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1器材
1.1藥品與試劑注射用紅景天苷，由成都恒基醫(yī)藥科技有限公司提供，純度大于90%；葛根素注射液，北京協(xié)和藥廠生產(chǎn)；注射用鹽酸地爾硫卓（合貝爽），天津田邊制藥有限公司進(jìn)口分裝；垂體后葉素注射液，上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；連二亞硫酸鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，分析純；溴化-(4、5二甲基-2-噻唑基)-2、5二苯基四氮唑(MTT)，美國sigma公司出品；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒及肌酸激酶(CK)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；其它試劑均為市售分析純。
1.2儀器ECG-6511型心電圖機(jī)，日本光電工株式會社出品；紫外可見分光光度計(TU-1800)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司出品；DG-5031型酶聯(lián)免疫檢測儀，華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司出品。
1.3動物SD大鼠，雌雄各半，（220±20）g，清潔級；SD孕大鼠，清潔級；均由河南省實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(豫)2005-0001。
2方法
2.1紅景天苷對垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血的影響［3］SD大鼠70只，雌雄各半，隨機(jī)分為7組。分別為正常對照組和模型組（均給予等量生理鹽水），葛根素組（12.0mg/kg），地爾硫卓組（1.5mg/kg），紅景天苷高、中、低劑量組（24.0，12.0，6.0mg/kg）。以上各組以不同濃度等容積給藥0.5ml/kg。
將大鼠用3％的戊巴比妥鈉以40mg/kg的劑量腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，記錄一段正常心電圖（S點不高于基線為合格，異常者棄去不用）。靜脈給藥5min后尾靜脈注射腦垂體后葉素0.75U/kg［4,5］，給藥容積為1.0ml/kg，注射速度為5～10s。記錄注射后5，10，30s，1，2，5，10，20min的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀察T波和J點的變化。
2.2紅景天苷對心肌細(xì)胞的影響
2.2.1對缺氧/復(fù)氧（Na2S2O4）所致心肌細(xì)胞損傷的影響根據(jù)文獻(xiàn)［6～8］方法體外培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞。
取生長良好的細(xì)胞隨機(jī)分為正常組（給予等量PBS液）；模型組（給予等量PBS液）；葛根素組（終濃度為10-5mol/L）；鹽酸地爾硫卓組（終濃度為10-5mol/L）；紅景天苷高、中、低劑量組(終濃度分別為10-4，10-5，10-6mol/L)。每組6個孔，加入藥物4h后除對照組外均加入Na2S2O4（終濃度為5mmol/L），刺激細(xì)胞1h。缺氧損傷1h后，換去細(xì)胞培養(yǎng)液為正常含血清DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)1h［9，10］。用MTT染色法測定96孔培養(yǎng)板內(nèi)心肌細(xì)胞的活力(A570表示)。取培養(yǎng)液測定其中LDH和CK的含量。
2.2.2對H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響［11］取生長良好的細(xì)胞隨機(jī)分組同“2.2.1”。每組6個孔，加入藥物4h后再加H2O2（終濃度為0.5mmol/L）刺激細(xì)胞4h。用MTT染色法測定96孔培養(yǎng)板內(nèi)心肌細(xì)胞的活力(A570表示)。取培養(yǎng)液測定其中LDH和CK的含量。
2.3統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)用±s表示。采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性比較，兩組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。
3結(jié)果
3.1紅景天苷對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響與對照組比較，給予垂體后葉素后，模型組出現(xiàn)明顯的T波抬高(P<0.01)，持續(xù)30s，隨后T波降低。與模型組相比，紅景天苷高劑量組(24.0mg/kg)于5，10s時能明顯抑制T波抬高(P<0.01)；中劑量組(12.0mg/kg)于5，10s時也可抑制T波抬高(P<0.05)；低劑量組(6.0mg/kg)不能抑制T波抬高。紅景天苷高、中劑量組作用強(qiáng)度與地爾硫卓組(1.5mg/kg)和葛根素組(12.0mg/kg)比較無顯著差異（P>0.05）。結(jié)果見表1。
與對照組比較，給予垂體后葉素后，模型組出現(xiàn)明顯的J點升高(P<0.01)，且持續(xù)至藥后20min尚未恢復(fù)。與模型組相比，紅景天苷高、中劑量組（24.0，12.0mg/kg）能顯著抑制J點升高(P<0.01)，低劑量組6.0mg/kg無明顯作用。紅景天苷高、中劑量組作用強(qiáng)度與地爾硫卓組1.5mg/kg和葛根素組12.0mg/kg比較無顯著差異（P>0.05）。結(jié)果見表2。
