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乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的世界性傳染病。我國亦為乙型肝炎病毒(HBV)高流行區(qū)，根據(jù)2006年全國乙型肝炎病毒感染血清流行病學(xué)調(diào)查資料，我國一般人群乙肝表面抗原(HBsAg)陽性率為7．18%，5歲以下兒童HBsAg的攜帶率為0．96%［1］。目前HBV分為A～I共9個基因型，各基因型又可分為不同亞型。基因型的分布具有一定的地理特征，且與HBV感染后的臨床表現(xiàn)、預(yù)后及治療應(yīng)答等都有密切關(guān)系，能影響HBV感染自然病史、乙肝e抗原(HBeAg)血清轉(zhuǎn)換、抗病毒藥物耐藥性的發(fā)生和病毒變異的方式等。因此，了解HBV基因型的分布對于疾病的診斷、病情的判斷和治療方案的選擇都有重要意義。目前研究HBV基因分型時，大部分的研究對象來自于臨床，對自然人群感染HBV標本的基因分型進行研究的不多。在對深圳地區(qū)居民乙肝血清流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，對HBsAg陽性血清做進一步基因型分布研究，以初步了解本地區(qū)乙肝病毒基因型的流行特點，為指導(dǎo)乙肝防治工作提供科學(xué)依據(jù)。
1對象與方法
1．1對象按照國家科技重大專項“十一五”課題《艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治》的要求，以深圳市居民作為目標人群，采用多階段整群隨機抽樣法，選擇1歲～59歲深圳戶籍人口和在深圳居住6個月以上的暫住人口作為抽樣對象。
1．2儀器與試劑MultiskanMK3酶標儀(芬蘭);ELx50型洗板機(Bio－Tek公司);7500型熒光PCR儀(ABI公司)。HBV血清學(xué)標志物試劑盒(北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，批號:B20101102);HBVDNA檢測試劑盒(深圳匹基生物工程有限公司，批號:20100501);HBV基因分型PCR檢測試劑盒(廣州華銀醫(yī)藥科技有限公司，批號:20100910)。
1．3方法
1．3．1標本采集在現(xiàn)場問卷調(diào)查的同時，對所有1周歲以上的調(diào)查對象均由當?shù)厣鐓^(qū)醫(yī)院采集靜脈血2ml～4ml，冷藏并及時送往深圳市疾病預(yù)防控制中心，3000r/min離心5min進行血清分離，－20℃保存待檢。對每名被采血人員都遵循知情自愿的原則，將采血目的和用途進行事先告知。
1．3．2HBVDNA載量及血清學(xué)標志物測定采用熒光定量PCR方法檢測HBVDNA，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，靈敏度為500IU/ml。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測乙肝兩對半，均嚴格按照試劑盒說明書操作與判斷結(jié)果。
1．3．3HBVDNA基因分型測定HBV基因分型采用熒光PCR法檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。試劑盒檢測下限為103IU/ml。
1．4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13．0軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析。均數(shù)間比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2結(jié)果
2．1乙肝表面抗原流行情況此次共調(diào)查3771人，其中男性1834人，女性1937人，男、女比例為0．95∶1。調(diào)查人群中HBsAg陽性率為6．68%(252/3771)，整個年齡組中1歲～組最低，40歲～組最高，HBsAg陽性率隨年齡上升有增加的趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)(表1)。HBsAg陽性率男性為7．2%(132/1834)，女性為6．2%(120/1937)，各年齡組HBsAg在男、女之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。此外，調(diào)查對象中具有深圳戶籍1898人，占調(diào)查人群的50．3%;非深圳戶籍1873人，占調(diào)查人群的49．7%。2種戶籍類型人群中，HBsAg陽性率較為接近，分別為6．32%(120/1898)、7．05%(132/1873)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。
2．2HBV基因型與性別的關(guān)系選擇HBsAg陽性樣本252份，在此基礎(chǔ)上運用熒光定量PCR方法測定其病毒載量，共篩選出HBVDNA高于檢測下限(≥1×103copy/ml)標本83例進行基因型分型研究。結(jié)果表明其中79例可檢出基因型，4例未能分型，檢出率為95．2%。其中B型為61例(73．5%)，C型為17例(20．5%)，B+C混合型僅有1例(1．2%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)，但B、C和B+C3種基因型在男、女之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)(表2)。
