食用菌中呋喃丹農藥殘留探究范文

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《分析儀器雜志》2016年第5期

摘要：

建立了凝膠滲透色譜凈化高效液相色譜法檢測食用菌類中呋喃丹農藥殘留量的方法。樣品經乙腈提取，氮氣吹干，環己烷－乙酸乙酯（1∶1，V／V）溶液溶解后，凝膠滲透色譜進行凈化，C18反相高效液相色譜柱分離后，采用液相色譜熒光檢測器進行測定，外標法定量。呋喃丹在0．2～5．0ng／mL質量濃度范圍內呈良好線性關系，相關系數r大于0．999，測定低限為0．01mg／kg。對空白食用菌樣品進行3個濃度水平0．5、1．0和2．0mg／kg的加標回收試驗，呋喃丹的加標回收率為78．3％～97．6％，相對標準偏差（RSD）為3．26％～11．69％。本實驗所建立的方法簡單，靈敏度高，適用于食用菌樣品中的呋喃丹農藥殘留的分析檢測。

關鍵詞：

高效液相色譜；食用菌；呋喃丹；凝膠滲透色譜

1引言

呋哺丹屬于氨基甲酸酯類農藥，是一類應用廣泛的殺蟲、殺螨、除草劑，由于其具有高效、殘留期短的優點，在食用菌種植中廣泛應用［1］。目前國內外對該類農藥殘留有很嚴格的要求，食用菌中最低為0．1mg／kg［2］。因此，建立食用菌中快速、準確、簡便、靈敏度高的呋喃丹殘留檢測方法十分必要。在氨基甲酸酯類農藥殘留分析中，樣品凈化有GPC凈化［3－6］、SPE凈化［7－11］及傳統的液－液分配［12－14］和柱層析法［15］。GPC凈化具有結果重現性好、凈化效率高等優點，為提高工作效率，節省人力，目前越來越多的檢測機構選擇采用GPC凈化等新型凈化方式取代傳統的液－液分配和柱層析法。但目前各標準中的GPC凈化均為離線GPC，即在樣品萃取后，需要實驗人員手動轉移，凈化、濃縮等一系列操作后，轉移至GC／MS進行分析。采用全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯用系統，實現GPC和濃縮同時進行，自動化操作，簡化操作步驟，避免有機污染［16］。本實驗選擇8種有代表性的蔬菜為研究基質，建立了GPC凈化、高效液相色譜檢測的測定方法，方法簡便快速、凈化效果好，可滿足食用菌中呋喃丹殘留的檢測要求。

2材料與方法

2．1儀器與試劑

HPLC－1260液相色譜儀（美國安捷倫公司）配熒光檢測器（G1321B）；全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯用系統（美國J2Scientific公司）；氮吹儀（英國TECHENE公司）；旋轉蒸發儀（德國Heidolph公司）；渦旋混勻器（美國ScientificIndustries公司）；食品粉碎機（中國歐科電器公司）。呋喃丹標準溶液：100μg／mL，購自農業部環境保護科研監測所。乙腈、甲醇（色譜純，Merck公司）；環己烷、乙酸乙酯（分析純，國藥集團）；無水硫酸鈉（分析純，上海久億化學試劑有限公司）；0．22μm有機系濾膜（天津東康科技有限公司）；實驗室用水為Millipore超純水。

2．2試驗方法

2．2．1溶液配制

呋喃丹標準溶液配制：準確移取100μL的呋喃丹農藥標準品，用甲醇做溶劑，配制成10μg／mL儲備液，－20℃保存。使用時根據呋喃丹對應響應值，吸取適量儲備液，用甲醇配制成濃度為0．2ng／mL、0．5ng／mL、1．0ng／mL、2．0ng／mL、5．0ng／mL的系列標準溶液，供高效液相色譜測定。乙酸乙酯－環己烷（1∶1，V／V）：取500mL乙酸乙酯，加入環己烷500mL混勻。

