玉米胚芽油食用安全性評(píng)估范文

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《食品與藥品雜志》2014年第三期

1方法

1.1小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)體重25~30g小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組：陰性對(duì)照組（給予花生油，15mL/kg體重），陽(yáng)性對(duì)照組（給予環(huán)磷酰胺，40mg/kg體重），3個(gè)試驗(yàn)組的染毒劑量分別為2.5，5.0，10.0g/kg體重。各組灌胃量均為15mL/kg體重，灌胃2次，間隔24h。末次給予受試物6h后處死小鼠，常規(guī)制片。每只小鼠鏡檢1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞（PCE），記錄微核細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核率（即微核細(xì)胞數(shù)/嗜多染紅細(xì)胞，以千分率表示）。同時(shí)觀察200個(gè)PCE，計(jì)算觀察到的正染紅細(xì)胞（NCE）數(shù)，并計(jì)算PCE/NCE比值。

1.2小鼠精子畸形試驗(yàn)體重27~31g雄性小鼠25只，隨機(jī)分為5組：陰性對(duì)照組（給予花生油，15mL/kg體重），陽(yáng)性對(duì)照組（給予環(huán)磷酰胺，40mg/kg體重），3個(gè)試驗(yàn)組的染毒劑量分別為2.5，5.0，10.0g/kg體重。各組灌胃量均為15mL/kg體重，每天灌胃1次，連續(xù)5d。第35天處死小鼠，常規(guī)制片。每只小鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子，記錄畸變類(lèi)型和數(shù)量，計(jì)算精子畸形率（以百分率表示）。

1.3大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)體重70~90g斷乳大鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為花生油陰性對(duì)照組（給予花生油，20mL/kg體重）及玉米胚芽油高、中、低劑量組（劑量分別為20，10，5mL/kg體重），各組灌胃量均為20mL/kg體重，每天灌胃1次，連續(xù)30d。觀察動(dòng)物一般狀況。第30天尾靜脈取血，測(cè)血常規(guī)；此后禁食16h，腹動(dòng)脈取血，進(jìn)行血生化測(cè)定。同時(shí)對(duì)臟器進(jìn)行病理性檢查。試驗(yàn)期間觀察大鼠的一般表現(xiàn)、行為、中毒體征等；每周稱(chēng)重1次，稱(chēng)量2次食物剩余量和撒食量以計(jì)算每周食物攝入量、每周及總的食物利用率；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)所有大鼠均行大體檢查，計(jì)算肝、脾、腎、睪丸等臟器的絕對(duì)重量和臟器系數(shù)，肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器行組織病理學(xué)檢查。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用Excel和SPSS16.0軟件進(jìn)行均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差的計(jì)算和方差分析或秩和檢驗(yàn)，以x±s表示。

2結(jié)果

2.1急性毒性試驗(yàn)14d內(nèi)小鼠未見(jiàn)明顯中毒癥狀、無(wú)死亡。最大耐受量（MTD）試驗(yàn)結(jié)果顯示，該受試物對(duì)兩種性別小鼠的MTD均大于20.0g/kg體重。根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，該樣品實(shí)際屬無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。

2.2遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1Ames試驗(yàn)兩次試驗(yàn)受試物各劑量組回變菌落數(shù)均未超過(guò)自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，亦無(wú)劑量-反應(yīng)關(guān)系，說(shuō)明在加與不加S-9時(shí)該樣品對(duì)鼠傷寒沙門(mén)菌TA97、TA98、TA100、TA102試驗(yàn)菌株均未呈現(xiàn)遺傳毒性。

2.2.2小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，受試物各劑量組微核率與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.2.3小鼠精子畸形試驗(yàn)見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，受試物各劑量組小鼠精子畸形率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01），說(shuō)明該樣品對(duì)小鼠精子無(wú)致畸形作用。

