組織病理形態學指標觀察范文

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【摘要】目的：觀察益腎通絡方對實驗性腎病綜合征大鼠腎功能的保護作用。方法：采用尾靜脈注射陽離子化牛血清白蛋白造模。將40只雄性SD大鼠隨機分為模型組、益腎通絡方組、腎炎四味片組、正常對照組，每組10只。造模后予以藥物干預，共給藥4w。采用化學比色法檢測24h尿蛋白，光鏡下切取腎組織進行病理形態學觀察。結果：與模型組比較，腎炎四味片組和益腎通絡方組大鼠24h尿蛋白量明顯降低（P<0.01）；而2組之間比較，益腎通絡方組大鼠24h尿蛋白量降低更顯著（P<0.01）。病理形態學觀察：模型組腎小球呈局灶性節段性硬化，腎小管上皮細胞水腫，部分小管腔內可見蛋白管型，腎間質纖維化；腎炎四味片組以上改變較同期模型組輕，而益腎通絡方組顯著減輕。結論：益腎通絡方能降低大鼠尿蛋白，保護腎功能。

【關鍵詞】腎病綜合征益腎通絡方尿蛋白大鼠

腎病綜合征（nephroticsyndrome，NS）是多種病因引起腎小球基底膜通透性增高，使大量血漿蛋白由尿中丟失而導致的一種綜合征，臨床具有大量蛋白尿、低蛋白血癥、高膽固醇血癥、不同程度的水腫四大特點。腎病綜合征是臨床常見病、多發病，且治療棘手，容易復發，難以鞏固。本實驗采用經典NS模型陽離子化牛血清白蛋白（C-BSA）造模大鼠，通過24h尿蛋白定量測定及病理形態學觀察，研究益腎通絡方降低大鼠尿蛋白、保護腎功能的作用。

1材料與方法

1．1實驗材料

1．1．1實驗動物40只普通級雄性健康SD大鼠，體重（150±20）g，購自廣州中醫藥大學實驗動物中心。合格證號：粵監證字2005A031SCXK（粵）2003-0001。

1．1．2藥品與試劑益腎通絡方湯劑，由湖南中醫附一院藥劑科制備。腎炎四味片，湖北億雄祥瑞藥業有限公司出品，批號：國藥準字Z42021954。C-BSA，磷酸鹽緩沖液（PBS），弗氏不完全佐劑。

1．2實驗方法

1.2.1造模取30只大鼠參照參考文獻［1］方法造模。預免疫：將60mgC-BSA用30mLPBS充分溶解，制成2mg/mLC-BSA溶液，再與等量（30mL）的弗氏不完全佐劑置乳缽內充分混勻為乳白色懸液，使乳化完全。取1mL乳白色懸液，分別一次性在每只大鼠的雙側腋下、腹股溝處作多點皮下注射，觀察1w。免疫：預免疫結束1w后，每只大鼠隔日尾靜脈注射1mL濃度為2.5mg/mL的C-BSA，共3w。整個造模時間共4w。

1.2.2分組與給藥將造模后的30只大鼠，按24h尿蛋白定量結果分為3個區組，然后再隨機分為模型組、益腎通絡方組、腎炎四味片組，每組10只，將10只同批未造模大鼠作為正常對照組。造模4w分組后，益腎通絡方組灌服益腎通絡方湯劑（2.17g/kg），腎炎四味片組灌服腎炎四味片（2.45g/kg）混懸液，模型組和正常對照組每天灌服等容量（1mL/100g）的冷開水，每天灌胃1次，連續給藥治療4w。大鼠每周稱重1次，根據體重調整給藥劑量。