2．3HBV基因型與年齡分布的關(guān)系B型感染者年齡為33．79歲±13．55歲，C型感染者年齡為37．41歲±14．10歲，兩者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)?；蛐偷姆植荚谀挲g間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)，而且基因型檢出率隨著年齡增長呈現(xiàn)上升趨勢，在15歲～59歲年齡組分布最高，B型檢出率為86．9%，C型檢出率為88．2%(表3)。
2．4HBV基因型與HBeAg、抗－HBeAg陽性率及HBVDNA水平的相關(guān)性分析由于B+C混合型僅1例，因例數(shù)太少未作統(tǒng)計學(xué)分析。C基因型感染者HBeAg、抗－HBeAg陽性率及HBVDNA水平均高于B基因型感染者，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)(表4)。
3討論
深圳是乙肝高發(fā)地區(qū)，也是當?shù)貒乐氐墓残l(wèi)生問題之一。此次乙肝調(diào)查了解到1歲～59歲一般人群HBsAg陽性率為6．68%，5歲以下兒童HBsAg陽性率僅為0．16%，說明深圳乙肝感染情況好于廣東省2006年病毒性肝炎調(diào)查的情況，也好于全國其他城市。結(jié)果顯示，HBsAg陽性率在不同年齡組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，且陽性率隨著年齡增長有上升趨勢。這可能由于20歲～59歲年齡組是社會人群的主流，工作和社交較為廣泛，增加了乙肝病毒感染的機會，是導(dǎo)致該年齡組人群乙肝高發(fā)的主要原因。對此情況應(yīng)該針對人群加大乙肝防治知識的宣傳力度，加強乙肝疫苗的接種。
HBV基因型具有明顯的地理分布特點，目前在我國流行的主要為B型和C型，其中北方以C型為主，南方以B型為主，在新疆等邊遠地區(qū)可有D基因型分布。各地報道的基因型分布特點有較大的差異性，確切分布狀況還不十分清楚。本研究結(jié)果顯示深圳市HBV基因型分布以B型為絕對優(yōu)勢基因型，C型次之，B+C混合型偶有發(fā)生，符合深圳地區(qū)處于南方的地理特點。B、C2種基因型中男性感染者的構(gòu)成比均高于女性感染者，但基因型在男、女間分布差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示基因型別與不同性別之間無明顯相關(guān)性，與其他研究結(jié)果一致。此外，還發(fā)現(xiàn)在不同的年齡階段基因型分布不均衡，在15歲～59歲年齡組分布最高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。研究中采用的熒光PCR方法快速、方便、陽性率高，適合大規(guī)模的臨床和流行病學(xué)調(diào)查，但是由于試劑盒引物的限制，本研究只能檢測B型、C型及B+C混合型。全基因序列測定法是金標準，可實際操作困難、費用較高。對于4例感染者未能分型，可能是其他基因型，可考慮下一步用全基因序列測定法進行分型。
HBVDNA的復(fù)制水平與肝臟炎癥進展程度相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，C型HBVDNA高于B型，提示C型病毒復(fù)制能力強，與Kao等人報道相符，但B、C2種基因型感染者的HBVDNA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，復(fù)制水平不能反映基因型分布，與謝琴秀和孟運運等國內(nèi)學(xué)者的結(jié)論基本相同。目前有許多研究提示，不同的基因型與HBeAg狀態(tài)有一定的相關(guān)性且與臨床轉(zhuǎn)歸相關(guān)。HBeAg是HBV活動性復(fù)制和有傳染性的重要標志，本研究顯示C型感染者的HBeAg陽性率高于B型感染者，但B型、C型在HBeAg+和HBeAb+兩者中均不存在統(tǒng)計學(xué)意義，其原因可能與入選感染者例數(shù)相對偏少，使其統(tǒng)計結(jié)果出現(xiàn)偏倚有關(guān)，也可能實際情況確實如此，這有待進一步擴大樣本深入研究。此外，雖然僅檢測到1例B+C混合型，但發(fā)現(xiàn)感染者的病毒載量明顯高于B型及C型，與單基因型相比，B+C混合型的致病性目前在HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換、抗病毒治療反應(yīng)及預(yù)后方面研究較少，仍需對該型感染者進行進一步研究和探討。
總之，每個地區(qū)的主要基因型以及基因型的地理分布與HBV感染的地方流行性有關(guān)。該研究樣本是來源于深圳地區(qū)整群隨機抽樣人群的采血樣本，是對自然人群中乙肝病毒基因分布情況的研究，在一定程度上能代表深圳地區(qū)HBV基因型的流行情況，為制定針對群體的乙肝防治策略方面可提供更加確切的信息。
作者：陽帆 路滟 張仁利 黃達娜 李玥 吳春利 單位：深圳市疾病預(yù)防控制中心 深圳市重大傳染病監(jiān)控重點實驗室