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檢測畢業論文范文

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檢測畢業論文

第1篇

 

各院系:

為貫徹落實教育部《學位論文作假行為處理辦法》(教育部令第 34 號)、《教育部關于印發<本科畢業論文(設計)抽檢辦法(試行)的通知>》(教督[2020]5號)等文件精神,進一步提高我校畢業論文(設計)質量,規范管理,科學引用文獻資料,杜絕畢業論文(設計)教學過程中學術不端現象的發生,學校決定對部分 2021 屆本科畢業論文(設計),采用“中國知網”大學生系統進行檢測

現就有關事項通知如下:

一、檢測范圍

按照2021屆本科畢業生人數的5%抽檢畢業論文(設計),覆蓋全部本科專業。具體抽測學生名單由教務處按學生學號統一抽取(見附件1)。

二、檢測方式與要求                                                  1、待檢測論文(設計)的格式應符合我校本科畢業論文(設計)

撰寫要求,學生以 word 文檔形式提交畢業論文(設計)全文電子版。

每篇論文電子版文件名命名格式為“學生姓名_學號_ 論文名稱.doc”,例如“張三_117XXXXXXX_XXX.doc”。

2、各院系將被檢測的畢業論文(設計)全文電子版報送教務處,教務處在三個工作日內將檢測報告反饋給院系本科教學辦公室,并由本科教學辦公室反饋給學生。

三、相關工作安排

1、4月30日(周五)前,各院系將本單位本科生畢業論文(設計)重復率具體要求報教務處備案。

2、5月6日(周四)前,各院系將抽取的畢業論文(設計)全文電子版、附件1(補充論文題目)提交到教務處。

3、重復率檢測結果僅作為評判畢業論文(設計)是否出現學術不端行為的參考依據。畢業論文(設計)文字復制率超過本院系要求的、需經修改再次進行重復率檢測。

4、如對檢測結果有異議,由院系畢業論文工作領導小組報學校教學指導委員會最終審議。

5、教務處將重復率檢測結果通報各院系,對于重復率較高的專業予以重點關注并加大下一年的抽檢比例。

希望各院系廣大師生遵循學術研究的基本規范,進一步加強畢業論文(設計)管理,共同維護我校本科教學良好聲譽,促進學生畢業設計(論文)質量不斷提高。

 

 

 

第2篇

摘要:目的:探討NFκBp65在血管瘤發生、發展及退化過程中的表達狀況及其意義。方法:采用免疫組織化學方法(SP法)和原位雜交的方法,檢測人皮膚血管瘤增生期、退化期及正常皮膚組織及內皮中NFκBp65的表達水平,并利用計算機圖像分析技術測量不同時期血管瘤組織和正常皮膚組織NFκBp65表達的平均光密度和平均陽性面積。結果:增生期血管瘤內皮細胞NFκBp65表達水平高于退化期,差異有顯著性(P<0.01);退化期血管瘤內皮細胞NFκBp65表達水平與正常皮膚組織相比,差異無顯著性(P>0.05)。結論:NFκBp65可能通過調控血管生成因子的表達而促進血管瘤的形成。

關鍵詞:血管瘤;核轉錄因子;

血管生成因子皮膚血管瘤是嬰幼兒常見的良性腫瘤,是以毛細血管內皮細胞增生為主要特征。在血管瘤發生和發展的過程中,血管生成被公認為是其關鍵環節。在眾多血管生成因子中,已證明TGFβ、TNFα、IL1α、IL8、ICAM1等含有NFκB的特異性結合位點,其表達受NFκB的調控,而這其中的一些因子,例如TGFβ、ICAM1等,已被證實與血管瘤的病理演變過程有關。為此我們應用免疫組織化學和原位雜交的方法檢測了同時期人皮膚血管瘤組織中以及正常皮膚組織中NFκBp65蛋白的表達,以探討NFκBp65在血管瘤發生、發展過程中的作用機制。

