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摘要建立了培坤膠囊中橙皮苷的二次薄層色譜—熒光分析法。即先以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展開，再以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水(20∶10∶1∶1)上層溶液展開；熒光測定條件為λex＝310nm，λem＝510nm。該法可有效地排除共存組分的干擾，并提高檢測的靈敏度。橙皮苷在1μg～11μg范圍具有良好的線性，r＝0.9977。
關(guān)鍵詞：培坤膠囊；橙皮苷；二次薄層層析；熒光分光光度法
培坤膠囊是在古方培坤丸的基礎(chǔ)上由當(dāng)歸、黃芪、杜仲、白術(shù)、陳皮等21味中藥制成，有補氣血、滋肝腎等功效。為了更好地控制其質(zhì)量，我們建立了二次薄層層析—熒光分析法測定其中橙皮苷含量。
1儀器與試藥
1.1儀器ATTD型紫外燈；RF-540型熒光分光光度計(日本島津)；TGL-16C型高速離心機(上海)。
1.2試藥橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)；硅膠G(青島海洋化工廠)；培坤膠囊樣品(西安正大制藥有限公司，批號971101，971102，971103)。
2方法與結(jié)果
2.1對照品及供試品溶液的制備取橙皮苷對照品適量，用甲醇制成0.61mg/ml溶液作為對照品溶液。另稱取培坤膠囊內(nèi)容物3g，置錐形瓶中，加甲醇20ml超聲處理30min，濾過，再用甲醇洗滌兩次，合并，濾液濃縮并定容至10ml作為供試品溶液。同法制備缺陳皮空白樣品溶液。
2.2薄層色譜條件〔1〕及定性鑒別取硅膠G適量，加0.3%CMC-Na溶液常規(guī)制板，用前105℃活化1h。吸取上述對照品溶液、供試品溶液及空白樣品溶液各10μl，點于同一塊薄板，首先以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展開約4cm，取出，晾干，再以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水(20∶10∶1∶1)上層溶液展開，取出，晾干，噴以10%氯化鋁甲醇溶液，放置30min，置365nm紫外燈下檢視，橙皮苷呈現(xiàn)黃綠色熒光斑點(Rf＝0.19)，空白樣品相應(yīng)位置未見此斑點(圖1)。
a-橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品b-供試品c-缺陳皮空白樣品
2.3熒光條件的選擇參考有關(guān)文獻(xiàn)〔1〕，在激發(fā)波長為310nm，發(fā)射波長為500nm下進(jìn)行測定，并考察了不同濃度鹽酸(圖2)及不同濃度三氯化鋁顯色液(圖3)對橙皮苷熒光測定的影響。結(jié)果確定采用0.2%鹽酸，1.5%三氯化鋁溶液。
2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取橙皮苷對照品溶液2，4，8，12，16，18μl點于同一塊硅膠G板上，按2.2項下操作，刮取橙皮苷斑點，加入甲醇1ml，振搖10～20min后離心，取上清液0.8ml，加0.2%鹽酸1ml，1.5%三氯化鋁顯色液5ml，放置5min，在激發(fā)波長為310nm、發(fā)射波長為500nm的條件下測定熒光強度，以熒光強度(I)對橙皮苷的量(m)回歸得方程：I＝1.360m－0.041(r＝0.9977)，表明橙皮苷在1μg～11μg間有良好的線性關(guān)系。
2.5樣品含量測定精密吸取上述對照品及供試品溶液各10μl，點于同一塊硅膠G薄層板上，按2.2項下操作，以外標(biāo)法計算橙皮苷的含量。結(jié)果培坤膠囊中橙皮苷的含量為0.32%～0.33%。將971103號樣品連續(xù)測定6次，RSD為1.05%。
2.6回收率試驗精密稱取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品約50mg，加甲醇50ml溶解后精密吸取5ml，加入已知濃度的樣品中；揮去甲醇后依法處理、測定，結(jié)果平均回收率為99.0%，RSD＝1.04%。
3討論
陳皮為培坤膠囊的主藥，其主要有效成分為橙皮苷，文獻(xiàn)報道橙皮苷的含量測定方法有薄層掃描法〔2〕、高效液相色譜法〔3〕、薄層-紫外分光光度法〔4〕等。TLC法較為經(jīng)濟實用，但培坤膠囊由多味藥制成，通常TLC條件下橙皮苷不能很好地與其他成分分離。文中二次薄層層析能夠有效地排除干擾，提高分析的準(zhǔn)確度。
參考文獻(xiàn)
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