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摘要：目的摘要：研制一種新型有效的牙周抗菌制劑，以代替常規(guī)用藥。方法摘要：用瓊脂稀釋法做幾種口腔常見菌對大黃總蒽醌和大黃酸標準品的敏感性試驗。甲殼胺對口腔常見菌的凝集試驗。用齲活性試驗做甲殼胺對變形鏈球菌的解吸附試驗。用鋼管法做大黃滴劑對口腔常見菌的抑菌試驗。結(jié)果摘要：大黃總蒽醌和大黃酸標準品對口腔常見菌都有不同程度的抑菌功能。甲殼胺除對齒雙歧外，對其他口腔常見菌均有凝集功能。甲殼胺對變形鏈球菌有解吸附功能。成品大黃滴劑對口腔常見菌有抑菌功能。結(jié)論摘要：大黃滴劑有明顯抑菌功能。

牙周病是由牙菌斑引起的牙齒四周組織的慢性破壞性疾病，選擇有效的抗菌藥物控制引起牙周病的菌斑，收到明顯療效。但目前治療牙周病的抗菌藥物多局限于抗生素類的化學制劑，而對中藥的探究甚少。我們利用中藥大黃的明顯抗厭氧菌功能和甲殼胺配伍制成中藥大黃滴劑，旨在提出一種新的牙周抗菌制劑。現(xiàn)就其主要實驗室探究報告如下。

1材料和方法

1.1標準菌株和培養(yǎng)條件

1.1.1標準菌株選用北京口腔醫(yī)學探究所微生物室保存的國際標準菌株。牙齦卟啉菌P381和ATCC33277，粘性放線菌ATCC19246，中間型普氏菌ATCC25261，具核梭形菌ATCC10953，伴放線放線桿菌Y4，變形鏈球菌c型和d型，中間型鏈球菌ATCC27335，齒雙歧ATCC27534。

1.1.2培養(yǎng)條件變形鏈球菌和中間型鏈球菌在MSA培養(yǎng)基中微需氧培養(yǎng)2天，余菌株在CDC培養(yǎng)基中厭氧培養(yǎng)5天。

1.2主要試劑

1.2.1大黃總蒽醌北京制藥探究所提供。

1.2.2大黃酸標準品中國藥品生物制品檢定所，0757-9703。

1.2.3甲殼胺取比度0.78粘度45cps灰分0.8%。

1.2.4大黃滴劑北京口腔醫(yī)院藥房配制。

1.3實驗方法

1.3.1大黃對牙周致病菌的抑菌試驗取大黃總蒽醌和大黃酸標準品，用瓊脂稀釋法［1］做細菌敏感性試驗。

1.3.2甲殼胺的凝集試驗將各菌接種在相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，內(nèi)含一定濃度的甲殼胺，培養(yǎng)后觀察各菌生長情況。

1.3.3甲殼胺對變形鏈球菌的解吸附試驗用齲活性試驗方法，將標準板浸入含變形鏈球菌的液體培養(yǎng)基中，經(jīng)48小時培養(yǎng)后，將有變形鏈球菌附著的板再浸到含甲殼胺的溶液中，連續(xù)觀察附著的變形鏈球菌從板上的脫落情況。

1.3.4大黃滴劑的體外抑菌實驗取成品大黃滴劑，按倍比稀釋的原則，稀釋為原液的100%、50%、25%、12.5%和6.25%。用鋼管法分別加入到各菌的菌平皿中，培養(yǎng)后觀察抑菌結(jié)果。

2結(jié)果

2.1大黃抑菌試驗測定結(jié)果大黃總蒽醌和大黃酸標準品的抑菌效果大致相同，除對變形鏈球菌、中間型鏈球菌和伴放線放線桿菌無功能外，對口腔其他常見菌均有功能。對牙齦卟啉菌ATCC33277和中間型普氏菌ATCC25261功能最強，大黃總蒽醌濃度在1.4μg/ml，大黃酸標準品濃度在4.17μg/ml時都有抑菌功能。

