大鼠腦組織灌注方法的改進(jìn)范文

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《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2014年第六期

1結(jié)果

1．1主要優(yōu)點(diǎn)①可操作性強(qiáng)。手術(shù)操作空間大，出血量少，術(shù)野清晰;可以容易地發(fā)現(xiàn)胸主動脈并將其夾閉，避免了對腹部及下肢的固定;去除針尖的灌注針不易刺破心臟及血管，插至升主動脈，較單純插入左心室進(jìn)行固定，效果明顯提高。②省時(shí)。從胸腔暴露至開始灌注時(shí)間約30s，此時(shí)心臟搏動依然有力;灌注時(shí)間約5min，此時(shí)右心耳流出清亮液體;固定開始后即可發(fā)現(xiàn)大鼠上肢及胡須抽動，約5min后大鼠頸部僵硬，15min完成固定。③省液。灌注液耗量80～100mL;固定液耗量約80mL。

1．2固定后效果大鼠只有頭部及上肢固定并僵硬，腹部和下肢并未固定，鼠尾依然柔軟。固定后，腦組織冰凍切片行免疫熒光檢測，正置熒光顯微鏡下神經(jīng)元細(xì)胞核特異性抗原-Neun表達(dá)清晰，見圖1。

2討論

在有關(guān)腦組織的各種常規(guī)病理形態(tài)、免疫組化等實(shí)驗(yàn)研究中需要對腦組織進(jìn)行固定處理，以保持蛋白類抗原。因?yàn)槟X組織耐氧能力差，抗原易發(fā)生變性，所以需要對腦組織快速固定［5－6］。整塊腦組織浸沒于固定液，因?yàn)楣潭ㄒ翰荒芤韵嗤乃俣妊杆俚竭_(dá)組織的各個(gè)部位，所以固定效果差［7－8］。通過大鼠天然的循環(huán)系統(tǒng)直接進(jìn)行灌注固定，因固定液可快速、均勻地分布到腦組織各個(gè)部位，所以腦組織標(biāo)本制備多采用此法［9－10］。關(guān)于進(jìn)針方式目前主要有2種［11］:①經(jīng)頸總動脈灌注固定，注射針針尖向著頭部的方向注入固定液，液體的出口開在頸靜脈或左心房上;②在心尖部位進(jìn)針;打開胸腔，用針頭插入左心室，同時(shí)右心房開一孔。

第1種方法技術(shù)難度大，成功率低，故常不用;第2種方法操作相對簡便，雖幾經(jīng)完善，但存在操作難度大、耗時(shí)耗液、固定效果不佳等多處不足。陳浩宇等［12］采用夾閉腹主動脈，代小思［13］采用夾閉胸主動脈與主動脈弓交界處等方法均存在操作繁瑣且耗時(shí)較長的缺點(diǎn)，且未對開胸及進(jìn)針方法行具體描述。Gage等［1］詳細(xì)描述了開胸方法，但對全身進(jìn)行灌注固定，存在耗時(shí)、耗液的不足。本方法進(jìn)一步改善灌注固定方法，使其基本完善。創(chuàng)新性主要體現(xiàn)在:改變以往開胸術(shù)式、夾閉胸主動脈及處理灌注針頭。針對上述3點(diǎn)，有關(guān)注意事項(xiàng):①充分游離胸前壁，操作過程中動作輕柔，剪至胸骨角處，暴露心臟及主動脈弓;②夾閉胸主動脈，提起左側(cè)肺臟，可清楚看到位于脊柱左側(cè)的胸主動脈，其右側(cè)為食管，需要注意，避免錯夾;③插灌注針，未經(jīng)處理的輸液管針頭，因過于鋒利，易插破心臟和血管，在該操作中用眼科剪在心尖部剪開的深度要淺，防止剪破心臟，影響灌注固定效果，通過剪口，插入灌注針，動作要輕慢，針尖方向略偏左側(cè)，以免刺入右心房，灌注針進(jìn)入升主動脈后，可明顯看到其位置，稍加固定，防止滑脫。若對心臟進(jìn)行固定，可采用股動脈灌注方法［14］，Kasukurthi等［15］報(bào)道浸泡固定和經(jīng)心灌注固定對周圍神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有明顯差異。總之，該方法針對腦組織等灌注固定具有可操作性強(qiáng)、省時(shí)、省液、提高灌注固定效果的優(yōu)點(diǎn)，值得推廣。

作者：盧文朋栗世方單位：青島大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科