白血病患者骨髓形態(tài)學(xué)特征分析范文

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慢性淋巴細(xì)胞白血病（chroniclymphocyticleukemia，CLL）是B細(xì)胞慢性淋巴增殖性疾病中的一種，不同CLL患者的預(yù)后呈高度異質(zhì)性，一些患者無(wú)明顯癥狀、進(jìn)展緩慢、長(zhǎng)期生存；另外一些患者則進(jìn)展快，總生存期短，不足2～3年。早期預(yù)測(cè)CLL預(yù)后的指標(biāo)包括了疾病臨床分期、外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓浸潤(rùn)模式以及遺傳學(xué)異常、基因突變、CD38、ZAP70等，對(duì)于基層臨床醫(yī)師而言，在缺乏細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的情況下，亟待尋找新的臨床指標(biāo)用于預(yù)測(cè)預(yù)后，指導(dǎo)治療。本文旨在觀察骨髓中幼稚淋巴細(xì)胞的比例與疾病預(yù)后的關(guān)系，探討骨髓幼稚淋巴細(xì)胞能否作為預(yù)測(cè)預(yù)后的一項(xiàng)臨床指標(biāo)。

1資料與方法

1．1臨床資料32例患者均為2012年6月至2015年5月收治的確診為慢性淋巴細(xì)胞白血病的患者，其中男性25例，女性7例，中位年齡61歲（40～83歲）。Binet分期為A期3例，B期4例，C期25例。A組18例患者骨髓涂片計(jì)數(shù)幼稚淋巴細(xì)胞比例≥5％，其中男性13例，女性5例，中位年齡為63歲（41～83歲），Binet分期為A期2例，B期3例，C期13例。B組14例患者骨髓涂片計(jì)數(shù)幼稚淋巴細(xì)胞比例＜5％，其中男性12例，女性2例，中位年齡59歲（40～78歲），Binet分期為A期1例，B期1例，C期12例。

1．2骨髓形態(tài)學(xué)檢查所有患者入院后均行骨髓穿刺抽取骨髓血0．2ml涂片，經(jīng)瑞氏染色后觀察骨髓增生程度，在涂片佳、染色良好、細(xì)胞分布均勻處每張骨髓涂片計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，計(jì)算幼稚淋巴細(xì)胞和成熟淋巴細(xì)胞的比例。

1．3免疫表型檢測(cè)采用肝素抗凝的新鮮骨髓血5ml，應(yīng)用CD45／SSC設(shè)門(mén)對(duì)所有慢性淋巴細(xì)胞白血病患者進(jìn)行免疫表型檢測(cè)。使用的單克隆抗體包括：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD10、CD11c、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD23、HLA－DR、FMC－7、Kappa、Lambda、CD45。使用流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）進(jìn)行檢測(cè)，白細(xì)胞分化抗原陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以＞30％為該表型抗原表達(dá)陽(yáng)性。

1．4熒光原位雜交檢測(cè)取骨髓血5ml行熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH）檢測(cè)：每份標(biāo)本加CLL組套探針：GLPD13S25、GLPATM、GLPRB1、GLPp53序列特異性探針及CSP12染色體著絲粒特異性探針、雜交緩沖液混勻，滴至玻片的待雜交處，蓋上蓋玻片，封片。將玻片放至濕盒，置78℃水浴鍋預(yù)溫5min，移至42℃培養(yǎng)箱雜交過(guò)夜；洗片，復(fù)染，放入4℃冰箱中10min左右觀察。隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。正常細(xì)胞為兩紅兩綠，p53缺失者及RB1基因缺失者為1綠基因信號(hào)，ATM基因缺失者及D13S25基因缺失者為1紅基因信號(hào)，12號(hào)染色體三體者顯示3紅基因信號(hào)。

1．5隨訪及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析隨訪截止日期為2015年5月1日，采用SPSS13．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0．05認(rèn)為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

2．1慢性淋巴細(xì)胞白血病患者骨髓形態(tài)學(xué)特征所有患者骨髓均為增生活躍或極度活躍骨髓象，淋巴細(xì)胞比例顯著增多，多為成熟的小淋巴細(xì)胞，染色質(zhì)呈塊狀，胞漿少，同時(shí)可見(jiàn)數(shù)量不等的幼稚淋巴細(xì)胞，染色質(zhì)較成熟淋巴細(xì)胞疏松，胞漿比例增加，部分可見(jiàn)核仁（圖1）。紅系、粒系及巨核細(xì)胞均不同程度減少。

2．2慢性淋巴細(xì)胞白血病患者的免疫分型檢測(cè)情況所有患者均表達(dá)CD5、CD19、CD20、CD23，其中A組患者4例表達(dá)FMC－7，3例表達(dá)CD38，各有1例患者表達(dá)CD2、CD15、CD235a。B組患者均未檢測(cè)到FMC－7及CD38表達(dá)。