2．2．2樣品處理

①試樣制備采集有代表性的8種食用菌樣品，取可食部分，經縮分后，切碎，充分混勻后放入食品粉碎機粉碎，制成待測樣品。分裝后置于－20℃下保存，待提取。②提取稱取25．00g（精確到0．01g）粉碎的食用菌樣品，加入50mL乙腈，高速勻漿2min后用濾紙過濾。濾液收集到裝有5～7g氯化鈉的具塞量筒中，收集濾液40～50mL，蓋上塞子。劇烈振蕩lmin，在室溫下靜置10min，使乙腈相和水相分層。吸取10mL乙腈溶液在80℃水浴中氮吹干。加10mL已配好的乙酸乙酯－環己烷（50＋50）溶解殘渣，經無水硫酸鈉脫水，待GPC凈化。③凈化GPC凈化條件：流動相乙酸乙酯－環己烷（50＋50，V／V），流速為4．6mL／min，選擇性收集10～20min流出液，經GPC在線濃縮，最后用2．0mL甲醇－水（體積比5∶5）溶解殘渣，收集至進樣瓶，過0．22μm有機濾膜，待測。

2．2．3色譜參考條件

色譜柱：C18（安捷倫，4．6mm×25cm，5μm）；C18預柱（4．6mm×4．5cm）。柱溫：35℃。激發波長285nm；發射波長320nm。流動相：甲醇－水（1∶1，V／V）。

3結果與分析

3．1色譜條件優化

3．1．1流動相的選擇

有實驗研究采用乙腈－水作為流動相，但乙腈毒性較高，對色譜柱損傷大。本實驗以甲醇－水為流動相，以甲醇與水混合溶液的體積比（分別為30∶70、40∶60、50∶50）為條件進行測試，甲醇比例較低時，保留時間延長，峰面積減小，結果表明甲醇－水體積比為50∶50時，樣品的出峰時間、峰形、靈敏度較適宜，與文獻報道一致。呋喃丹標準品色譜圖見圖1。

3．1．2檢測波長選擇

取呋喃丹標準使用液在2．2．3條件下進樣，在波長200～900范圍內對呋喃丹進行多發射和多激發掃描，結果發現呋喃丹在激發波長320nm和發射波長為285nm處最強。故方法選定320nm為發射波長，285nm為激發波長。

3．1．3柱溫的選擇

研究中固定其他色譜條件，將色譜柱溫度從20℃升至40℃，結果顯示呋喃丹保留時間逐漸提前，為有效確保柱效及色譜柱使用壽命，方法采取柱溫35℃。

3．2GPC條件優化

本實驗研究應用GPC作為無損的半自動凈化方法，選用Bio－BeadsS－X3（300mm×10mm）作為填料。選用體積比為1∶1的乙酸乙酯－環己烷為流動相，設定流速為4．6mL／min，分段采集。實驗中，為確定呋喃丹收集步驟，采用加標樣品通過GPC紫外檢測器，紫外掃描數據顯示目標化合物集中在9min至13min，故收集此段時間內提取液（圖2）。實驗中采用草菇樣品加標樣品經GPC凈化，檢測結果顯示，經GPC凈化后雜質干擾成分明顯減少，目標化合物檢測靈敏度提高，同樣其他食用菌樣品也能得到較好的凈化效果。以草菇為例，見圖3、圖4。

3．3線性關系及檢測

限呋喃丹標準工作液系列，按方法的實驗條件進樣，以所得峰面積A對濃度C（μg／mL）進行回歸分析，結果表明在0．2～5．0μg／mL的標準溶液濃度范圍內，呋喃丹濃度與響應值有良好的線性關系（圖4），其回歸方程為：Y＝6．179X－0．2884；相關系數r＝0．9993。根據色譜響應值S／N≥3標準計算，呋喃丹最低檢出濃度為0．01mg／kg。

3．4精密度實驗

以呋喃丹標準溶液5．0μg／mL，連續進樣6次，每次10μL，測得呋喃丹平均峰面積為30．96，RSD為0．108％。

3．5穩定性實驗

以標準溶液5．0μg／mL，每隔2h進樣，每次10μL，測得呋喃丹平均峰面積為30．81，RSD為0．131％。結果表明：供試品溶液在12h內所測得的結果基本一致。

