高效液相色譜法測定腎寧顆粒中黃芪甲苷含量范文

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【摘要】目的：建立腎寧顆粒中黃芪甲苷的含量測定方法。方法:采用C18(4.6mm×250mm，5μm)柱,流動相為乙腈水冰醋酸(30:70:1)，檢測波長為202nm。結(jié)果：黃芪甲苷在15-300μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9995，平均回收率為97.95%，RSD為0.40%。結(jié)論：此測定方法準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為制劑的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】腎寧顆粒/化學(xué)合成;黃芪甲苷/標(biāo)準(zhǔn);高效液相色譜法;含量測定

腎寧顆粒由黃芪、黨參等4味中藥組成，具有益氣生陰，升清降濁，利尿通淋等功效，用于腎炎、蛋白尿等病證。為了更好控制其質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法對腎寧顆粒中的黃芪甲苷進(jìn)行了含量測定［1］，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1材料

1.1儀器LC10ATvp高效液相色譜儀(日本島津)；ClassVER6.1工作站(日本島津)；紫外分光光度計(UV2401PC,日本島津)；BS124S電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2藥品與試劑腎寧顆粒由長春中醫(yī)藥大學(xué)制劑室提供；黃芪甲苷對照品(批號:0781200311)購于中國藥品生物制品檢定所，乙腈為色譜純，水為雙蒸水,其他試劑為分析純。

2方法

2.1對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇配制成每1ml含黃芪甲苷0.15mg的溶液，即得。

2.2供試品溶液的制備取本品20g，研細(xì)，精密稱定，加甲醇100ml，稱定重量，加熱回流提取2h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液50ml，水浴濃縮至約5ml，加水15ml，加到D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.4cm，長15cm)上，用水200ml洗脫，棄去水洗脫液，再用30%乙醇200ml洗脫，棄去30%乙醇洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液200ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3檢測波長選擇精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，于200-400nm波長下測定光譜圖，在202nm處有最大吸收峰，檢測波長選定為202nm。

2.4色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈－水－冰醋酸(30:70:1)為流動相；檢測波長202nm；流速1ml/min。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4000［2，3］。

在上述色譜條件下，對腎寧顆粒樣品、黃芪甲苷對照品、陰性對照樣品進(jìn)行測定，結(jié)果表明，黃芪甲苷與雜質(zhì)峰沒有重疊，分離效果較好。

3結(jié)果

3.1黃芪甲苷線性關(guān)系考察精密稱取黃芪甲苷對照品適量,加甲醇分別制成每1ml含黃芪甲苷對照品1.5、7.5、15、22.5、30μg的溶液，分別吸取10μl,注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程y=4856.4x＋199431.6，r=0.9995。黃芪甲苷在15-300μg范圍呈良好的線性關(guān)系。

3.2精密度試驗取同一批供試品，按2.2中方法制備供試品溶液，由不同操作人員，在不同時間，使用不同高效液相色譜儀，測定黃芪甲苷含量。結(jié)果3組樣品含量的RSD為0.78%，表明樣品含量測定方法有良好的精密度。

3.3穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0，2，4，10，16、24h進(jìn)樣，測定峰面積，其黃芪甲苷的RSD為0.52%，表明供試品溶液中黃芪甲苷在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4重復(fù)性試驗取同一批樣品，稱取6份，按照2.2中方法制備供試品溶液，按2.4中色譜條件測定，其RSD為0.34%，表明樣品中黃芪甲苷的含量測定重復(fù)性良好。

3.5回收率試驗取已知含量供試品(0.075mg/g)約10g,6份，分別加入6只具塞錐形瓶中，再精密量取黃芪甲苷對照品溶液(濃度為0.1528mg/ml)5ml,分別加入上述6只錐形瓶中，按2.2中方法制備供試品溶液，按2.4中色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

3.6樣品的含量測定按2.2中方法制備供試品溶液，按2.4中色譜條件對3批樣品進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表2。表1黃芪甲苷回收率(n=2)編號樣品稱

4討論

4.1在黃芪甲苷提取分離條件試驗中，曾采用有機(jī)溶劑萃取，易乳化，黃芪甲苷損失較大，后改用D101大孔樹脂去處雜質(zhì)，含量較高，操作簡便，重現(xiàn)性也較好。

4.2由液相圖譜表明：按處方比例制備缺黃芪的陰性對照樣品，在黃芪甲苷保留時間的相應(yīng)位置上無黃芪甲苷峰出現(xiàn)，陰性對照無干擾，此方法專屬性強，且分離效果好，方法準(zhǔn)確可靠，可用于腎寧顆粒的質(zhì)量控制。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典1部［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.212.

［2］韓建偉,高華宏,喬明.HPLCELSD法測定通脈活血丸中黃芪甲苷的含量研究［J］.湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,9(1):55-56.

［3］楊克迪,李宏,等.固相萃取

高效液相色譜法測定黃芪中黃芪甲苷的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥,2007,18(1):41-42.新晨