產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌耐藥表型及水平傳播范文

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【摘要】目的了解昆明市第一人民醫(yī)院臨床分離的大腸埃希菌超廣譜β內(nèi)酰胺酶(extendedspectrumβlactamases，esbls)的耐藥表型和水平傳播情況。方法對2005年1月～12月昆明市第一人民醫(yī)院臨床分離的197株大腸埃希菌用表型確證試驗檢測ESBLs，用KirbyBauer瓊脂擴散法做藥物敏感試驗；用接合試驗了解產(chǎn)ESBLs基因是否定位于質(zhì)粒，并對接合子進(jìn)行KB法藥敏試驗和ESBLs表型確證。結(jié)果197株大腸埃希菌中共檢出產(chǎn)ESBLs菌104株，檢出率52.79%。在各類標(biāo)本中產(chǎn)ESBLs菌株在纖維支氣管鏡(bronchofibroscope，BF)刷片中分離率最高(75%)，就科別來看內(nèi)分泌科標(biāo)本的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的分離率最高(78.57%)。除亞胺培南和阿米卡星外，產(chǎn)ESBLs菌株對其他15種抗菌藥物的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs菌株(P<0.01)。104株產(chǎn)ESBLs菌株中有91株符合供體菌的標(biāo)準(zhǔn)，64株接合成功，接合子均確證產(chǎn)ESBLs，其接合率為70.33%。64株供體菌及其相應(yīng)接合子的藥敏結(jié)果顯示除復(fù)方磺胺甲口惡唑、左氧氟沙星、慶大霉素、頭孢吡肟和頭孢西丁外，供體菌及其接合子對其他12種藥物耐藥率無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論昆明市第一人民醫(yī)院大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs和耐藥質(zhì)粒水平傳播情況嚴(yán)重，臨床應(yīng)加強對大腸埃希菌耐藥性的監(jiān)測，嚴(yán)格掌握抗生素的使用指征，防止耐藥菌株的傳播流行。

【關(guān)鍵詞】大腸埃希菌；超廣譜β內(nèi)酰胺酶；耐藥；接合實驗

大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，它作為重要的條件致病菌廣泛存在于自然界，由于臨床廣譜抗生素特別是第三代頭孢菌素抗生素的大量使用，菌類在選擇性壓力下不斷發(fā)展其耐藥機制，產(chǎn)生超廣譜β內(nèi)酰胺酶已成為重要的耐藥機制之一，給臨床治療帶來很大的困難。本研究收集2005年1月～12月我院臨床標(biāo)本中分離的197株大腸埃希菌，通過表型確證試驗、藥物敏感試驗和接合試驗，了解本地區(qū)大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs發(fā)生率、產(chǎn)ESBLs菌株的藥敏情況以及產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌耐藥性在同種菌中的水平傳播情況，現(xiàn)報道如下。

1材料和方法

1.1菌株及鑒定

收集2005年1月～12月昆明市第一人民醫(yī)院住院及門診感染患者送檢的各類標(biāo)本中分離得到的大腸埃希菌197株，排除同一患者同一部位重復(fù)分離的菌株。其中來自尿液標(biāo)本96株(48.73%)、痰液標(biāo)本68株(34.51%)、血液標(biāo)本11株(5.58%)、BF刷片8株(4.06%)、傷口分泌物5株(2.54%)、膿液3株(1.53%)、其它標(biāo)本6株(3.05%)。標(biāo)本來自呼吸科40例、門診29例、消化內(nèi)科18例、重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)17例、內(nèi)分泌科14例、泌尿外科14例、干部科12例、腫瘤科11例、中醫(yī)科9例、神經(jīng)外科8例、兒科6例、神經(jīng)內(nèi)科4例、骨科2例、其他科室13例。全部菌株按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第二版常規(guī)培養(yǎng)分離。菌株采用BDBBLCrystalENF鑒定系統(tǒng)鑒定到種。

1.2質(zhì)控菌株及受體菌

質(zhì)控菌為大腸埃希菌ATCC35922(敏感株)和大腸埃希菌ATCC35218(產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶株)。受體菌為利福平耐藥的大腸埃希菌C600(北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科惠贈)。

