電針對(duì)脊髓缺血壞死的影響范文
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本文作者：霍則軍牒軍徐基民單位：北京大學(xué)第三醫(yī)院中醫(yī)科西安市第四醫(yī)院骨科北京博愛醫(yī)院中醫(yī)科
臨床上，在脊髓和主動(dòng)脈瘤等手術(shù)過程中常因脊髓血管結(jié)構(gòu)的破壞和脊髓水腫而導(dǎo)致脊髓缺血，缺血的脊髓組織血液灌注恢復(fù)后其結(jié)構(gòu)和功能不但不能恢復(fù)，反而會(huì)加重原有損傷，甚至出現(xiàn)不可逆性脊髓神經(jīng)元遲發(fā)性死亡的現(xiàn)象，稱為脊髓缺血－再灌注損傷［1］。如何預(yù)防或減輕這種損傷一直是學(xué)者們關(guān)注的焦點(diǎn)。臨床證實(shí)運(yùn)動(dòng)與作業(yè)療法配合電針治療能夠明顯改善外傷性脊髓損傷患者的獨(dú)立生活能力，且能科學(xué)地提高住院效率［2］，MRI顯示針灸可刺激脊髓損傷患者脊髓功能激活［3］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)炎性反應(yīng)在脊髓缺血－再灌注損傷中起著重要作用［4－5］。電針預(yù)處理可降低脊髓缺血再灌注損傷脊髓中丙二醛含量，維持超氧化物歧化酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化［6］；降低脊髓組織細(xì)胞內(nèi)Ca2＋含量，防止Ca2＋超載，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境［7］；以及增強(qiáng)熱休克蛋白90在脊髓前角的表達(dá)，使神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺血產(chǎn)生耐受，起到對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用［8］。本實(shí)驗(yàn)旨在進(jìn)一步探討針刺對(duì)脊髓缺血再灌注損傷保護(hù)作用的機(jī)制。
1材料與方法
1．1動(dòng)物分組健康雄性成年新西蘭家兔30只，西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（陜）2007－001。體質(zhì)量2～2．5kg。隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組、模型組、電針組，每組10只。自由飲水進(jìn)食，12h照明，實(shí)驗(yàn)前禁食12h。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置及處死，均按照西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定。
1．2動(dòng)物模型建立家兔用10％水合氯醛（2mL／kg）耳緣靜脈注射，麻醉滿意后［9］，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，腹部脫毛、消毒、鋪無(wú)菌巾。取腹正中直切口，探查腹腔，暴露腹主動(dòng)脈，鈍性分離，于左腎動(dòng)脈起始部遠(yuǎn)端約1cm處夾閉腹主動(dòng)脈，確定鉗夾點(diǎn)以下腹主動(dòng)脈搏動(dòng)完全消失后開始計(jì)時(shí)。用等滲鹽水紗布覆蓋切口，于阻斷45min時(shí)松開動(dòng)脈夾，逐層關(guān)腹。假手術(shù)組只暴露腹主動(dòng)脈并鈍性分離，但不夾閉，暴露45min后逐層關(guān)腹。術(shù)中嚴(yán)密觀測(cè)動(dòng)物生命體征，術(shù)后動(dòng)物正常飲食。
1．3電針方法電針組在確定鉗夾點(diǎn)以下腹主動(dòng)脈搏動(dòng)完全消失后，取雙側(cè)“足三里”和“曲池”穴，毫針直刺0．5cm。同側(cè)“足三里”和“曲池”分別連以韓氏電針儀（HANS－202型），刺激強(qiáng)度1mA、頻率2Hz，刺激時(shí)間30min。分別于術(shù)后12、24、36h再依照前法予以電針“足三里”和“曲池”穴30min，共4次。
1．4檢測(cè)指標(biāo)動(dòng)物后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分：參照Tarlov評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［10］，分別于動(dòng)物再灌注24、48h對(duì)其后肢運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)分。0分，無(wú)可察覺的后肢活動(dòng)；1分，有可察覺的微弱后肢活動(dòng)但無(wú)法對(duì)抗重力；2分，后肢能對(duì)抗重力但無(wú)法站立；3分，可正常站立、行走，但不能正常跳躍；4分，后肢功能完全恢復(fù)，能正常跳躍。0分和1分均視為截癱。由兩名不了解分組情況的觀察者記錄和評(píng)估評(píng)分，每例均測(cè)試3次，取其平均值。TNF－α、IL－6的測(cè)定：再灌注48h后，各組家兔用10％水合氯醛（2mL／kg）耳緣靜脈注射麻醉，分離并取出腰段以下脊髓，置于－80℃的冰箱中保存，以備制作組織勻漿。按0．1g脊髓組織∶1mLPBS勻漿緩沖液的比例將標(biāo)本勻漿，高速臺(tái)式離心機(jī)（15000r／min）離心10min，取上清保存于－20℃，按照試劑盒說明書，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)脊髓組織TNF－α、IL－6濃度。試劑盒由武漢博士德有限公司提供。