表1紅景天苷對垂體后葉素所致心肌缺血大鼠T波的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01，#P<0.05；n＝10
表2紅景天苷對垂體后葉素所致心肌缺血大鼠J點的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01，#P<0.05；n＝10
3.2紅景天苷對乳鼠心肌細(xì)胞的影響
3.2.1對缺氧/復(fù)氧（Na2S2O4）所致心肌細(xì)胞損傷的影響與對照組比較，模型組的細(xì)胞存活率明顯下降，差異有顯著性（P<0.01）；培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量也顯著升高（P<0.01），均表明心肌細(xì)胞活性下降，損傷較嚴(yán)重。與模型組比較，紅景天苷高、中、低劑量組均可顯著升高A570的細(xì)胞存活率，均可顯著降低培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量，說明紅景天苷對缺氧/復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見表3。
表3紅景天苷對缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞損傷的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01；n=6
3.2.2紅景天苷對H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響與對照組比較，模型組的細(xì)胞存活率明顯下降，差異有顯著性（P<0.01）；培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量也顯著升高（P<0.01），均表明心肌細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，活性下降。與模型組比較，紅景天苷高、中、低劑量組均可顯著升高A570的細(xì)胞存活率，均可顯著降低培養(yǎng)液中的LDH和CK的含量，說明紅景天苷具有顯著的抗氧化損傷能力，對氧化損傷的心肌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見表4。
表4紅景天苷對H2O2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響（略）
與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01；n=6
4討論
垂體后葉素誘發(fā)的急性心肌缺血動物模型廣泛應(yīng)用于篩選抗心肌缺血藥物的研究［12］。靜脈注射垂體后葉素后心電圖立刻發(fā)生變化，可分為兩期：第1期，注射后5～20s，T波顯著升高，ST段明顯抬高；第2期，注射后30s至數(shù)分鐘，ST段下移,T波降低、平坦、雙相或倒置。該實驗給予大鼠垂體后葉素后，模型組立刻出現(xiàn)明顯的T波抬高，持續(xù)30s，隨后T波降低；同時出現(xiàn)明顯的J點升高并持續(xù)較長時間，表明大鼠發(fā)生急性心肌缺血。預(yù)先給予藥物后，觀察到紅景天苷對第1期中的T波升高和J點抬高都有顯著的抑制作用，對第2期的T波降低也有一定的抑制作用，表明紅景天苷對垂體后葉素所致的大鼠心肌缺血有較明顯的保護(hù)作用。
研究發(fā)現(xiàn)氧自由基的產(chǎn)生及脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)增強(qiáng)與心肌缺血損傷的病理改變關(guān)系密切。心肌缺血時由于氧自由基生成增加，導(dǎo)致細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能損傷，從而加劇缺血心肌的組織損傷及功能障礙。
本實驗的缺氧/復(fù)氧模型中，Na2S2O4處理細(xì)胞存活率明顯下降，培養(yǎng)液中LDH和CK活性增高，表明心肌細(xì)胞抗氧化損傷能力下降，細(xì)胞發(fā)生了氧自由基損傷；給予紅景天苷后，能夠明顯提高心肌細(xì)胞的存活率，同時顯著降低LDH和CK的含量。LDH和CK是細(xì)胞內(nèi)的酶，當(dāng)機(jī)體細(xì)胞膜受到損傷時，膜的流動性降低，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放量會大大增加。紅景天苷可減少細(xì)胞內(nèi)酶的釋放，表明該藥物可以保持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整，維持細(xì)胞膜的相對穩(wěn)定，保護(hù)細(xì)胞不受氧自由基的損傷。同時LDH和CK含量的減少還可間接增強(qiáng)細(xì)胞清除氧自由基的能力，降低細(xì)胞脂質(zhì)過氧化程度，因而可以保護(hù)缺血/再灌后的心肌細(xì)胞。
過氧化氫(H2O2)是有機(jī)體氧化代謝產(chǎn)物，同時是一種活性氧，大量堆積會對心肌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性，造成心肌細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。本實驗中，紅景天苷可以提高H2O2處理后的心肌細(xì)胞存活率，降低H2O2處理后培養(yǎng)液中LDH和CK的含量，表明該藥物可明顯減少H2O2造成的心肌細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和膜損傷，可以提高心肌細(xì)胞抗氧化損傷能力。