2.2甲殼胺凝集結(jié)果甲殼胺除對齒雙歧ATCC27534無凝集功能外，對口腔其他常見菌都有不同程度的凝集功能。

2.3甲殼胺解吸附試驗結(jié)果甲殼胺對附著的變形鏈球菌有一定解吸附功能，這一功能的最有效濃度是5mg/ml。應(yīng)用甲殼胺后10min開始起功能，60min后使附著的變形鏈球菌完全脫盡。

2.4大黃滴劑的體外抑菌實驗結(jié)果大黃滴劑對口腔常見菌有明顯抑菌功能，即使稀釋至原液的1/16仍有功能。

3討論

在我國應(yīng)用大黃治療疾病已有悠久的歷史。大黃有廣譜抗菌功能，大黃中起抗菌功能的有效成分為蒽醌衍生物，而蒽醌衍生物中有抑菌功能的成分為大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素。王文風等［2］報告，大黃蒽醌衍生物對臨床常見的100株厭氧菌有較強的抑制功能。我們利用大黃的明顯抗厭氧菌功能，尤其是對脆弱類桿菌、產(chǎn)黑色素類桿菌敏感的特性，制成中藥抗菌藥物，治療牙周疾病。

用瓊脂稀釋法做幾種口腔常見菌對大黃總蒽醌和大黃酸標準品的敏感性，發(fā)現(xiàn)二者的抑菌效果基本相同，對牙周致病菌都有不同程度的抑制功能，尤其是對牙齦卟啉菌ATCC33277和中間型普氏菌ATCC25261，即使?jié)舛仍?.4μg/ml都有抑菌功能。但大黃對變形鏈球菌、中間型鏈球菌和伴放線放線桿菌無抑菌功能，說明對由伴放線放線桿菌引起的青少年牙周炎可能無功能，而對厭氧菌引起的牙周炎功能較好。

甲殼胺做為一種生物多糖高分子物質(zhì)，因其可溶性、成膜性、可吸收性和生物相容性，在藥劑中作為填充劑、黏合劑、薄膜包衣材料、緩釋控釋材料等在醫(yī)學上探究很多［3］。近年來，在口腔方面的應(yīng)用也漸漸受到重視。甲殼胺除對齒雙歧無凝集功能外，對其他口腔常見菌均有凝集功能。這樣，甲殼胺就可把牙周袋內(nèi)的細菌凝集沉淀在牙周袋的局部，然后局部針對性用藥，而無需在整個牙周袋內(nèi)達到高濃度。這是甲殼胺做為緩釋控釋制劑的特性。

甲殼胺對變形鏈球菌有解吸附功能，這就彌補了大黃對鏈球菌抑菌功能不甚理想的缺點，使變形鏈球菌從牙面上脫落，抑制了菌斑在牙面上的附著。變形鏈球菌是牙頸部齦上菌斑的重要組成，而齦上菌斑的存在又為齦下菌斑的形成創(chuàng)造條件。所以，消除齦上菌斑是防止齦下菌斑形成的前提，甲殼胺對變形鏈球菌的吸附功能，正是抑制齦上菌斑的形成，這就不利于牙周病的發(fā)生。實際上，甲殼胺對變形鏈球菌的解吸附功能和凝集功能是相輔相承的。

大黃酸標準品和大黃總蒽醌的抑菌功能大致相同，但大黃酸標準品提煉困難，價格昂貴。考慮到大黃酸提取過程的復雜性和患者對藥物價格的接受能力，我們用大黃總蒽醌代替大黃酸標準品做為抑菌劑，甲殼胺為輔料，制成大黃滴劑，體外抑菌實驗證實對口腔常見菌均有抑制功能。

綜上，大黃滴劑經(jīng)實驗室探究證實有明顯抑菌功能，還有待于進一步觀察其臨床療效。