生物畢業(yè)論文范文
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第1篇
關(guān)鍵詞：新建地方本科院校；生物技術(shù)；本科畢業(yè)論文；分析研究
引言
商洛學(xué)院2006年經(jīng)教育部批準升格為本科院校，設(shè)有10個二級學(xué)院和2個教學(xué)部，共開辦31個本科專業(yè)，面向27個省市（區(qū)）招生。其中生物技術(shù)本科專業(yè)設(shè)在生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，2010年至2015年共畢業(yè)生物技術(shù)本科生215人，共完成215篇畢業(yè)論文。畢業(yè)論文（設(shè)計）是高校人才培養(yǎng)方案中的必備的實踐教學(xué)環(huán)節(jié)，具有其它教學(xué)環(huán)節(jié)所不能替代的實踐性和綜合性作用[1]。但目前，地方本科院校由于生源、選題、師資、實驗條件、管理規(guī)范等方面的制約，畢業(yè)論文（設(shè)計）工作在不同程度上均存在一定問題，制約了應(yīng)用性人才培養(yǎng)質(zhì)量的提高。為扎實有效地做好該項工作，我們對商洛學(xué)院2010-2015屆生物技術(shù)專業(yè)215名的畢業(yè)論文進行了調(diào)查分析，以期及時發(fā)現(xiàn)論文管理中存在的問題，為有針對性地提出改進措施提供必要的參考依據(jù)。
1資料與方法
1.1研究對象
商洛學(xué)院生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院2010-2015屆生物技術(shù)專業(yè)215名本科生畢業(yè)論文作為研究對象。
1.2研究方法
查閱文獻及管理文件，對2010-2015屆生物技術(shù)專業(yè)本科畢業(yè)論文的題目內(nèi)容、選題來源、指導(dǎo)教師職稱與數(shù)量、論文成績等方面進行整理和分類。運用描述性統(tǒng)計、歸納、綜合等分析方法，客觀全面地分析研究結(jié)果。
2研究結(jié)果與分析
2.1畢業(yè)論文課題來源情況與分析
第一，表1顯示，歷年來，該院生物技術(shù)專業(yè)畢業(yè)論文中實踐研究類占絕對優(yōu)勢，平均每年在95%左右，此消彼長下，理論研究類則相對較少。第二，畢業(yè)論文課題類型包括指導(dǎo)教師科研課題、有關(guān)單位委托課題、教師擬定課題、學(xué)生學(xué)術(shù)課題（含大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目、挑戰(zhàn)杯等）、學(xué)生自擬課題等。由圖1可知，近六年來，該學(xué)院生物技術(shù)專業(yè)畢業(yè)論文課題來源變化較大，其中指導(dǎo)教師科研課題占比從2010年的74.3%逐年下降至2015年的34.3%，有關(guān)單位委托課題、學(xué)生學(xué)術(shù)課題與自擬課題所占比例逐年增長，說明畢業(yè)畢業(yè)論文課題來源更加多元，分布更加均勻合理。同時，畢業(yè)論文的優(yōu)秀率從2010年的5.7%攀升至2015年的17.1%。學(xué)院近幾年加大學(xué)生自主學(xué)習(xí)、自主思考、自主創(chuàng)新能力的培養(yǎng)，大學(xué)生創(chuàng)新項目獲得省級、國家級立項屢創(chuàng)新高，2015年國家級立項達到8項。同時，教師教育教學(xué)理念和教學(xué)方式也逐步從過往的“填鴨式”向“互動式”“研討式”“問題驅(qū)動式”轉(zhuǎn)變，以上舉措大大增強了學(xué)生自主創(chuàng)新的信心，激發(fā)了學(xué)生的創(chuàng)新意識和熱情，提高了學(xué)生自主創(chuàng)新的能力和水平。
2.2畢業(yè)論文指導(dǎo)教師與論文質(zhì)量情況分析