2．3熒光原位雜交檢測(cè)情況應(yīng)用GLPD13S25、GLPATM、GLPRB1、GLPp53序列特異性探針及CSP12染色體著絲粒特異性探針進(jìn)行原位雜交檢測(cè)結(jié)果顯示：A組患者3例存在p53缺失，2例存在ATM缺失，5例存在12號(hào)染色體三體，9例患者可同時(shí)檢測(cè)到多種基因缺失；B組患者1例存在p53缺失，1例存在ATM缺失，3例存在12號(hào)染色體三體，5例患者可同時(shí)檢測(cè)到多種基因缺失（表1）。

2．4慢性淋巴細(xì)胞白血病患者的生存情況32例患者無(wú)1例失訪，中位隨訪時(shí)間為42個(gè)月（6～120個(gè)月）。A組患者1年、3年及5年總生存率分別為93．3％、83．3％和59．3％，B組患者均存活超過(guò)5年（圖3）。

3討論

CLL是一種單克隆性小淋巴細(xì)胞凋亡受阻、存活時(shí)間延長(zhǎng)而大量聚集在骨髓、血液、淋巴結(jié)和其他器官，最終導(dǎo)致正常造血功能衰竭的低度惡性疾病。在歐美國(guó)家占慢性白血病的50％以上，在我國(guó)發(fā)病率低，僅占慢性白血病的10％。但是，該病是一種異質(zhì)性疾病，生存期長(zhǎng)短不一，長(zhǎng)者可達(dá)10余年，預(yù)后差者病程不足2～3年。臨床上用于判斷預(yù)后的指標(biāo)包括疾病分期、外周血幼稚細(xì)胞及涂抹細(xì)胞比、β2－微球蛋白水平、外周血單核細(xì)胞比例，ZAP70陽(yáng)性、CD38陽(yáng)性為獨(dú)立的預(yù)后不良因素。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)p53基因缺失者，病情進(jìn)展快，腫瘤負(fù)荷高，多處于疾病的晚期，對(duì)常用化療藥物耐藥，預(yù)后差。ATM基因位于染色體11q22，伴有ATM基因缺失者發(fā)病年齡較輕，且病程常表現(xiàn)為侵襲性，預(yù)后差，其可作為疾病進(jìn)展的一個(gè)早期指標(biāo)。具有12號(hào)染色體三體遺傳學(xué)異常的CLL患者容易出現(xiàn)不典型的形態(tài)，容易向幼淋細(xì)胞白血病轉(zhuǎn)化，表達(dá)更強(qiáng)的SmIg與FMC－7，預(yù)后更差，Binet分期多為B或C期。D13S25探針標(biāo)記的是13q14．3，遠(yuǎn)離著絲粒端；RB1探針標(biāo)記的是13q14，在近著絲粒端。兩者缺失者預(yù)后同染色體核型正常者相似，預(yù)后相對(duì)較好。

本研究中發(fā)現(xiàn)CLL患者骨髓涂片中幼稚淋巴細(xì)胞比例≥5％者免疫表型檢測(cè)提示CD38及FMC－7表達(dá)者多見(jiàn)，且FISH檢測(cè)結(jié)果中與預(yù)后不良相關(guān)的p53基因缺失、ATM基因缺失及12號(hào)染色體三體均較幼稚淋巴細(xì)胞比例＜5％者多見(jiàn)，進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)骨髓幼稚淋巴細(xì)胞比例≥5％的患者總生存率較幼稚淋巴細(xì)胞比例＜5％者低，推測(cè)可能與骨髓幼稚細(xì)胞比例一定程度上反應(yīng)了疾病的侵襲性，故而與預(yù)后相關(guān)。同時(shí)與文獻(xiàn)報(bào)道CD38、FMC－7表達(dá)者及p53基因缺失、ATM基因缺失及12號(hào)染色體三體者預(yù)后差相一致，提示骨髓幼稚淋巴細(xì)胞比例有可能成為預(yù)測(cè)疾病預(yù)后的一項(xiàng)觀察指標(biāo)。對(duì)于基層不能開(kāi)展細(xì)胞遺傳學(xué)及FISH檢測(cè)的單位而言，骨髓幼稚細(xì)胞比例可望作為判斷預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)，從而指導(dǎo)臨床分層治療。但是，由于CLL發(fā)病率低，本文中觀察例數(shù)較少，所以需要進(jìn)一步擴(kuò)大觀察例數(shù)及在不同中心進(jìn)行觀察以進(jìn)一步明確骨髓幼稚細(xì)胞能否作為預(yù)測(cè)預(yù)后的一項(xiàng)臨床指標(biāo)。

作者：劉亞琳 王暉 王雯娟 劉海波 王曉寧 單位：西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科 陜西省人民醫(yī)院血液內(nèi)科