1.2.3指標觀察及檢測方法

1．2．3.124h尿標本檢測用藥前（第4w造模結束時）、用藥后（第8w處死動物前）分別收集24h尿標本，采用化學比色法檢測尿蛋白。

1．2．3.2腎組織病理形態學觀察給藥治療4w后全部大鼠斷頭處死，剖腹取腎臟，切取腎組織分別做HE染色光鏡檢查。光鏡檢查：取大鼠腎臟約2mm大小的皮質，置于10％緩沖中性甲醛溶液中固定，逐級乙醇脫水、石蠟包埋、切片，常規HE染色，用Leica光學顯微鏡觀察并拍照。

1．2.4統計學方法應用SPSS12.0醫用統計軟件包進行數據資料的統計學處理，計數資料用百分比（%）表示，計量資料用平均數±標準差（■±s）表示，組間比較用方差分析。

2結果

2.1大鼠死亡情況

第4w末，模型組和益腎通絡方組各死亡大鼠1只。

2．224h尿標本檢測

結果見表1。

2．3腎組織病理形態學觀察

正常對照組：腎小球、腎小管及腎間質結構正常。模型組：腎小球呈局灶性節段性硬化，近曲小管上皮細胞水腫，管腔狹窄，部分小管腔內可見蛋白管型，腎間質纖維化。腎炎四味片組：部分腎小球呈輕度局灶性節段性硬化，近曲小管上皮細胞水腫，管腔狹窄，腎間質纖維化。益腎通絡方組：部分腎小球擴張充血，近曲小管上皮細胞水腫，炎細胞浸潤。

3討論

腎病綜合征是臨床常見病，在藥物治療方面盡管西藥糖皮質激素及細胞毒藥物有一定的療效，但副作用大、價格較貴、復發率高等缺陷影響了臨床的應用。中藥在該領域中占有非常重要地位，在中醫藥寶庫中挖掘療效確切的藥物和方劑，通過動物實驗，確定其療效，探討其作用機理和作用的物質基礎，是使中藥實現現代化的重要途徑。本研究旨在通過動物實驗對益腎通絡方這一個在臨床使用多年的有效驗方的療效予以進一步的確定，探討該方降低蛋白、利尿的機制，為該方在臨床方面的使用提供更確切的理論和實驗依據。

大量蛋白尿是腎病綜合征的必備特征，蛋白尿主要成分為白蛋白，腎小球基底膜通透性的變化是NS時產生蛋白尿的根本原因。大量白蛋白從尿中丟失，會引起嚴重低蛋白血癥，而血漿白蛋白下降會導致膠體滲透壓下降，從而引起水腫，致體內脂代謝異常，引起高脂血癥。因此大量蛋白尿是引起腎病綜合征其他癥狀的基礎。

益腎通絡方主要由黃芪、當歸、芡實、白術、丹參、山藥組成。現代藥理研究證實黃芪、當歸、芡實能夠促進NS大鼠骨骼肌蛋白合成，改善整體蛋白質代謝紊亂，通過增強白蛋白mRNA轉錄活性，增加肝臟白蛋白mRNA表達，促進白蛋白的合成，提高血漿白蛋白水平；黃芪、當歸可消除蛋白尿，促進肝臟白蛋白RNA的合成，并可直接擴張血管，降低血壓；其中黃芪還可增加抗體，增強免疫，利尿消腫，使水濕之邪從小便排除，同時上調肝臟LDLR的基因轉錄和蛋白表達，減少脂質在血管壁的沉積。亦有研究表明黃芪、白術、當歸、丹參有調節機體免疫功能的作用，其中黨參能增加內臟血流量，抑制家兔血小板聚集，黨參多糖能增加巨噬細胞吞噬功能；山藥對實驗性大鼠食醋脾虛模型有預防和治療作用；柴胡多糖能提高小鼠體液和細胞免疫功能，并使免疫抑制狀態有一定程度的恢復；丹參能活血化瘀，改善器官的微循環，增加血流量，減少血小板聚集，提高組織攝氧能力，并能清除自由基和超氧陰離子，對組織細胞有保護作用，同時還能抗炎、抗纖維化、降血脂［4］。益腎通絡方治療NS的作用機理可能與以上的藥物作用有關，尚待進一步研究。