乳腺消郁顆粒的質(zhì)量控制研究范文

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《中成藥雜志》2015年第六期

1薄層色譜鑒別

1.1川芎、當(dāng)歸藥材薄層色譜鑒別取本品3批和缺川芎、當(dāng)歸藥材的陰性樣品各2包(約24g)，加水200mL溶解，乙醚萃取3次，每次150mL，合并萃取液，濃縮蒸干，殘?jiān)右颐?mL溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液;取川芎0.1g，當(dāng)歸0.1g，分別加乙醚15mL溶解，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右颐?mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB)，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液10μL以及對(duì)照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑展開，取出后晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果表明，在相應(yīng)的位置上，供試品色譜在與對(duì)照藥材顯示出相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾，見圖1。

1.2淫羊藿藥材薄層色譜鑒別取本品3批和缺淫羊藿藥材陰性樣品各2包(約24g)，充分研磨，加乙醇240mL，50℃水浴溫浸30min，濾過(guò)，蒸干，加乙醇3mL溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液;取淫羊藿藥材粉末0.1g，加乙醇10mL溶解，50℃水浴溫浸30min，濾過(guò)，蒸干，加乙醇3mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液;精密稱取淫羊藿苷5mg，置于50mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB)，吸取10μL供試品溶液和陰性樣品溶液、20μL對(duì)照藥材溶液、20μL對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑展開［4］，置紫外燈(365nm)下檢視。結(jié)果表明，在相應(yīng)的位置上，供試品色譜與對(duì)照品顯示出相同的暗紅色斑點(diǎn)，然后噴以三氯化鋁試液再進(jìn)行檢視，結(jié)果顯示出相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾，見圖2。

1.3鎖陽(yáng)藥材薄層色譜鑒別取本品3批和缺鎖陽(yáng)藥材陰性樣品各2包(約24g)，充分研磨，加乙酸乙酯240mL溶解，超聲30min，濾過(guò)，濾液蒸干，加乙酸乙酯3mL溶解，作為供試品溶液和陰性樣品溶液;精密稱取熊果酸對(duì)照品5mg，置于10mL量瓶中，加甲醇至刻度線，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.5mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版，一部附錄VIB)，吸取20μL供試品溶液和陰性樣品溶液、10μL對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑展開［4］，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至顯紫紅色斑點(diǎn)。結(jié)果表明，在相應(yīng)的位置上，供試品色譜與對(duì)照品顯示出相同的紫紅色斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾，見圖3。

2兩種成分的HPLC測(cè)定

2.1芍藥苷測(cè)定

2.1.1對(duì)照品溶液的配制精密稱取芍藥苷對(duì)照品12.62mg，置于20mL量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度線，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.631mg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液。

2.1.2供試品溶液和陰性樣品溶液的配制取本品粉末和缺赤芍藥材陰性對(duì)照各1g，置于具塞錐形瓶中，加甲醇25mL溶解，稱定質(zhì)量，超聲20min，放冷后用甲醇補(bǔ)足損失質(zhì)量，再用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液和缺赤芍陰性對(duì)照溶液。

2.1.3色譜條件AlltimaC18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，柱溫35℃，體積流量1mL/min，進(jìn)樣量10μL。以甲醇－0.05%醋酸(23∶77)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm。

2.1.4專屬性試驗(yàn)取陰性樣品溶液，按照“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺赤芍藥材樣品在相應(yīng)出峰時(shí)間處沒有出峰，說(shuō)明該方法專屬性良好，見圖4。

2.1.5線性關(guān)系的考察分別精密量取“3.1.1”項(xiàng)下芍藥苷對(duì)照品溶液0.25、0.5、1、2、3、4、5mL，置于5mL量瓶中，甲醇定容至刻度線，搖勻，得到不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按照“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。繪制芍藥苷質(zhì)量濃度(X)和峰面積(Y)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=1.321×107X－18807，r=0.9999。結(jié)果表明，芍藥苷在31.55～631mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.6精密度試驗(yàn)按“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件，精密稱取批號(hào)為130801樣品1份，按“3.1.2”項(xiàng)方法制備成供試液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定芍藥苷峰面積，RSD為0.16%，表明精密度良好。

2.1.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取批號(hào)為130801樣品6份，按“3.1.2”項(xiàng)方法制備成供試液，按“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定芍藥苷量。結(jié)果測(cè)得平均值為2.228mg/g，RSD為1.07%(n=6)，表明重復(fù)性良好。

2.1.8穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取批號(hào)為130801樣品1份，按“3.1.2”項(xiàng)方法制備成供試液，在常溫下放置24h，按“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣，測(cè)定芍藥苷峰面積，RSD為0.28%，表明供試液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.9加樣回收率試驗(yàn)精密稱取批號(hào)為130801的乳腺消郁顆粒各6份，每份1g，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.409mg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液5mL，按“3.1.2”項(xiàng)方法操作，即得待測(cè)溶液。按“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表1。3.1.10樣品測(cè)定取3批樣品，按“3.1.2”項(xiàng)下方法操作，供試品溶液按“3.1.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定乳腺消郁顆粒中芍藥苷，結(jié)果見表2。

2.2松果菊苷測(cè)定

2.2.1對(duì)照品溶液的配制精密稱取松果菊苷對(duì)照品9.95mg，置于20mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解，稀釋至刻度線，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.4975mg/mL的松果菊苷對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液和陰性樣品溶液的配制取本品粉末和缺肉蓯蓉藥材陰性對(duì)照品各1g，置于具塞錐形瓶中，加50%甲醇50mL溶解，稱定質(zhì)量，超聲40min，放冷后用50%甲醇補(bǔ)足損失質(zhì)量，再用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液和缺肉蓯蓉陰性對(duì)照溶液。