1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理全部數(shù)據(jù)均采用SPSS15．0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x珚±s）表示，采用秩和檢驗(yàn)及重復(fù)測(cè)量方差分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2．1各組家兔行為學(xué)變化所有動(dòng)物術(shù)后2h內(nèi)完全清醒，手術(shù)切口無(wú)紅腫及滲出，無(wú)感染，無(wú)意外死亡。模型組動(dòng)物行為學(xué)評(píng)分在不同時(shí)間點(diǎn)均明顯低于假手術(shù)組（P＜0．05），電針組在不同時(shí)間點(diǎn)均高于模型組（P＜0．05），見圖1。
2．2各組動(dòng)物脊髓組織勻漿中TNF－α、IL－6的含量變化脊髓缺血再灌注48h后，模型組脊髓組織TNF－α和IL－6水平與假手術(shù)組比較明顯升高（P＜0．05），電針后家兔脊髓組織TNF－α、IL－6水平比模型組明顯降低（P＜0．05），見圖2。3討論我們的研究顯示，電針能明顯改善脊髓缺血再灌注損傷動(dòng)物的行為學(xué)評(píng)分，說明電針對(duì)家兔脊髓缺血再灌注造成的損傷有保護(hù)作用，可以減輕再灌注損傷程度。脊髓缺血再灌注損傷的機(jī)制與脊髓缺血后局部離子環(huán)境的改變、細(xì)胞間黏附分子、TNF、IL、氧自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、興奮性氨基酸毒性、Ca2＋超載、細(xì)胞凋亡、一氧化氮等多種因素有關(guān)，其中炎性反應(yīng)發(fā)揮了重要作用，炎性反應(yīng)損傷貫穿于細(xì)胞損傷的全過程［4］。脊髓缺血再灌注后可引發(fā)組織自身炎性反應(yīng)，使炎性細(xì)胞向損傷區(qū)聚集、浸潤(rùn)，進(jìn)一步加重?fù)p傷，導(dǎo)致神經(jīng)元死亡［7］。TNF－α主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是眾多細(xì)胞因子的重要啟動(dòng)因子，并協(xié)同放大炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，介導(dǎo)中性粒細(xì)胞的聚集與黏附，加重脊髓損傷；TNF－α還具有神經(jīng)元壞死與凋亡雙重誘導(dǎo)作用，在脊髓缺血再灌注后明顯升高［11－12］。IL－6是缺血再灌注損傷產(chǎn)生過程中的主要致炎性因子［13－14］，可以引起缺血組織水腫和神經(jīng)元損傷，在脊髓缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用。有實(shí)驗(yàn)顯示［15－16］，抑制炎性反應(yīng)有助于減輕脊髓缺血再灌注對(duì)脊髓組織的進(jìn)一步損害。足三里、曲池是陽(yáng)明經(jīng)合穴，針刺合穴可以直接鼓動(dòng)經(jīng)氣暢行，激發(fā)臟腑之氣，而臟腑乃氣血生化之源，臟腑氣盛則氣血旺，氣血旺則疏通閉阻經(jīng)脈之力強(qiáng)。已有研究表明，電針“足三里”“曲池”能有效抑制急性腦缺血再灌注大鼠TNF－α、IL－6的升高，對(duì)炎性反應(yīng)有抑制作用［17］。
本實(shí)驗(yàn)顯示，在脊髓缺血再灌注損傷48h后家兔脊髓組織中TNF－α和IL－6水平顯著升高，說明脊髓缺血再灌注損傷后受損脊髓組織炎性反應(yīng)增強(qiáng)，炎性反應(yīng)引起白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的緊密黏附，脊髓微循環(huán)障礙及血－脊髓屏障通透性增加，加重了脊髓損傷后缺血、水腫、炎性反應(yīng)病理過程，在繼發(fā)性損傷過程中起到重要作用。電針“足三里”“曲池”后，家兔脊髓組織中TNF－α和IL－6顯著降低，說明電針能有效地抑制脊髓缺血再灌注后脊髓組織TNF－α、IL－6等炎性因子的釋放，抑制脊髓組織炎性反應(yīng)，減輕炎性反應(yīng)導(dǎo)致的脊髓微循環(huán)障礙和缺血、水腫，這可能是電針發(fā)揮對(duì)脊髓缺血再灌注損傷保護(hù)作用的機(jī)制之一。