1材料與方法

11材料

111材料來源收集武漢大學人民醫院病理科1996~2001年皮膚血管瘤存檔蠟塊49例。其中男性26例,女性23例;最小年齡2月,最大年齡68歲,平均年齡30.3歲。這些血管瘤所在的部位有頭皮、前額、眼瞼、耳背、頸部、背部、上臂、大腿、手和足的皮膚等。患者術前均未做任何輔治療。

112材料分組蠟塊切片厚5μm,常規HE染色和免疫組織化學SP法檢測增殖細胞核抗原(PCNA,proliferatingcellnuclearantigen),按Mulliken分類標準并結合PCNA的表達進行分組。增生期血管瘤27例,退化期血管瘤22例,另取瘤組織周圍正常皮膚組織5例作對照。

12試劑與儀器

121主要試劑NFκBp65mRNA原位雜交檢測試劑盒;濃縮型鼠抗人NFκBp65單克隆抗體;即用型鼠抗人PCNA單克隆抗體;即用型兔抗人第Ⅷ因子相關抗原單克隆抗體;即用型SP通用型免疫組織化學試劑盒;DAB顯色試劑盒及多聚賴氨酸。

122主要儀器YWY781型醫用微波儀(250W,50Hz);家用高壓鍋。

13方法

131常規HE染色。

132免疫組織化學SP法檢測PCNA和第Ⅷ因子相關抗原及NFκBp65主要步驟:5μm組織切片常規脫蠟至水,3%過氧化氫處理10min以抑制內源性過氧化物酶活性,PCNA、NFκBp65采用高壓抗原修復,第Ⅷ因子相關抗原采用胃酶消化修復抗原,正常羊血清處理10min以減少非特異性背景,一抗(NFκB,1:200)37℃孵育1h,生物素標記的二抗處理10min,鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶復合物處理10min,DAB顯色液顯色,自來水沖洗終止反應,蘇木精復染,脫水,透明,封片。用PBS代替一抗作為陰性對照組,作為NFκBp65的陽性對照組,人正常皮膚組織中的血管內皮細胞作為PCNA的陽性對照組。

133原位雜交檢測NFκBp65mRNA的表達主要步驟:組織切片常規脫蠟至水,3%H2O2室溫處理10min以滅活內源性過氧化物酶。切片上滴加胃蛋白酶,37℃消化25min。按每張切片加20μl含寡核苷酸探針的原位雜交液,37℃恒溫過夜進行雜交。洗脫后滴加封閉液37℃,20min。滴加SAHRP37℃處理20min。DAB顯色,蘇木精復染,脫水,透明,封片。用PBS代替含寡核苷酸探針的原位雜交液作為陰性對照組,人扁桃體作為陽性對照組。

14結果判斷

141PCNA和第Ⅷ因子相關抗原免疫組織化學結果判斷PCNA以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性反應,第Ⅷ因子相關抗原以胞膜或胞漿出現棕黃色顆粒為陽性反應,陰性對照組除細胞核染成藍外,應無棕黃色反應物。

142NFκBp65免疫組織化學結果判斷NFκBp65以胞核和胞漿出現棕黃色顆粒為陽性反應,陰性對照組除細胞核染成藍外,應無棕黃色反應物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統對NFκBp65mRNA的表達進行定量分析,每張切片隨機選取5個高倍鏡視野(×400),測定每個視野下陽性反應的平均光密度、陽性反應面積和所有細胞總面積,計算陽性面積率。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值。

143NFκBp65mRNA原位雜交檢測結果判斷細胞膜或胞漿呈藍色為NFκBp65mRNA陽性,陰性對照組除細胞核染成藍色外,應無藍色反應物。定量分析方法同上。

15統計學處理

對各組NFκBp65免疫組織化學及原位雜交化學反應陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率作單因素方差分析和q檢驗,檢驗水準α為0.05。

2結果

21HE染色

增生期血管瘤組織中可見條索狀或片狀內皮細胞增生,其間有不規則的內皮間隙和完整的血管腔,內皮細胞核肥大而淡染。退化期血管瘤組織中可見內皮細胞減少,血管腔增大,血管間結締組織增多,內皮細胞核扁平。

