提取物致突變實驗范文

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1材料

1.1藥品與動物杜仲提取物主要成分綠原酸，張家界恒興生物科技公司提供。昆明種小鼠購于湖南中醫學院實驗動物中心，批號：990218。注射用環磷酰胺：上海華聯制藥有限公司，批號：030504。疊氮鈉（NaN3）：上海試劑一廠，批號：990706。鼠傷寒沙門氏菌株（TA97，TA98，TA100，TA102）購于中國農科院獸醫藥品監察所。

1.2主要儀器ES-C300A電子天平：湘儀天平儀器廠。組織勻漿器：北京玻璃儀器廠。

2方法與結果

2.1小鼠骨髓嗜多染紅細胞（PCE）微核試驗小鼠60只，體重（28±2）g，雌雄各半，隨機分為6組。杜仲提取物稀釋液設為1.28，0.64，0.32，0.16g/kg4個劑量組，陰性對照為蒸餾水，兩次灌胃給予受試物。陽性對照為環磷酰胺（CP）40mg/kg體重，兩次腹腔注射間隔24h，第2次給受試物后6h，頸椎脫臼處死動物。按國家標準［4］取骨髓制片，每只動物計數1000個嗜多染紅細胞，微核率以百分率表示。結果見表1。

表1杜仲提取物對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率實驗（略）

與陰性對照組比較，**P＜0.01，△P＞0.05；n=10

由表1可知，實驗組雌、雄小鼠微核發生率為0.39%～0.43%，陰性對照組為0.43%，陽性對照組為4.38%，實驗組與陰性對照組比較，微核發生率均無差異顯著性（P>0.05），陽性對照組與陰性對照組比較，差異性顯著（P<0.01）。

2.2杜仲提取物對小鼠精子畸形的試驗雄性小鼠60只，體重（30～35）g，隨機分為6組，實驗組劑量為1.28，0.64，0.32，0.16g/kg體重與陰性對照組（生理鹽水），經口腔給予。陽性對照組用環磷酰胺40mg/kg體重腹腔注射。各組1次/d，連續5d給予受試物。于首次給藥后第35天，頸椎脫臼處死小鼠，按紀云晶［5］方法制片。每組計數2000個精子，計算其畸形率。結果見表2。

表2杜仲提取物對小鼠精子畸形的影響（略）

與陰性對照組比較，**P＜0.01，△P＞0.05；n=10

由表2可知，實驗組小鼠的精子畸形率為7.6%～8.3%，陰性對照組為7.8%，陽性對照組為71.8%，實驗組與陰性對照組比較差異無顯著性（P>0.05），陽性對照組與陰性對照組比較差異極顯著（P<0.01）。

2.3Ames試驗按Ames標準方法［6］對鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進行增菌培養后進行鑒定，所采用的4個菌株特性均與Ames試驗標準相符。在加與不加活化物的條件下進行平板摻入法試驗。杜仲提取物用雙蒸餾水稀釋為500，400，300，200μg/皿4個劑量組，陽性對照為疊氮鈉（NaN3）10μg/皿，陰性對照為雙蒸餾水100μg/皿，每個劑量組重復做2個平皿，結果見表3。

表3杜仲提取物對TA平均回變菌落數的影響（略）

+S9:加S9活化物，-S9:不加S9活化物

表3可知，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統，其回變菌落數與陰性對照組（雙蒸餾水）比較，均無高于自發回變菌落數的2倍，而陽性對照組菌落數均高于陰性對照組的2倍以上。

3討論

不同劑量杜仲提取物對小鼠PCE的試驗表明，杜仲提取物稀釋液對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率未見明顯影響（P<0.01）。說明本品對細胞染色體無誘變作用。對小鼠精子畸形的影響試驗，結果表明，杜仲提取物稀釋液對小鼠精子畸形發生率未見明顯影響（P<0.01），說明本品對小鼠精子無畸形誘變作用，戚向陽等［7］用杜仲粉對小鼠精子進行的藥理作用研究結果表明，杜仲粉對小鼠精子不產生畸變作用，其結果與本研究結果一致。

采用鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進行回復突變試驗，結果表明，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統，其回變菌落數與陰性對照組（雙蒸餾水）比較，均無高于自發回變菌落數的2倍，而陽性對照組菌落數均高于陰性對照組的2倍以上，說明杜仲提取物稀釋液對鼠傷寒沙門氏突變型菌株無致突變作用。