對表2進行分析，可以得出以下幾方面：第一，2010-2015年間，生物技術(shù)專業(yè)畢業(yè)論文生師比穩(wěn)定在2:1-3:1之間，畢業(yè)論文優(yōu)秀率呈逐年上升趨勢，2012-2015年，畢業(yè)論文優(yōu)秀率平均水平在13.1%，較前兩年提升了50%左右。分析原因在于：近幾年來，學(xué)院引進了一批高學(xué)歷專業(yè)人才，師資力量顯著增強，且對教師科研工作和畢業(yè)論文工作均給予高度重視，對指導(dǎo)學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)、學(xué)科競賽等都給予科研和教學(xué)量的認可。同時，學(xué)院加大了對基礎(chǔ)實驗、實訓(xùn)條件的投入，改善和提高了實驗室整體運行能力，激發(fā)了師生開展教學(xué)科研的積極性，項目數(shù)量也逐年增加，指導(dǎo)教師在教學(xué)科研能力和畢業(yè)論文指導(dǎo)水平上均有明顯提高。第二，該院生物技術(shù)專業(yè)指導(dǎo)畢業(yè)論文的老師中有教授職稱的占總數(shù)的10%左右，比副教授和講師職稱的老師所占比例少近五倍，反映出本專業(yè)教師中教授職稱人數(shù)相對較少；副教授職稱和講師職稱的教師是畢業(yè)論文的主力軍，占全體指導(dǎo)教師的80%以上，這與理論上（副教授比例最高，教師和講師相對低）的數(shù)據(jù)分布略有差距，但對畢業(yè)論文質(zhì)量影響不大；查閱副教授和講師指導(dǎo)的學(xué)生論文發(fā)現(xiàn)，不存在指導(dǎo)人數(shù)差異極大的現(xiàn)象，本院畢業(yè)論文指導(dǎo)教師分配人數(shù)較為合理。第三，同2012、2013、2015年相比，14年論文優(yōu)秀率下降，原因分析：①該屆畢業(yè)生開題時間較晚（2014年3月），導(dǎo)致所選的課題預(yù)備和實施時間均不充裕，從而影響最終論文質(zhì)量。②與其它各年相比，2014年論文中來源于教師科研項目的論題占比為31.7%，為歷年最低。該類畢業(yè)論文課題一般情況下采用教師定題、學(xué)生選題之后由老師布置任務(wù)、安排進度、定期檢查的程序和方法，學(xué)生習(xí)慣于聽從老師的指導(dǎo)安排，即使開展拓展性的實踐訓(xùn)練也是在很有限的程度和范圍內(nèi)由教師有計劃有步驟地安排進行。但是，由于學(xué)校新專業(yè)增長快、招生人數(shù)多，指導(dǎo)教師人均指導(dǎo)學(xué)生數(shù)較多（當(dāng)年師生比1:6），顯然對學(xué)生進行畢業(yè)論文方面的系統(tǒng)輔導(dǎo)就沒有充裕的時間和精力，也是導(dǎo)致論文優(yōu)秀率下降的因素之一。
2.3其它問題分析
圖2可以看出，該院生物技術(shù)專業(yè)畢業(yè)論文選題范圍較廣，選題占比分布較為均勻。課題內(nèi)容主要涉及植物生理、分子生物學(xué)與基因工程、微生物學(xué)、地方生物資源的開發(fā)利用、組織培養(yǎng)、病蟲害防治、動植物資源野外調(diào)查等方面的研究，基本覆蓋了生物技術(shù)專業(yè)的主干課程與方向。其中占比前三位的課題植物生理、分子生物學(xué)與基因工程、微生物學(xué)是該專業(yè)對所學(xué)理論知識的進一步延伸，應(yīng)用性強、適用性好，通過此類課題的實施，加深了學(xué)生對專業(yè)知識的掌握；部分課題，例如資源調(diào)查與開發(fā)，充分體現(xiàn)了地方性和應(yīng)用性特征，為地方產(chǎn)業(yè)和生產(chǎn)實踐提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和參考依據(jù)，也讓學(xué)生了解產(chǎn)業(yè)和行業(yè)的發(fā)展背景為今后走上相關(guān)工作崗位奠定了一定基礎(chǔ)。表3可以看出，從畢業(yè)論文過程管理來看，這六年在管理上一個重要的變化是在后幾年中加強了畢業(yè)論文的中期檢查工作，同時加大了實驗室的開放力度。在此情況下，畢業(yè)論文在學(xué)校完成的數(shù)量隨之明顯增加，同時意味著學(xué)生投入實驗與指導(dǎo)教師交流溝通的實際時間增多，因此畢業(yè)論文優(yōu)秀率也得到提升。
3存在問題與建議
3.1存在問題
