探索大鼠AA對(duì)金鐵鎖總皂苷抗炎作用反應(yīng)性范文

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【摘要】目的通過實(shí)驗(yàn)觀察和探討金鐵鎖總皂苷（TSPT）抗炎作用及其作用機(jī)理。方法建立佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）動(dòng)物模型，通過觀察TSPT對(duì)AA大鼠足腫脹及炎性組織液中丙二醛（MDA）水平的影響來(lái)探討其抗炎作用及其作用機(jī)制。結(jié)果TSPT能有效抑制aa大鼠足腫脹，降低炎性組織液中MDA的水平。結(jié)論TSPT具有良好的抗炎作用，其作用機(jī)制與降低MDA水平有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】金鐵鎖總皂苷佐劑性關(guān)節(jié)炎MDA

【Abstract】ObjectiveToobservetheanti-inflammationeffectsandpossiblemechanismofTotalSaponinsofPsammosilenetunicoids(TSPT).MethodsAfterestablishingAAratsmodel，theTSPT’santi-inflammatoryeffectsandmechanismagainstAAwasstudiedthroughobservingchangesoftheankleswellingandcontentsofMDAininflammatory-tissuesoakofAArats.ResultsTSPTcouldinhibitarticularswellingandeffectivelydecreasethecontentofMDAininflammatorytissuesoakofAArats.ConclusionTSPThasgoodanti-inflammationeffectsandthemechanismislikelyrelatedtoTSPT’sdown-regulationofMDA.

【Keywords】TSPTAAMDA

金鐵鎖（苗語(yǔ)：Jenbtieegsox）系苗族習(xí)用藥材［1］，首載于《滇南本草》，為石竹科植物金鐵鎖Psammosilenetunicoides.W.C.WuetC.Y.Wu的干燥根。別名：獨(dú)定子、對(duì)葉

七、白馬分鬃等，主要含皂苷類成分。具有散瘀定痛、止血、消癰排膿之功，用于跌打損傷，風(fēng)濕痛、胃痛、創(chuàng)傷出血等的治療［2］。目前尚關(guān)于其抗AA研究的文獻(xiàn)報(bào)道，本文就關(guān)于金鐵鎖總皂苷抗AA作用的研究作一介紹。

1材料與方法

1.1材料Freund’s完全佐劑（sigma公司產(chǎn)品，由幫定生物技術(shù)公司提供），注射器（1.0ml），金鐵鎖總皂苷（貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院制劑教研室提取），地塞米松注射液（批號(hào)：0206101，天津金輝氨基酸有限公司提供），風(fēng)濕寧注射液（批號(hào)504002，羅浮山藥業(yè)提供），TSPT（貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院制劑教研室提取）。

動(dòng)物：70只雄性Wistar大鼠，體重：(200±30)g，清潔級(jí)二級(jí)動(dòng)物（由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1分組70只Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分為7個(gè)組。分別為：生理鹽水組（NS）、模型組（A）、西藥陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松注射液）（B）、中藥陽(yáng)性對(duì)照組（風(fēng)濕寧注射液）（C）、TSPT大（D）、中（E）、小（F）劑量組。

1.2.2造模除NS組外，其余各組于每只大鼠右后足跖皮內(nèi)注射Freund’s完全佐劑0.1ml致炎。第1天記錄大鼠的體重和兩側(cè)腳踝關(guān)節(jié)的周長(zhǎng)。

1.2.3給藥除NS組外，其余均按上述方法造模，于造模后第9天開始給藥，連續(xù)給藥12天。每隔3天，記錄各組大鼠體重，及踝關(guān)節(jié)腫脹，末次給藥（造模后第21天）1h后處死大鼠，觀察藥物對(duì)繼發(fā)性病變的影響。

2結(jié)果

2.1TSPT對(duì)AA大鼠足腫脹的影響足腫脹的測(cè)量方法：用記號(hào)筆標(biāo)記腫脹踝關(guān)節(jié)周徑，每日以特制軟皮尺測(cè)量踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)（軟皮尺無(wú)彈性，最小刻度為0.1cm）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與生理鹽水比較，造模后第8天（藥前）各組足均明顯腫脹（P＜0.01），表明造模成功。用藥約1周后，TSPT大、中劑量對(duì)足腫脹均顯示出明顯的抑制作用（P＜0.01），作用強(qiáng)度大于中藥陽(yáng)性組（風(fēng)濕寧注射液），接近地塞米松組。提示：TSPT能有效抑制AA大鼠踝關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)。

