)鼻周紅赤、亢奮、便干，照射后第3天出現(xiàn)水樣便，拒食，精神不振，體質(zhì)量下降明顯；16Gy組出現(xiàn)亢奮、爭搶飲水、便干，照射后第3天血水樣便，拒食水，精神淡漠，體質(zhì)量下降明顯，9d內(nèi)全部死亡。

2.各組大鼠胃腸道管壁、管腔、黏膜及切面特征的變化

對(duì)照組：全胃腸表面光滑、質(zhì)軟，彈性好、顏色呈淡紅色，腔內(nèi)及剖面外觀無異常。照射組：8Gy組小腸及大腸黏膜充血水腫明顯，偶見糜爛、壞死及單發(fā)出血灶，食管輕度充血，胃部無異常；12Gy組小腸黏膜出現(xiàn)糜爛壞死及多發(fā)出血灶，大腸部分黏膜糜爛壞死伴單發(fā)出血灶，食管充血水腫明顯；16Gy組小腸及大腸黏膜均出現(xiàn)廣泛壞死、剝脫，彌漫滲出性出血，食管黏膜局部糜爛壞死，胃部偶見黏膜糜爛。

3.各組大鼠胃腸道病理變化觀察

3.1胃黏膜病理改變

見圖4。對(duì)照組胃部形態(tài)結(jié)構(gòu)較好，無糜爛、出血和炎性細(xì)胞浸潤。照射各組組胃部形態(tài)結(jié)構(gòu)較好，未見黏膜上皮壞死脫落及炎性細(xì)胞浸潤。

3.2小腸病理改變

見圖5。對(duì)照組空腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)較好，無糜爛、出血和炎性細(xì)胞浸潤。照射組8Gy組空腸黏膜出現(xiàn)絨毛短突，大量嗜酸性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤；12Gy組小腸黏膜可見糜爛、壞死，絨毛高度降低，部分可見畸形細(xì)胞形成，絨毛淺層小血管擴(kuò)張充血及出血；16Gy組小腸黏膜上皮廣泛壞死、剝脫，絨毛萎縮變短突，大量畸形細(xì)胞形成，伴絨毛淺層小血管擴(kuò)張充血及出血。

3.3大腸病理改變

見圖6。對(duì)照組胃及大腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)較好，無糜爛、出血和炎性細(xì)胞浸潤。照射組各組胃部形態(tài)結(jié)構(gòu)較好。8Gy組大腸黏膜僅出現(xiàn)絨毛短突，未見壞死糜爛；12Gy組大腸黏膜上皮部分脫落、糜爛、壞死，腺體空泡變性，絨毛淺層小血管擴(kuò)張出血；16Gy組大腸黏膜上皮廣泛壞死、剝脫，腺體破壞，絨毛萎縮變短突，伴絨毛淺層小血管擴(kuò)張充血及出血。

討論

1.中醫(yī)學(xué)對(duì)急性輻射損傷的認(rèn)識(shí)現(xiàn)狀與不足

中醫(yī)學(xué)者對(duì)急性輻射損傷的病因認(rèn)識(shí)基本一致，如于小芳[6]及石鵬展等[7]認(rèn)為射線是“火熱毒邪”傷人；王蕊等[8]認(rèn)為輻射致病與伏氣溫病相似，為熱毒深伏營血分；王磊[9]則認(rèn)為輻射損傷不同于毒邪、火邪而稱為“電離毒”。但以上多基于臨床對(duì)放療患者的觀察，缺少核輻射損傷防治的臨床實(shí)踐，導(dǎo)致對(duì)本病病機(jī)與證候特點(diǎn)的認(rèn)識(shí)不深入、不系統(tǒng)，難以制定有效的防治方案。制備符合開展中醫(yī)學(xué)研究需要的適宜動(dòng)物模型，運(yùn)用中醫(yī)學(xué)的認(rèn)識(shí)方法開展全面的、深入的、動(dòng)態(tài)的觀察分析，必將有助于闡明急性輻射損傷的證候演變及病因病機(jī)，從而指導(dǎo)制定科學(xué)的防治方案。

2.模型制備方法的確定與評(píng)價(jià)

因臨床放療研究的需要，多采用X線建立局部放射性損傷模型，與突發(fā)核事件暴露環(huán)境所致輻射損傷特點(diǎn)不同，不適用于輻射損傷的研究；另外，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腸型放射病模型動(dòng)物存活時(shí)間短、死亡率高，不適于運(yùn)用中醫(yī)學(xué)方法進(jìn)行觀察和研究。課題組模擬核事件暴露環(huán)境，采用60Co-γ射線作為放射源，單次全身照射；并在查閱文獻(xiàn)及前期研究基礎(chǔ)上，設(shè)16、12、8Gy3個(gè)劑量組進(jìn)行劑量篩選；再以適當(dāng)?shù)纳媛屎蜕鏁r(shí)間、中醫(yī)望診特征作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過對(duì)模型生存狀態(tài)、器官和組織形態(tài)的對(duì)比，確定適宜的造模方法。通過觀察分析發(fā)現(xiàn)，8Gy組大鼠活體及解剖病理未呈現(xiàn)胃腸道輻射損傷改變，也不具備中醫(yī)望診特征；16Gy組大鼠活體特征及解剖病理符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腸型放射病診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，但大鼠存活時(shí)間短、死亡率高，不適于開展中醫(yī)學(xué)動(dòng)態(tài)觀察和分析；12Gy組大鼠活體特征及解剖病理符合胃腸道輻射損傷的特征改變，中醫(yī)望診病理特征明顯，動(dòng)物生存率和生存時(shí)間滿足動(dòng)態(tài)觀察需要，因而確定其為中醫(yī)研究急性胃腸道輻射損傷適宜模型的建立方法。具體來說，12Gy組在照射初期表現(xiàn)出鼻周紅赤、亢奮、便干等熱毒致病引起氣血兩燔的特點(diǎn)，其后短期腹瀉改善，精神略振，但隨即出現(xiàn)精神淡漠、拒食水、大量死亡，提示有正邪交爭，短期正氣來復(fù)，但終因正不勝邪，熱邪深入，耗傷腎中真陰，出現(xiàn)大量死亡。綜上所述，雖然動(dòng)物實(shí)驗(yàn)只能局限于望診，但通過體內(nèi)外結(jié)合、宏微觀相參，仍能作出寒熱、虛實(shí)等基本特征的判斷，因而可以作為病因病機(jī)分析和證治研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以60Co-γ作為放射源，單次全身照射大鼠，源皮距3m，劑量率90.65cGy/min，劑量12Gy時(shí)，可以成功制備中醫(yī)研究急性胃腸道輻射損傷的適宜模型，適用于急性胃腸輻射損傷中醫(yī)病因病機(jī)、證候規(guī)律和防治方法的研究。

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作者：馮劍 竇永起 王毓國 徐冉 單位：解放軍總醫(yī)院全軍中醫(yī)研究所