1.3培養(yǎng)基、抗菌藥物紙片和試驗用藥

法國BioMerieux公司MuellerHinton瓊脂；英國Oxoid生產(chǎn)的藥敏紙片，分別為阿米卡星、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、氨曲南、復(fù)方磺胺甲口惡唑、左氧氟沙星、哌拉西林、慶大霉素、亞胺培南、頭孢吡肟、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢西丁、頭孢唑林、頭孢噻肟/克拉維酸(CD03，30μg/10μg)、頭孢他啶/克拉維酸(CD02，30μg/10μg)，共19種。利福平(美國Sigma公司)、頭孢噻肟(德國Hoechst公司)。

1.4藥物敏感試驗

采用KB紙片擴散法，藥敏結(jié)果均按照美國CLSI/NCCLS2003年標(biāo)準(zhǔn)定義，以敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)報告結(jié)果。

1.5ESBLs確證試驗

參照CLSI/NCCLSM2A8(2003年版本)推薦的紙片確證擴散法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，采用頭孢噻肟(30μg)，頭孢噻肟/克拉維酸(30μg/10μg)，頭孢他啶(30μg)，頭孢他啶/克拉維酸(30μg/10μg)紙片檢測，對兩組中任何一個藥物加克拉維酸的抑菌圈直徑與不加克拉維酸的抑菌圈直徑相比，差值≥5mm時，可確證該菌株產(chǎn)ESBLs。

1.6接合實驗

利用分別含利福平、頭孢噻肟抗生素的MH平皿篩選供體菌共91株，受體菌為利福平耐藥的大腸埃希菌C600，接合完成后，用含有3mg/L頭孢噻肟和150mg/L利福平的MH平皿篩選接合子。篩選出的接合子作生化鑒定與大腸埃希菌C600生化特征一致，對接合子進(jìn)行KB法藥敏試驗和ESBLs表型確證。

1.7結(jié)果分析

文中的數(shù)據(jù)和表格采用WHONET5.3軟件及Excell進(jìn)行分析。耐藥率比較采用SPSS11.0軟件進(jìn)行χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1ESBLs分離率

2005年1月～12月臨床分離的大腸埃希菌共197株，其中104株產(chǎn)ESBLs，ESBLs分離率為52.79%。

(1)產(chǎn)ESBLs菌株在不同標(biāo)本中的分布大腸埃希菌在中段尿標(biāo)本中的分離株數(shù)最多(96株)，其次是痰(68株)和血液(11株)標(biāo)本；產(chǎn)ESBLs株分別為47株(49%)、40株(58.8%)和3株(27.3%)。在BF刷片中分離率最高［8株中產(chǎn)ESBLs6株(分離率75%)］，其次為膿液［3株中產(chǎn)ESBLs2株(

66.7%)］和傷口分泌物［5株產(chǎn)ESBLs3株(6%)］。

(2)產(chǎn)ESBLs菌株在不同病區(qū)的分布大腸埃希菌在呼吸科的分離株數(shù)最多(40株，其中產(chǎn)ESBLs20株)，其次為門診(29株，產(chǎn)ESBLs13株)和內(nèi)分泌病房(14株，產(chǎn)ESBLs11株)。內(nèi)分泌科產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的發(fā)生率最高，其次為神經(jīng)外科和干部病房。

(3)產(chǎn)ESBLs菌株與非產(chǎn)ESBLs菌株耐藥率比較兩種菌株除對亞胺培南和阿米卡星耐藥率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(其中兩者對亞胺培南的敏感率均為100%)外，產(chǎn)ESBLs菌株對其他15種抗菌藥物的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs菌株(P<0.01)，其中非產(chǎn)ESBLs菌株對頭孢曲松、頭孢他啶、氨曲南和頭孢吡肟的敏感率為100%，產(chǎn)ESBLs菌株對四種藥物的敏感率只有15.4%～84.6%。ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株對17種抗菌藥物的耐藥率比較如表1所示。表1產(chǎn)ESBLs菌與非產(chǎn)ESBLs菌耐藥率比較