22PCNA的表達

增生期血管瘤內皮細胞核肥大,核內彌漫分布棕黃色顆粒,PCNA表達強;退化期血管瘤內皮細胞核扁平,大多數細胞核被蘇木精染成藍色,少數胞核內有少量棕黃色顆粒,PCNA弱表達。

23第Ⅷ因子相關抗原的表達

增生期和退化期血管瘤內皮細胞胞漿內彌漫分布棕黃色顆粒。

24NFκBp65的表達

增生期血管瘤內皮細胞胞漿和部分內皮細胞胞核內有較多棕黃色顆粒,NFκBp65表達強;退化期血管瘤內皮細胞胞漿內有少許或無棕黃色顆粒沉積,胞核內無棕黃色顆粒沉積,NFκBp65表達極弱或無表達;正常皮膚組織血管內皮細胞胞漿內有少許或無棕黃色顆粒沉積,胞核內無棕黃色顆粒沉積,NFκBp65表達極弱或無表達。經單因素方差分析,各組間的差異有顯著性意義(P<0.05)。經q檢驗,增生期組與退化期組、增生期組與正常皮膚組之間平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P<0.01);退化期組與正常皮膚組之間平均光密度及陽性面積率的差異無顯著性意義(P>0.05)。見表1。表1血管瘤不同時期NFκBp65表達的平均光密度和陽性面積率

25原位雜交檢測NFκBp65mRNA的表達

增生期血管瘤內皮細胞胞膜和胞漿有較密集藍色顆粒;退化期血管瘤內皮細胞胞膜和胞漿內無藍色顆粒沉積;正常皮膚組織血管內皮細胞胞膜和胞漿無藍色顆粒沉積。圖像分析結果顯示:增生期血管瘤NFκBp65mRNA表達的平均光密度為0.1563化期血管瘤表達NFκBp65mRNA的平均光密度為0.0617,正常皮膚組織NFκBp65mRNA表達的平均光密度為0.0516;增生期血管瘤表達的NFκBp65mRNA陽性面積率為0.2881,退化期血管瘤NFκBp65mRNA表達的陽性面積率為0.1250,正常皮膚組織NFκBp65mRNA表達的陽性面積率為0.1289。經單因素方差分析,增生期組與退化期組,正常皮膚組與增生期組的差異有顯著性意義(P<0.05)。經q檢驗,退化期組與增生期組、增生期組與正常皮膚組之間平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P<0.05)。退化期組與正常皮膚組差異無顯著性意義。見表2。表2血管瘤不同時期NFκBp65mRNA表達的平均光密度和陽性面積

3討論

血管瘤是一種良性腫瘤,內皮細胞過度增殖和凋亡、血管迅速生長是血管瘤病理組織學的最大特點。近年來研究表明[1~2],血管內皮細胞的增殖和血管形成(angiogenesis)在血管瘤病理演變過程中起重要作用。體外組織培養實驗證實血管瘤的血管內皮細胞比正常組織內的血管內皮細胞更易生長,還能攝取3H胸苷,并可見到血管形成現象,提示血管瘤是一種血管形成性疾病[3]。目前,有關血管瘤形成過程中血管內皮細胞過度增殖的研究報道較少。核轉錄因子NFκB是1986年由美國麻省理工學院癌癥研究中心的Baltimore和麻省Whitehead生物醫學研究所的Sen[4]在成熟B細胞和漿細胞中發現的這種能與免疫球蛋白κ輕鏈輕鏈基因的增強子κB序列(5''''GGGACTTTCC3'''')特異結合蛋白,并能促進κ輕鏈基因的表達,并將其命名為NFκB(NuclearfactorofkappaB)。后來的研究發現,NFκB是由各種同源和異源NFκB/Rel蛋白質亞基組成的二聚體,正常情況下,NFκB/Rel二聚體與抑制性蛋白質IκB的亞基結合形成三聚體,以無活性形式存在于胞漿內[5~7]。許多因素例如IL1、TNFα、LPS、病毒感染、雙鏈RNA和PKC的激活等均可活化NFκB,NFκB被活化后,IκB從NFκB復合體上脫落,IκB迅速被分解,活化的NFκB進入細胞核,與細胞核內特定的靶基因的結構域結合,引起相應基因的轉錄。

