大腸桿菌基因型檢測(cè)及耐藥性分析范文

本站小編為你精心準(zhǔn)備了大腸桿菌基因型檢測(cè)及耐藥性分析參考范文，愿這些范文能點(diǎn)燃您思維的火花，激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)》2014年第二期

1材料

1．1菌株質(zhì)控菌:大腸桿菌ATCC25922，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;臨床菌株:來(lái)源于扎龍自然保護(hù)區(qū)。

1．2藥品阿莫西林/克拉維酸(A/C)、氨芐西林(AMP)、頭孢他定(CAZ)、頭孢曲松(CRO)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢噻吩(CEF)、環(huán)丙沙星(CIP)、氨曲南(AZT)、慶大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、氟哌酸(NOR)、恩諾沙星(EN)、氧氟沙星(OFX)、四環(huán)素(TET)、多西環(huán)素(DO)、氯霉素(CMP)、復(fù)方新諾明(SXT)、多粘菌素B(POL)，均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司;頭孢他啶/克拉維酸(CAZ/Clav)和頭孢噻肟/克拉維酸(CTX/Clav)，購(gòu)自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。安普霉素(APR)、氟苯尼考(FFC)藥敏片購(gòu)自O(shè)xid公司。

2方法

2．1藥敏試驗(yàn)采用K－B法檢測(cè)40株鶴源大腸桿菌對(duì)17種抗菌藥物的耐藥性。

2．2ESBLs檢測(cè)以大腸桿菌ATCC25922作陰性對(duì)照。按CLSI［4］標(biāo)準(zhǔn)操作和判斷。以紙片擴(kuò)散法進(jìn)行初篩試驗(yàn)。通過(guò)表型確證試驗(yàn)，確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株。根據(jù)試劑盒說(shuō)明提取質(zhì)粒DNA，進(jìn)行基因檢測(cè)。

3結(jié)果

3．1ESBLs檢測(cè)結(jié)果對(duì)40株鶴源大腸桿菌進(jìn)行ESBLs檢測(cè)，在初篩試驗(yàn)中，有15株大腸桿菌檢測(cè)為疑似產(chǎn)ES-BLs菌株。經(jīng)確證試驗(yàn)，15株疑似菌株均為產(chǎn)ESBLs菌株，檢出率為37．5%(15/40)。

3．2ESBLs基因型的檢測(cè)結(jié)果以40株臨床分離的鶴源大腸桿菌的質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行SHV、CTX－M、TEM、OXA不同基因型檢測(cè)，具體見圖1～4。TEM基因PCR檢出的陽(yáng)性率為40%;CTX－M基因檢出的陽(yáng)性率為33．33%;SHV基因檢出的陽(yáng)性率3．33%;OXA基因檢出的陽(yáng)性率為13．33%。

3．3藥敏試驗(yàn)結(jié)果不同藥物對(duì)40株雞大腸桿菌耐藥率見圖5。對(duì)β－內(nèi)酰胺類藥物，15株產(chǎn)酶菌的耐藥率均比25株不產(chǎn)酶菌高，其中產(chǎn)酶菌對(duì)AMP耐藥率最高為60%。40株菌對(duì)A/C、AZT和FFC高度敏感，敏感率均達(dá)100%。

4討論

各個(gè)國(guó)家和地區(qū)ESBLs檢出率明顯不同。在美國(guó)，腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)ESBLs菌株的檢出率平均3%左右［5］。在中國(guó)，苑麗等［6］對(duì)河南省7個(gè)地區(qū)不同雞場(chǎng)臨床分離31株受試菌中有29株菌檢出相關(guān)β－內(nèi)酰胺酶基因，共檢出TEM型21株，CTX－M型15株。本試驗(yàn)對(duì)40株臨床分離鶴源大腸桿菌進(jìn)行ESBLs檢測(cè)，共檢出15株為產(chǎn)ESBLs菌。TEM基因、SHV基因、CTX－M基因和OXA基因均檢測(cè)出。PCR結(jié)果顯示，40株鶴源大腸桿菌中TEM型擴(kuò)增陽(yáng)性率為40%，是扎龍自然保護(hù)區(qū)主要的β－內(nèi)酰胺酶型別。這與許穎等［7］檢出的產(chǎn)ESBLs大腸桿菌主要型別為TEM型，其對(duì)青霉素類抗生素具有較強(qiáng)的耐藥性的結(jié)果相似。TEM型ESBLs最初僅存在大腸桿菌和肺炎克雷伯中，但由于耐藥質(zhì)粒的水平傳播及耐藥基因的轉(zhuǎn)座、重組作用，近年來(lái)在多種細(xì)菌中同時(shí)檢出TEM型。OXA型ESBLs國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道主要存在于銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌中［8］，但是本試驗(yàn)在黑龍江鶴源大腸桿菌中檢出OXA型基因。原因可能是耐藥質(zhì)粒上所攜帶的OXA型基因通過(guò)水平傳播給大腸桿菌。

為了降低養(yǎng)殖場(chǎng)畜禽感染的發(fā)生率，應(yīng)合理應(yīng)用抗菌藥物，能用窄譜抗菌藥物控制的感染盡量不用廣譜抗菌藥物，以減少耐藥菌株和二重感染的發(fā)生。同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)和自然保護(hù)區(qū)畜禽感染菌株耐藥性監(jiān)測(cè)，研究耐藥基因分子流行病學(xué)規(guī)律，切斷耐藥質(zhì)粒傳播途徑，嚴(yán)格控制抗菌藥物使用，降低動(dòng)物感染的發(fā)生率［9-10］。鑒于耐藥菌耐藥基因可通過(guò)接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種方式發(fā)生轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致耐藥菌株的暴發(fā)流行，對(duì)疾病的預(yù)防和治療帶來(lái)極大困難，必須高度重視對(duì)產(chǎn)ESBLs菌的預(yù)防和控制。

作者：牛鑫鑫劉闖唐連友劉婷婷薛原華育平單位：東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物資源學(xué)院