大鼠腦缺血治療范文

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1材料與方法

1.1動物分組健康雄性Wistar大鼠39只，體重200～240g，隨機分為對照組、模型組、治療組，每組13只。

1.2CIR模型復制參考Bannister′s方法建立大鼠腦缺血再灌注動物模型。大鼠1.5%戊巴妥鈉(45mg/kg)腹腔注射麻醉，1%肝素(0.1ml/kg)抗凝，仰臥固定于手術臺上，頸部正中切口，暴露和分離左右側頸總動脈、右頸外靜脈，自右側頸總動脈遠端逆行插管（并結扎近心端），將插管近心端插入右頸外靜脈，夾閉左側頸總動脈，使椎動脈進入腦中血液經引流管進入右頸外靜脈中，造成腦缺血。治療組自腦缺血開始腹腔注射川芎嗪，模型組不給藥，90min后夾閉動、靜脈之間的引流管，開放左頸總動脈夾，導致腦缺血再灌注，再灌注2h后，處死動物、取腦。對照組在麻醉后切開頸部，分離雙側頸動、靜脈后，處死動物、取腦。

1.3標本采集和處理光鏡切片制作：在腦漏斗前后緣將腦組織冠狀切開，取1.5mm厚腦組織,并固定于4%多聚甲醛中，常規脫水和石蠟包埋后切片，切片厚度為5μm，常規甲苯胺藍染色和HE染色。電鏡切片制作：取頂葉皮質1、2區1mm×1mm×1mm大小的組織塊，用2.5%戊二醛固定，PBS緩沖液洗滌和梯度丙酮脫水，EP0812浸透和包埋，LKB4型超薄切片機切片，厚度40～50nm，鈾-鉛染色，在JEM100CXⅡ透射電鏡下觀察，攝像。

1.4統計學方法統計學數據用(±s)表示，采用SPSS10.0軟件進行處理。

2結果

2.1光鏡觀察

2.1.1光學顯微鏡下觀察對照組：大腦皮質神經元核大而圓,核仁清晰,胞質嗜酸性；皮質和紋狀體血管周圍及神經元周圍有狹窄明亮帶，是由于石蠟切片制片時組織收縮造成的人工假象所致。

模型組：皮質部分神經細胞核固縮、著色加深，甚至有些細胞核、質界限不清；細胞周圍和血管周圍水腫帶明顯增寬（見表1）,紋狀體神經細胞水腫也比較明顯，血管周圍及神經元周圍水腫帶厚度明顯增大（見表2），是由于腦組織水腫所致。

治療組：大部分皮質神經元結構清晰,在皮質及紋狀體水腫帶寬度分別縮小（見表1～2）。

表1大腦皮質血管周圍、神經細胞水腫帶厚度（略）

與模型組比較有顯著差異，▲P<0.05

表2大腦紋狀體血管周圍、神經細胞水腫帶厚度（略）

與模型組比較有顯著差異，▲P<0.05

2.1.2尼氏染色對照組：皮質錐體細胞及星形細胞,核呈空泡狀,核仁清晰,尼氏體呈藍色斑塊狀,分布于胞質中；模型組：皮質神經元、尼氏體減少；治療組：尼氏體相對增多,但與正常組相比仍顯著色較淺。

2.2電鏡觀察對照組：大腦皮質有明、暗兩種神經元。神經元核大、圓、核仁明顯，神經元胞質有豐富的內質網、核糖體和較多線立體、高爾基體等細胞器；紋狀體神經元核規整,胞質細胞器豐富；皮質內血管腔圓，內皮細胞核完整，細胞器豐富，基膜清晰。

模型組：大腦皮質許多明神經元核內異染色質增多，胞質水腫，細胞器明顯減少；紋狀體神經元大部分核固縮，嚴重者核膜消失,胞質水腫，細胞器減少；皮質內血管周圍水腫,基膜變窄或結構模糊，膠質膜水腫或消失。

治療組：大腦皮質神經元大部分無明顯水腫現象，胞質細胞器豐富,線粒體、內質網較規整；紋狀體神經元可見核仁,細胞器豐富,細胞周圍有水腫區減少或消失；皮質內血管周圍水腫帶縮小。

3討論

20世紀90年代以來,人們發現腦缺血后神經損傷中除壞死外,還存在神經元凋亡現象［3］。光鏡下HE染色切片發現：模型組大腦皮質部分錐體細胞核膜結構不清晰,著深染色，細胞周圍水腫帶和皮質血管周圍水腫帶明顯增寬。電鏡下觀察，大腦皮質許多明神經元核固縮，異染色質增多，胞質水腫，線粒體腫脹，細胞器明顯減少；皮質內血管周圍水腫，基膜變窄或結構模糊，膠質膜水腫或消失。血腦屏障破壞。有報告［4］大腦中動脈阻塞缺血2h,線粒體輕度腫脹;缺血4h,線粒體腫脹，嵴斷裂，溶解，消失；缺血12h,線粒體損傷嚴重,數量減少,出現胞質空泡化;缺血24h，線粒體減少,消失,胞質空泡化,大量神經元受損；Solenski等［5］也對腦缺血及再灌注引起的線粒體超微結構的改變作了大量研究,同樣發現腦缺血可引起線粒體腫脹,分解,消失,胞質密度增加。劉愛芬等［6］發現缺血再灌注損傷時可能導致線粒體結構變化的因素：膜通透性增強；線粒體內膜各復合物電子傳遞作用的破壞；活性氧產物的增加；釋放促凋亡因子。其中通透性的改變是中心環節，通透性增強，大量小分子物質進入內膜，引起線粒體成分改變并發生腫脹，從而影響呼吸鏈功能，導致氧化磷酸化中斷，三磷酸腺苷(ATP)合成減少，從而引起細胞凋亡［7］。

本實驗結果顯示,光鏡觀察：治療組與模型組比較大腦皮質血管周圍、神經細胞水腫帶厚度和大腦紋狀體血管周圍、神經細胞水腫帶厚度具有顯著性統計學差異（P<0.05），治療組與正常組比較，無顯著性統計學差異（P>0.05）。說明川芎嗪可減輕大腦皮質水腫。電鏡觀察：治療組大鼠缺血側大腦皮質神經元大部分無明顯水腫現象，胞質細胞器豐富,線粒體、內質網較規整，紋狀體神經元可見核仁,細胞器豐富，細胞周圍有水腫區減少或消失，皮質內血管周圍水腫帶縮小等。神經元凋亡減少。從而得出結論：川芎嗪可通過減輕大腦皮質水腫、減少神經元凋亡防治腦缺血再灌注損傷，達到腦保護作用。