2.2接合實驗

104株產(chǎn)ESBLs菌株中有91株對利福平敏感并對其做接合試驗，結(jié)果有64株接合成功，接合子的生化特征與受體菌大腸埃希菌C600完全一致，64株接合子均確證產(chǎn)ESBLs，其接合率為70.33%。64株供體菌及其相應(yīng)接合子的藥敏結(jié)果顯示除復(fù)方磺胺甲口惡唑、左氧氟沙星、慶大霉素、頭孢吡肟和頭孢西丁外，供體菌及其接合子對其他12種藥物耐藥率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，兩者對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林和頭孢呋辛的耐藥率均為100%，對亞胺培南的敏感率均為100%。

3討論

在美國，腸桿菌科細(xì)菌ESBLs的平均檢出率為3%，不同醫(yī)院的檢出率波動在0～25%；埃及腸桿菌科細(xì)菌ESBLs的發(fā)生率達(dá)到60.9%；土耳其大腸埃希菌的ESBLs發(fā)生率為12%［1，2。在中國大陸，不同醫(yī)院之間有明顯差異，如上海2000年4家醫(yī)院聯(lián)合監(jiān)測結(jié)果顯示大腸埃希菌中的ESBLs發(fā)生率為30.21%［3］；王輝等對2003～2004年中國10家教學(xué)醫(yī)院革蘭陰性桿菌的耐藥分析結(jié)果顯示大腸埃希菌ESBLs發(fā)生率為56.8%［4］；2002年浙江省大腸埃希菌中的ESBLs發(fā)生率為36.3%［5］；2002年廣東大腸埃希菌中的ESBLs發(fā)生率為28.1%［6］。同一醫(yī)院不同時期ESBLs的發(fā)生率也有差別，如復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院從1999～2002年大腸埃希菌中的ESBLs發(fā)生率分別為21.5%、17.7%、22.6%和32.4%，有逐年升高的趨勢［7］；我院2002年、2003年、2004年1～6月大腸埃希菌ESBLs發(fā)生率分別為37.1%、45.8%和66.2%［8］，本研究結(jié)果示2005年1月～12月我院大腸埃希菌ESBLs發(fā)生率為52.79%，較2004年1～6月有所下降，可能與我院加強ESBLs的監(jiān)測和合理使用第三代頭孢菌素有一定的關(guān)系，但ESBLs發(fā)生率仍處于較高水平，因此臨床上應(yīng)繼續(xù)嚴(yán)格掌握和使用第三代頭孢菌素，以減輕抗菌藥物的選擇性壓力，防止產(chǎn)ESBLs菌株的產(chǎn)生和流行。

本文藥敏試驗敏結(jié)果顯示ESBLs菌株對亞胺培南、阿米卡星的耐藥率分別為0、7.69%，因此我院暫時將此兩藥作為臨床經(jīng)驗用藥。

ESBLs基因定位于質(zhì)粒，由于質(zhì)粒可以通過接合由供體菌轉(zhuǎn)至受體菌，通過接合試驗確證91株對利福平敏感的大腸埃希菌的ESBLs基因定位于質(zhì)粒，了解產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌在同種菌株之間的水平傳播情況。本研究提示我院大腸埃希菌臨床分離株對復(fù)方磺胺甲口惡唑、慶大霉素、頭孢吡肟和頭孢西丁的耐藥性有一部分是通過質(zhì)粒介導(dǎo)的，但主要是通過染色體或其他耐藥機制介導(dǎo)的。大多數(shù)資料表明喹諾酮類藥物的耐藥性是僅通過染色體介導(dǎo)的［9］，但近年來有許多報道認(rèn)為喹諾酮類藥物的耐藥性也可以通過質(zhì)粒傳播［10］，從我院大腸埃希菌臨床分離株的接合試驗藥敏結(jié)果來看，喹諾酮類藥物耐藥性有一部分是通過質(zhì)粒介導(dǎo)的，但主要是通過染色體介導(dǎo)。

總之，大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs發(fā)生率和水平傳播率很高，且大腸埃希菌在不同標(biāo)本、不同科室的分離率和耐藥性有較大差異，因此在臨床治療時，應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果選用合理的抗生素，延緩耐藥株的產(chǎn)生。

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