心肌缺血再灌注損傷大鼠作用范文

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《中草藥雜志》2015年第二十二期

摘要：

目的研究木豆葉提取物對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法采用結(jié)扎冠狀動脈前降支方法制備大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，缺血前10min大鼠ig給予不同劑量木豆葉提取物（125、200、500mg/kg），復(fù)方丹參滴丸為陽性對照，再灌注30min后以II導(dǎo)聯(lián)心電圖監(jiān)測各組大鼠心律失常出現(xiàn)和持續(xù)時(shí)間，進(jìn)行心律失常評分；再灌注90min后測定心肌梗死范圍，HE染色觀察心肌形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果模型組大鼠心律失常出現(xiàn)較早，持續(xù)時(shí)間較長，室性早搏、室速、室顫等發(fā)生率較高，且心律失常在缺血再灌注損傷末期仍非常明顯。與模型組相比，木豆葉提取物能夠降低大鼠缺血性心律失常的嚴(yán)重程度和發(fā)生率，明顯縮小心肌梗死范圍，減輕心肌細(xì)胞腫脹和炎性細(xì)胞浸潤。結(jié)論木豆葉提取物對心肌缺血再灌注損傷大鼠有一定的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：

木豆葉；心肌缺血再灌注損傷；心律失常；梗死面積；室顫

木豆Cajanuscajan(Linn.)Millsp系豆科木豆屬植物，在我國云南、四川、江蘇、廣東、廣西和海南等地有廣泛栽培，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，主要用于治療外傷、燒傷感染和褥瘡等[1]。木豆葉中主要含有牡荊苷、異牡荊苷、木犀草素等多種黃酮類成分[2]，關(guān)于木豆葉治療缺血性疾病有一些相關(guān)報(bào)道，木豆葉對小鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用[3]，木豆葉總黃酮對股骨頭壞死有一定的治療作用，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)血運(yùn)生成相關(guān)[4]；此外，木豆葉中含有的牡荊素對心肌缺血及再灌注損傷具有保護(hù)作用[5]。本研究通過大鼠在體心肌缺血再灌注模型，以心律失常發(fā)生率、心肌梗死面積以及心肌組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化為指標(biāo)，觀察木豆葉提取物對缺血再灌注大鼠心肌的影響，為將木豆葉提取物發(fā)掘?yàn)榉乐涡难芟到y(tǒng)疾病的新藥物提供參考。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動物健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～300g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物許可證號SCXK（粵）2008-0002。

1.2藥品與試劑木豆葉提取物（木豆葉藥材經(jīng)蒸餾水回流提取1h得浸膏，主要含牡荊苷、異牡荊苷、木犀草素等黃酮類成分，制成片劑，每片質(zhì)量0.25g，含牡荊苷0.08mg），批號091103，購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院；復(fù)方丹參滴丸，批號100604，天津天士力制藥股份有限公司；戊巴比妥鈉，批號F20060905，中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司；氯化硝基四氮唑（TTC），美國Sigma公司，磷酸鹽緩沖液（PBS）配成2%溶液備用；多聚甲醛，天津市化學(xué)試劑研究所。

1.3主要儀器HX-200動物呼吸機(jī)、BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司；IX70型Olympus倒置顯微鏡，日本Olympus公司。

2方法

2.1大鼠心肌缺血再灌注模型制備雄性SD大鼠，禁食24h，3%戊巴比妥鈉（1.5mL/kg）ip麻醉，仰臥位固定于手術(shù)操作臺上，氣管插管；小動物呼吸機(jī)維持人工呼吸，頻率70次/min，潮氣量7mL/min；II導(dǎo)聯(lián)心電圖監(jiān)測心電圖（ECG）及心率。分離右側(cè)頸總動脈，血管插管，連接壓力傳感器。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，剪開皮膚、皮下組織及肌肉，于左胸部第3、4肋骨間開胸，撕開心包膜，充分暴露心臟，除假手術(shù)組只開胸不結(jié)扎外，其余各組在位于左心耳根部下2mm、肺動脈圓錐之間用6～0聚丙烯縫線穿線結(jié)扎冠狀動脈前降支，阻斷冠脈血流。結(jié)扎冠狀動脈后迅速將心臟放回胸腔，輕擠胸腔排除胸腔內(nèi)氣體及血液，縫合肌肉及皮膚。結(jié)扎30min后，去掉引線再灌注90min，即為缺血再灌注損傷模型。

2.2分組及給藥將大鼠隨機(jī)分為6組：假手術(shù)組，模型組，木豆葉提取物低、中、高劑量（125、250、500mg/kg）組，復(fù)方丹參滴丸（72.9mg/kg）組，每組10只。木豆葉提取物及復(fù)方丹參滴丸組于結(jié)扎前10minig給藥，體積為1mL，假手術(shù)組不結(jié)扎和模型組ig相同體積的生理鹽水。