本實驗采用免疫組織化學方法對NFκBp65在49例人血管瘤組織中的表達進行了檢測,并結合PCNA的表達對血管瘤進行比較準確的分期。另外由于血管瘤組織中細胞成分較多,本實驗通過檢測第Ⅷ因子相關抗原的表達證實了血管瘤組織中表達NFκBp65的細胞是內皮細胞。實驗結果表明,增生期血管瘤內皮細胞胞漿和胞核均有不同程度NFκBp65表達,退化期血管瘤組織和正常皮膚組織中NFκBp65主要表達于內皮細胞胞漿中。而且增生期血管瘤NFκBp65表達水平高于退化期,差異有顯著性(P<0.01);退化期血管瘤NFκBp65表達水平與正常皮膚組織相比,差異無顯著性(P>0.05)。NFκBp65在血管瘤增生期的表達處于較高水平,而在血管瘤的退化期,NFκBp65的表達降低。國外有研究發現,用NFκB反義核苷酸能夠抑制TNFα誘導的血管生成,同時能抑制TNFα介導的堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和血管內皮生長因子(VEGF)的表達,提示NFκB對bFGF和VEGF的表達也存在潛在的調節作用。故推測,處于增生期的血管瘤組織中NFκBp65處于活化的狀態,從而促進血管內皮細胞的增殖以及血管瘤的形成。

參考文獻

1PollmanMJ,NaumovskiL,GibbonsGH,etal.Vascularcellapoptosis:celltypespecificmodulationbytransforminggrowthfactorbetalinendothelialcellversussmoothmusclecell.circulation,2001,91(15):2019

2JangYC,IsikFF,GibranNS.Nervedistributioninhemangiomasdependsontheproliferativestateofthemicrovasculature.JSurgRes,2000,93(1):144

3宋天寶,邱東.實用免疫組織化學技術.第一版.陜西科學技術出版社,1994,241.

4SenR,BaltimoreD.Multiplenuclearinteractwiththeimmunoglobulinenhancersequences.Cell,1986,46:705716

5石纓.細胞內信號傳遞與轉錄調控的研究進展.國外醫學.分子生物學分冊,1997,19(5):201

第3篇

【關鍵詞】血液粘度;檢測;質量控制

近年來,血液粘度的檢測在臨床上的應用越來越廣泛,但由于血液流變影響因素的多樣性和復雜性,國內至今沒有統一的質量控制。根據筆者長期的工作經驗,參考不同的儀器狀況和國內外的相關文獻,制定了血液粘度檢測的質量控制。

1血液粘度計的選擇

血液粘度計應選用切變率確定、流場均勻的儀器。在使用前,應仔細了解說明書上所注明的儀器的準確率、分辨率、重復性、溫度控制、測定時間等主要指標。

準確度:指所測數值與真值(給定)符合的程度。測定時建議以國家計量標準油為標準,在剪切率200s-1時測定低粘度油(2~3mPa·s),在剪切率1s-1時,測定高粘度油(15~25mPa·s),一般應測定5次以上,在低粘度值時測定值與真值的相對偏差應小于5%,高粘度值時測定值與真值的相對偏差應小于3%。

分辨率:在給定條件下,測定出同一物質兩種狀態下的差異。取壓積在40%~50%范圍內的正常人全血,以自身血漿調節壓積的變化。在高剪切率200s-1時,儀器應能分辨出壓積變化2%時的血液表觀粘度的差異,在低剪切率1s-1時,儀器應能分辨出壓積變化1%時的血液表觀粘度的差異。以上測量應各測5次以上,取平均值。

重復性:指所測數值重復性程度。取同一血樣,壓積在40%~45%范圍內,按照儀器操作規程測量10次,在高剪切率200s-1時,血液表觀粘度的變異系數應小于2%;低剪切率1s-1時,變異系數應小于5%。