2.3大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)大鼠喂養(yǎng)30d試驗(yàn)周期內(nèi)各試驗(yàn)動(dòng)物總體生長(zhǎng)狀況良好，體重逐周增長(zhǎng)，未見(jiàn)中毒體征及死亡。各試驗(yàn)組動(dòng)物每周體重、進(jìn)食量、食物利用率和體重增重、總進(jìn)食量、總食物利用率與陰性對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。血液學(xué)測(cè)定結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組比較，雄性中劑量組紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)及低劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01或P<0.05），但仍在本試驗(yàn)正常值范圍內(nèi)，尚不認(rèn)為存在生物學(xué)意義。其他劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。血液生化學(xué)測(cè)定結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組比較，雄性低劑量組尿素氮差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但仍在本試驗(yàn)正常值范圍，不認(rèn)為存在生物學(xué)意義。其他各劑量組各指標(biāo)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)所有動(dòng)物均行大體檢查，肝臟大小正常、顏色新鮮、表面光滑、質(zhì)地柔軟、邊緣銳利、無(wú)結(jié)節(jié)包塊等。取出兩側(cè)腎和腎上腺，對(duì)準(zhǔn)腎門(mén)將腎以最大剖面剖開(kāi)，暴露腎盂，皮質(zhì)和髓質(zhì)厚度、顏色正常，界限清晰。未見(jiàn)胃腸黏膜出血、潰瘍、增厚、淋巴濾泡增生等病變。脾切面馬氏小體清晰可見(jiàn)。睪丸/卵巢形態(tài)、大小正常。各試驗(yàn)組動(dòng)物的肝、腎、胃、腸、脾及卵巢/睪丸組織未見(jiàn)明顯異常。與陰性對(duì)照組比較，肝、脾、腎、睪丸等器官的重量和臟器系數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。取高劑量組和陰性對(duì)照組雌、雄動(dòng)物的肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查：對(duì)照組和高劑量組動(dòng)物均未觀察到胃、小腸、脾臟、睪丸、卵巢等有病理改變。少數(shù)動(dòng)物可觀察到肝臟、腎臟有輕微病理學(xué)改變，但這些病理改變程度較輕且無(wú)組間特異性分布，考慮與動(dòng)物質(zhì)量有關(guān)，不認(rèn)為試驗(yàn)組出現(xiàn)有意義的病理學(xué)改變。

3討論

根據(jù)我國(guó)保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)規(guī)范推薦的遺傳毒性檢測(cè)試驗(yàn)組合，本研究選取了急性毒性試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)、大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)。急性毒性試驗(yàn)是經(jīng)口1次給予或24h內(nèi)多次給予受試物，觀察動(dòng)物短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，包括致死和非致死的參數(shù)指標(biāo)。Ames試驗(yàn)是目前檢測(cè)基因突變最常用的方法之一，其原理是檢測(cè)受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門(mén)菌組氨酸缺陷型菌株回復(fù)突變成野生型的能力，許多致癌劑的生物轉(zhuǎn)化是依賴(lài)細(xì)胞內(nèi)微粒體混合功能氧化酶系完成的。大鼠肝S-9是常用的體外活化系統(tǒng)，其主要有效成分為混合功能氧化酶系統(tǒng)，不加S-9混合液得到陽(yáng)性結(jié)果，說(shuō)明受試物是直接誘變劑，加S-9混合液得到陽(yáng)性結(jié)果，說(shuō)明受試物是經(jīng)S-9活化后產(chǎn)生致突變性。微核是常用的遺傳毒理學(xué)指標(biāo)之一，代表染色體或紡錘體的損傷。這種損傷會(huì)因細(xì)胞受到外界誘變因子的作用而加劇，微核產(chǎn)生的數(shù)量又與誘變因子劑量的強(qiáng)弱成正比，因此，可用微核出現(xiàn)的頻率評(píng)價(jià)環(huán)境誘變因子對(duì)生物遺傳物質(zhì)的損傷。小鼠精子形態(tài)受基因控制，精子畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此，形態(tài)改變提示有關(guān)基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的改變。大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)主要觀察較長(zhǎng)期飼喂不同劑量的受試物引起有害效應(yīng)的劑量、毒作用性質(zhì)和靶器官，估計(jì)亞慢性攝入的危害。當(dāng)未觀察到有害作用的最大劑量達(dá)到人可能攝入量的一定倍數(shù)時(shí)，則可以此為依據(jù)外推到人，為確定人食用的安全劑量提供依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，接受急性毒性試驗(yàn)的14d內(nèi)小鼠未見(jiàn)明顯中毒癥狀、無(wú)死亡，且兩種性別小鼠對(duì)玉米胚芽油的最大耐受量均大于20.0g/kg體重。根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，該樣品屬無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果顯示，玉米胚芽油對(duì)小鼠沒(méi)有致畸、致突等遺傳毒性作用。大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)期內(nèi)各試驗(yàn)組動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育良好，體重增重、食物利用率、臟器重量和臟器系數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)均在本試驗(yàn)正常值范圍。試驗(yàn)組血常規(guī)及血生化各指標(biāo)均在本試驗(yàn)正常值范圍。病理組織學(xué)檢查試驗(yàn)組被檢臟器未見(jiàn)有意義的病理學(xué)改變。毒理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果認(rèn)為該玉米胚芽油是安全的。

作者：馮文娟許美艷石勱李峰盧連華單位：山東省五蓮縣疾病預(yù)防控制中心 航天中心醫(yī)院 中日友好醫(yī)院山東西王食品有限公司山東省疾病預(yù)防控制中心