2.2.3色譜條件［4］AlltimaC18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，柱溫35℃，體積流量1mL/min，進(jìn)樣量10μL。以甲醇-0.1%甲酸(29∶71)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)334nm。

2.2.4專屬性試驗(yàn)取陰性樣品溶液，按照“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺肉蓯蓉藥材樣品在相應(yīng)出峰時(shí)間處沒有出峰，說(shuō)明該方法專屬性良好，見圖5。

2.2.5線性關(guān)系的考察分別精密量取“3.2.1”項(xiàng)下松果菊苷照品溶液0.1、0.5、1、1.5、2、2.5、3mL，置于5mL量瓶中，50%甲醇定容至刻度線，搖勻，得到不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按照“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。繪制松果菊苷質(zhì)量濃度(X)和峰面積(Y)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=1.316×107X－5763.8，r=0.9999，表明松果菊苷在9.95～298.5mg/L范圍內(nèi)線性良好。

2.2.6精密度試驗(yàn)按“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件，精密稱取批號(hào)為130801樣品1份，按“3.2.2”項(xiàng)制備成供試液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得松果菊苷峰面積，RSD為0.97%，表明精密度良好。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取批號(hào)為130801樣品6份，按“3.2.2”項(xiàng)制備成供試液，按“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定松果菊苷量。結(jié)果測(cè)得平均值為4.472mg/g，RSD為0.43%(n=6)，表明重復(fù)性良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取批號(hào)為130801樣品1份，按“3.2.2”項(xiàng)制備成供試液，在常溫下放置24h，按“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣，測(cè)得松果菊苷峰面積，RSD為1.36%，表明供試液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9加樣回收率試驗(yàn)精密稱取批號(hào)為130801的乳腺消郁顆粒各6份，每份1g，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.6076mg/mL的松果菊苷對(duì)照品溶液7.5mL，按“3.2.2”項(xiàng)方法操作，即得待測(cè)溶液。按“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表3。

2.2.10樣品測(cè)定取3批樣品，按“3.2.2”項(xiàng)下方法操作，供試品溶液按“3.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定乳腺消郁顆粒中松果菊苷，結(jié)果見表4。

3結(jié)論及討論

赤芍為毛茛科多年生草本植物芍藥或川赤芍的根，具有清熱涼血，散瘀止痛之功效。有資料表明［6］，大劑量赤芍對(duì)治療急性乳腺炎有很好的療效。芍藥苷是芍藥中的主要有效成分之一，是一種單萜類糖苷化合物。近年來(lái)，研究人員對(duì)其展開了一系列深入的研究，發(fā)現(xiàn)它具有多種藥理作用，且毒副作用小。殷天照等報(bào)道［7］，在中藥配伍中如果芍藥苷煎出量高，則治療乳腺增生效果較好。《本草匯言》中記述，肉蓯蓉是“養(yǎng)命門，滋腎氣，補(bǔ)精血之藥也。婦人沖任失調(diào)而陰氣不治，此乃平補(bǔ)之劑……”?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)［8］，肉蓯蓉中含有雄性激素樣作用活性成分，可以調(diào)節(jié)體內(nèi)激素水平［9］。另外，松果菊苷在《中國(guó)藥典》2010年版中作為控制肉蓯蓉質(zhì)量的有效成分。因此，把芍藥苷和松果菊苷作為本實(shí)驗(yàn)中的活性成分測(cè)定指標(biāo)來(lái)進(jìn)行研究更具代表性，能夠更好地控制藥物的療效。芍藥苷的前處理實(shí)驗(yàn)比較了以甲醇、90%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、90%乙醇、70%乙醇、50%乙醇為溶劑，進(jìn)行超聲提取。結(jié)果表明，采用甲醇為提取溶劑時(shí)，提取完全，操作方便，檢測(cè)時(shí)雜質(zhì)峰少。同時(shí)，還以甲醇為提取溶劑，分別超聲20、30、40min，檢測(cè)同一批號(hào)中芍藥苷含有量，發(fā)現(xiàn)超聲20min時(shí)，不但所需時(shí)間短，而且提取完全。芍藥苷的分離試驗(yàn)中，根據(jù)文獻(xiàn)［4-5，10-12］報(bào)道，分別采用甲醇－0.05mol/L磷酸二氫鉀、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.1%醋酸作為流動(dòng)相進(jìn)行考察，同時(shí)結(jié)合生產(chǎn)檢測(cè)需要，選擇成本低、效率高、分離效果好的流動(dòng)相。結(jié)果表明，甲醇-0.05%醋酸峰型和分離度理想，經(jīng)優(yōu)化后最終確定流動(dòng)相為甲醇-0.05%醋酸(23∶77)。松果菊苷的分離試驗(yàn)中，采用甲醇-0.1%甲酸(29∶71)等度洗脫，不僅出峰時(shí)間短，效率高，而且分離效果好。薄層色譜鑒別中，對(duì)起主要療效的有效成分當(dāng)歸、川芎、淫羊藿、鎖陽(yáng)進(jìn)行了薄層色譜鑒別。結(jié)果表明，色譜斑點(diǎn)清晰，方法重復(fù)性好，而且陰性對(duì)照無(wú)干擾。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)方法可以作為乳腺消郁顆粒清膏、半成品、顆粒的質(zhì)量控制手段，能夠有效控制其在生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量，并且操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。

作者：朱冬可 吳佩穎 高崎 顧慧芬 單位：上海中醫(yī)藥大學(xué) 上海杏靈科技藥業(yè)股份有限公司