2.2大鼠致炎足中丙二醛（MDA）生成量的測(cè)定動(dòng)物造模分組給藥同上。鼠致炎21天后處死，在致炎側(cè)關(guān)節(jié)上方0.5cm處摘取腫脹足爪，縱向切開，放入5ml生理鹽水的試管中4℃浸泡過夜，離心（3000r/min）取上清液，-20℃保存待測(cè)。

試劑與儀器：MDA試劑盒（由北京幫定生物技術(shù)公司提供），可見分光光度計(jì)（島津：FW/UV265）（由北京武警總醫(yī)院制劑科提供）、恒溫水浴鍋、離心機(jī)（由北京武警總醫(yī)院檢驗(yàn)科提供）。

測(cè)定方法及參數(shù)：硫代巴比妥酸結(jié)合法，于532nm處測(cè)定，實(shí)驗(yàn)操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。如表2。

表1TSPT對(duì)AA大鼠足腫脹的影響（n=10，x±s）

注：與NS組比較：***P＜0.01;與模型組（A組）比較：★★P＜0.05，★★★P＜0.01；與西陽(yáng)組比較

（B）：△△P＜0.05，△△△P＜0.01。與中陽(yáng)（C）組比較：※※P＜0.05，※※※P＜0.01

表2TSPT對(duì)AA大鼠炎性組織液中MDA的影響(n=6，x±s)

注：與NS組比較：**P＜0.05;***P＜0.01;與模型組（A）比較：★★P＜0.05，★★★P＜0.01;與西陽(yáng)組比較（B）：△△P＜0.05，△△△P＜0.01;與中陽(yáng)組比較：※※P＜0.05

圖1TSPT對(duì)MDA水平的影響圖

由圖表統(tǒng)計(jì)分析可知：與NS組比較，模型組炎性組織液中，MDA的含量顯著升高（P＜0.01），這顯示出AA大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重的炎性反應(yīng)。經(jīng)治療后，與模型組比較，各個(gè)給藥組AA大鼠炎性組織液中MDA含量均有不同程度的降低，B（西陽(yáng)組）、D（TSPT大劑量組）表現(xiàn)出差異有非常顯著性（P＜0.01）。

3討論

MDA通過酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，自由基可引起脂質(zhì)過氧化，影響一些基因的表達(dá)，在炎癥和免疫過程中起著中介作用［3］。因此自由基在生物體系中的作用正受到廣泛重視。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)僅產(chǎn)生少量氧自由基，其產(chǎn)生、利用和清除保持一種動(dòng)態(tài)平衡。一旦由于某種原因造成體內(nèi)自由基的堆積，便會(huì)損傷組織細(xì)胞，導(dǎo)致各種病理變化。

AA大鼠炎癥反應(yīng)中，模型對(duì)照組炎性組織液中MDA含量顯著升高與AA大鼠足腫脹呈正相關(guān)，表明致炎因子使機(jī)體產(chǎn)生過量的氧自由基。這些活性氧可直接作用于一些細(xì)胞包括免疫細(xì)胞，與其脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等發(fā)生反應(yīng)，引起脂質(zhì)過氧化，使MDA增多，造成細(xì)胞毒性和功能受損。MDA的增多會(huì)造成自由基連鎖反應(yīng)加強(qiáng)，使炎癥加重或發(fā)展。經(jīng)TSPT治療后，大鼠炎性組織中MDA的含量降低，表明TSPT能抑制或阻斷炎癥時(shí)氧自由基的過量產(chǎn)生與釋放，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)與脂質(zhì)過氧化，使其終產(chǎn)物MDA降低，并接近正常組水平，因而減少了對(duì)細(xì)胞的損傷，糾正體內(nèi)氧自由基代謝失衡或紊亂的作用，調(diào)整機(jī)體內(nèi)環(huán)境，起到消炎、抗氧化和細(xì)胞保護(hù)作用，促進(jìn)了炎癥反應(yīng)的消退。TSPT抗炎免疫的作用機(jī)理是多方面的，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，TSPT對(duì)AA大鼠炎癥時(shí)氧自由基代謝的調(diào)整作用，可能是其中一個(gè)重要環(huán)節(jié)，對(duì)AA大鼠的抗關(guān)節(jié)炎作用可能與其降低脂質(zhì)過氧化，恢復(fù)抗氧化酶活性和腹腔Mφ分泌功能等有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】

1包駿，冉懋雄.貴州苗族醫(yī)藥研究與開發(fā).貴陽(yáng)：貴州科技出版社，1999，174.

2中華本草編委會(huì).中華本草.第二卷.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999，782.

3莫簡(jiǎn).關(guān)于自由基在生物體系中作用的幾點(diǎn)看法.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，18(2):199.新晨