2.3指標(biāo)測定

2.3.1心律失常的測定用生物機(jī)能系統(tǒng)持續(xù)監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)ECG。心律失常評分則參考Wang等[6]的評分規(guī)則。記錄再灌注后30min的心律失常發(fā)生情況，評分分值越高，表明發(fā)生室性心律失常的幾率越大。

2.3.2心肌梗死面積的測定再灌注90min后迅速剪下大鼠心臟，PBS沖洗心臟內(nèi)積血，去除血管、脂肪，用濾紙吸干。從心尖到心基底部平行將心臟切成約2mm厚的切片，置于2%TTC中37℃水浴20min。采用BI2000圖像分析系統(tǒng)計(jì)算心肌橫斷面面積及梗死區(qū)面積，梗死范圍以梗死區(qū)心肌面積占心肌橫斷面面積的百分比表示。

2.3.3HE染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化取結(jié)扎部位以下0.5mm處心肌組織，中性甲醛固定，石蠟包埋，切片，從各組取5張石蠟切片，二甲苯脫蠟，HE染色，梯度乙醇脫水，封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織形態(tài)改變。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)均以x±s表示，采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩組間比較用非配對t檢驗(yàn)，多組間均值比較用隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析q檢驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1心律失常發(fā)生情況比較模型組大鼠心律失常出現(xiàn)較早，持續(xù)時(shí)間較長，室性早搏、室速、室顫等發(fā)生率較高，且心律失常在缺血再灌注損傷末期仍非常明顯。木豆葉提取物250、500mg/kg劑量組及復(fù)方丹參滴丸組能明顯降低室性早搏、室速、室顫發(fā)生率及縮短持續(xù)時(shí)間（P＜0.05、0.01）。木豆葉提取物250、500mg/kg劑量組心律失常評分與模型組比較差異顯著（P＜0.05）。見表1。結(jié)果表明木豆葉提取物對缺血再灌注損傷引起的心律失常有明顯改善作用。

3.2心肌梗死范圍比較模型組大鼠的心肌梗死范圍顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01）。木豆葉提取物250、500mg/kg劑量組與復(fù)方丹參滴丸組大鼠心肌梗死范圍顯著低于模型組（P＜0.05），結(jié)果見表2。3.3心肌組織形態(tài)學(xué)變化光鏡下假手術(shù)組心肌纖維結(jié)構(gòu)完整、排列整齊、無變性、核內(nèi)物質(zhì)分布均勻，肌原纖維規(guī)則，肌小節(jié)清晰，間質(zhì)無水腫、出血；模型組心肌細(xì)胞分布紊亂、局部變性、細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，邊界不清，間質(zhì)水腫、出血明顯可見，心肌肌漿呈嗜伊紅染色，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤。木豆葉提取物各劑量組心肌細(xì)胞水腫、變性較模型組減輕，小部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，邊界不清，心肌纖維相對紊亂，部分肌纖維溶解液化，心肌間質(zhì)可出現(xiàn)少量紅細(xì)胞；復(fù)方丹參滴丸組心肌細(xì)胞水腫、變性較模型組明顯減輕，可見輪廓完整的心肌細(xì)胞，部分肌纖維溶解液化，心肌間質(zhì)可出現(xiàn)少量紅細(xì)胞，胞質(zhì)輕度水腫，結(jié)果見圖1。

4討論

心臟缺血后再灌注可能導(dǎo)致致死性的心律失常[7]。再灌注心律失常是指急性缺血心肌的血流得以再次恢復(fù)數(shù)秒所出現(xiàn)的心律失常。本研究觀察結(jié)果顯示，缺血再灌注后心律失常主要發(fā)生在再灌注1h內(nèi)。木豆葉提取物中、高劑量組可以明顯減少室性早搏、室速和室顫的發(fā)生，說明木豆葉提取物可以降低缺血性心律失常的嚴(yán)重程度和發(fā)生率。此外，本研究觀察了再灌注大鼠心肌梗死范圍的變化。相關(guān)研究表明，評價(jià)藥物是否具有保護(hù)心肌作用的金指標(biāo)是心肌梗死范圍的降低[8-9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明木豆葉提取物中、高劑量組可以有效縮小心肌梗死范圍，表現(xiàn)出一定程度的保護(hù)心肌的作用。心肌缺血后的再灌注會引發(fā)心肌超微結(jié)構(gòu)發(fā)生不可逆改變。對心肌超微結(jié)構(gòu)的觀測有助于較為客觀地判斷實(shí)驗(yàn)過程中心肌早期損傷程度。本研究中模型組大鼠出現(xiàn)明顯的心肌梗死現(xiàn)象，光鏡下心肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)損傷較嚴(yán)重，可以見到心肌組織呈區(qū)域性變性壞死，肌絲斷裂溶解等。當(dāng)給予木豆葉提取物后可明顯改善心肌超微結(jié)構(gòu)的改變，光鏡下的心肌組織損傷均較輕。綜合結(jié)果表明木豆葉提取物對大鼠心肌缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)

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作者：孫琳 張濤 柴智 單位：山西中醫(yī)學(xué)院 山西省腫瘤醫(yī)院