血樣用量應根據儀器的樣品用量而定,并應嚴格控制樣品計量的精度。樣品量的過多或過少都將對測量結果產生影響,同時,標本在吸入時不要產生氣泡。

為保證儀器的正常工作和精確性,要做好日常維護和定期保養,并做好保養維護記錄。同時對儀器的準確度、分辨率和重復性應定期標定。

2樣品采集

血液樣品的采集應保持一致。采血時病人取坐位,清晨空腹安靜狀態下,采集肘前靜脈血。采血時應盡量縮短壓脈帶的壓迫時間,針頭刺入血管后立即松開壓脈帶,安靜約5s后開始采血。最好用7號以上的針頭,采血過程中不宜過快。以避免過細的針頭對紅細胞產生一定的剪切力而破壞紅細胞。

3血樣防凝

血液需經抗凝處理后才能用于測量,抗凝劑對血液流變特性的影響不可忽視。最好用肝素或EDTA抗凝。肝素抗凝濃度一般為每毫升全血用20~30國際單位,EDTA為每毫升全血3.4~4.8mmol/L。抗凝劑一般采用固相或液相抗凝劑。如用液相抗凝劑一般放在干燥玻璃管或玻璃瓶中,烘干后使用,烘干溫度一般不超過56℃。采血完畢后,先取下針頭,將血液沿管壁緩緩注入,輕輕搖勻,避免劇烈震動造成溶血。同一批實驗應采用同一批號同種抗凝劑。

4血樣保存

血樣應隨采隨測。一般采血后20min即可用于測量,并應于采集后2h以內完成流變學參數的測定。如需放置應在室溫下(18~25℃)密封保存,不宜放入冰箱,存放時間以不超過4h為宜,否則將影響血液的生理狀態和流變特性。存放血在測量前要充分搖勻。

5血漿制備

以3000~3500轉/min(離心力為1500~2000g)離心30min,提取上層血漿測量血漿粘度。血漿為牛頓流體。

6紅細胞比積測量

常用文氏管。此法不但結果準確,且可同時觀察紅細胞沉降率。將血樣加入,讀取完紅細胞沉降率后,以相對離心力2260g,離心30min,讀取紅細胞柱的高度(以紅細胞上層的黑線薄層為準)。

紅細胞壓積%=紅細胞柱的高度/全血高度×100

紅細胞壓積管必須清潔干燥,電源、電壓及離心機載重均可影響離心機的轉速,因此應安裝穩壓裝置和固定離心機的載重。

7測量溫度

血液粘度的測量應在37±0.5℃下測量。不同溫度的測量結果之間不能比較。外界溫度高時還應考慮液體蒸發等因素對其流變特性的影響。

8測量順序

對于剪切率可調的儀器在測量時應考慮測量順序的影響。測量時應采用一致的測量順序,從低剪切率開始逐漸增加或從高剪切力開始逐漸降低均可。但應注意的是在低剪切率測量時隨著測量時間的增加,血樣中有形成分的沉降對測量結果的影響。兩種測量順序的結果不可互相比較。

每次測定時,樣品池都應清洗干燥,血樣及測量系統應保持恒溫。加樣時不能有氣泡產生。

9測量報告

檢測報告中應給出高剪切力200s-1、中剪切力50s-1、低剪切力1s-1下的血液表觀粘度值及血漿粘度(單位為mPa·s)、壓積、血沉、紅細胞的聚集性、變形性等指標。直接測量數據和經公式計算得到的數據應區別列出,同時要注明測定的溫度、檢測日期及操作人員簽名。

10正常值

血液粘度是血液流變特性的主要參數。正常值具有相對性,沒有普遍適用的正常值。即使采用通用的儀器和標準操作也是如此[1]。各實驗室應根據生物體的個體差異、地區差異、儀器差異等原因,建立自己的正常值。正常值應按男女、年齡等合理分組。當測定值與正常值之差(絕對值)大于2倍正常值標準差時,可以認為是血液粘度異常。

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