3．6重復性實驗

取同一加標食用菌樣品6份，按2．2．2的方法制成供試溶液。在上述色譜條件下，測定呋喃丹平均含量為1．78μg／kg，RSD為1．58％。

3．7方法回收率實驗

精密稱取陰性樣品進行低濃度的加標回收實驗，結果見表1。該陰性樣品中加標0．50、1．00、2．00μg／kg，回收率在78．3％～97．6％之間，RSD在3．26％～11．69％之間。

4結論

采用全自動凝膠凈化色譜及濃縮聯用系統處理樣品，可以有效去除大部分色素及干擾物，實驗結果表明：本方法具有凈化效果好、檢測限低、操作簡單、實用等特點，有效避免有機污染，可用于市場常見食用菌的呋喃丹農藥殘留量的測定研究，適用于基層單位開展呋喃丹的監測分析，具有廣泛的應用前景。

參考文獻：

［1］楊欣，李鵬，苗虹，等．凝膠滲透色譜－高效液相色譜－線性離子阱質譜法測定膳食樣品中的氨基甲酸酯類農藥殘留［J］．色譜，2014，32（5）：499－505．

［2］蔣施，潘偉，趙穎，等．液相色譜串聯質譜測定蔬菜和食用菌中19種氨基甲酸酯類農藥殘留［J］．農藥，2010，49（8）：587－589．

［3］丁葵英，高彥，于金玲，等．凝膠滲透色譜凈化高效液相色譜－串聯質譜法檢測辛辣蔬菜中咪鮮胺等7種農藥殘留［J］．檢驗檢疫學刊，2013，23（5）：38－43．

［4］楊惠琴，郭德華，李波，等．凝膠色譜串聯質譜法檢測植物性產品中75種農藥殘留［J］．中國衛生檢驗雜志，2007，17（8）：1355－1358．

［5］車金水，余翀天．在線凝膠色譜－氣質聯用法測定蔬菜中的181種農藥殘留［J］．分析實驗室，2014，33：255－266．

［6］沈濤，沈水榮，姚艷玲．凝膠滲透色譜及固相萃取技術測定蔬菜中20種農藥的殘留［J］．上海交通大學學報（農業科學版），2009，27（1）：72－75．

［7］王明泰，牟峻，吳劍，等．蔬菜及水果中77種有機磷和氨基甲酸酯農藥殘留量檢測技術研究［J］．食品科學，2007，28（3）：247－253．

［8］于彥彬，譚丕功，曲璐璐，等．PSA分散固相萃取液相色譜柱后衍生熒光法測定蔬菜和水果中的13種氨基甲酸酯［J］．分析試驗室，2009，28（11）：97－101．

［9］楊元，高玲，景露，等．SPE－GC／MS法測定水中有機磷和氨基甲酸酯農藥［J］．中國測試，2009，35（2）：86－89．

［10］劉長武，劉瀟威，翟廣書，等．固相萃取高效液相色譜法測定蔬菜、水果中的氨基甲酸酯殺蟲劑及其代謝物殘留［J］．色譜，2003，21（3）：255－257．

［11］陳曉紅，仇佩虹，金米聰，等．固相萃取－高效液相色譜柱后衍生法測定水中痕量N－甲基氨基甲酸酯［J］．中國衛生檢驗雜志，2006，16（1）：9－11．

［12］鄧市剛，李增梅，郭長英，等．超高效液相色譜－串聯質譜法測定蔬菜中7種氨基甲酸酯類農藥殘留［J］．食品科學，2011，32（6）：221－224．

［13］曹艷平，王大威．蔬菜水果中有機磷和氨基甲酸酯氣相色譜－質譜選擇離子測定［J］．中國衛生檢驗雜志，2007，17（12）：2125－2126．

［14］趙亞華，何學芳，李勇，等．食品中40種有機磷和氨基甲酸酯農藥多殘留快速檢測技術研究［J］．中國衛生檢驗雜志，2007，17（11）：1938－1940．

［15］胡小鐘，儲曉剛，余建新，等．氣相色譜－質譜法快速篩選測定濃縮蘋果汁中105種農藥殘留量［J］．分析測試學報，2003，22（6）：26－31．

作者:馮曉青 汪怡 王芹 王露 宋鑫 徐瑞 杭學宇 單位:淮安市疾病預防控制中心