目前，新建地方本科院校學(xué)生基礎(chǔ)普遍較弱、自學(xué)能力較差，大多數(shù)專業(yè)學(xué)生前三學(xué)年以理論學(xué)習(xí)為主，有限的課程設(shè)計、課程實習(xí)等實踐教學(xué)一般也由教師按計劃進行，學(xué)生習(xí)慣于聽從教師指導(dǎo)安排。學(xué)生在進行畢業(yè)論文（設(shè)計）前很少主動對論文總體思路、方案設(shè)計、寫作規(guī)范等知識進行學(xué)習(xí)。因此，學(xué)生在從理論性課堂學(xué)習(xí)進入實踐性畢業(yè)論文（設(shè)計）研究的轉(zhuǎn)換過程中面臨一定困難。另一方面，近年來多數(shù)地方本科院校專業(yè)數(shù)量和招生人數(shù)增長較快，指導(dǎo)教師教學(xué)任務(wù)較重，指導(dǎo)學(xué)生人數(shù)較多，課題數(shù)量有限，在一定程度上造成畢業(yè)論文（設(shè)計）題目陳舊、重復(fù)率高等實際情況的存在，制約了畢業(yè)論文（設(shè)計）質(zhì)量的進一步提升。
3.2建議
3.2.1嚴把開題關(guān)第一，加強前期指導(dǎo)。學(xué)校在第一、二學(xué)年安排開設(shè)相應(yīng)的論文輔導(dǎo)課，講授思想道德教育時包含學(xué)術(shù)研究的基本道德規(guī)范。每學(xué)期二級學(xué)院依據(jù)教學(xué)大綱就課程設(shè)計論文、大學(xué)生創(chuàng)新、畢業(yè)論文訓(xùn)練等安排專題輔導(dǎo)和相關(guān)方面的學(xué)術(shù)講座，并要求一定比例學(xué)生參加。組織學(xué)生觀摩上一級畢業(yè)論文答辯，啟發(fā)學(xué)生的科學(xué)創(chuàng)新思維[2]，鼓勵學(xué)生在校期間參與教師科研課題，取得的具有創(chuàng)新意義的成果（論文、專利），經(jīng)學(xué)校認定后可替代畢業(yè)論文（設(shè)計）環(huán)節(jié)學(xué)分。這一方法既能充分調(diào)動各方積極性培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新能力，又可鼓勵學(xué)生高效利用前七個學(xué)期，增加第八學(xué)期的靈活性。同時，成功范例也將對其他學(xué)生起到激勵和示范作用[3]。第二，提前選題時間。一般情況下，本科畢業(yè)論文（設(shè)計）均安排在第八學(xué)期進行，而這一學(xué)期是畢業(yè)生考研面試、就業(yè)的關(guān)鍵時期，為避免此段時間學(xué)生就業(yè)的沖擊和教師指導(dǎo)過于集中，畢業(yè)論文啟動工作宜安排在第六學(xué)期末著手進行，到第七學(xué)期開始前完成選題。這樣做既能在大三學(xué)期結(jié)束的假期實習(xí)中讓學(xué)生有較長的時間進行主動思考，完成選題、查閱文獻、收集材料等畢業(yè)論文準備工作，又能激發(fā)學(xué)生對畢業(yè)論文的寫作興趣。同時可以緩解學(xué)生第八學(xué)期時間沖突的壓力，使學(xué)生有機會有針對性地結(jié)合教學(xué)實踐立題，融入到真實的培養(yǎng)綜合實踐能力的社會活動環(huán)境中，提高其分析和解決實際問題的能力，最終增強畢業(yè)論文的現(xiàn)實意義。第三，加強選題管理。首先，為確保選題質(zhì)量，備選題目數(shù)量應(yīng)大于參加畢業(yè)論文的學(xué)生數(shù)。其次，地方本科院校以培養(yǎng)應(yīng)用性人才為辦學(xué)目標，選題既要與專業(yè)知識相匹配，又要起到培養(yǎng)學(xué)生應(yīng)用所學(xué)知識解決實際問題的能力，同時盡可能體現(xiàn)地方院校的辦學(xué)特色。鼓勵優(yōu)先選擇密切聯(lián)系生產(chǎn)實際、難易適中并具有一定創(chuàng)新性的課題，對于難度較大或低級重復(fù)勞動性題目應(yīng)及時調(diào)整。最終，選題類型以實驗研究解決科學(xué)技術(shù)問題為主導(dǎo)方向，同時允許調(diào)查報告、文獻綜述、工廠設(shè)計多樣化形式存在。3.2.2加強中期檢查對畢業(yè)論文（設(shè)計）的中期檢查是承上啟下的一個重要環(huán)節(jié)，學(xué)院應(yīng)每年4月份前組織學(xué)術(shù)委員會在中期檢查中對學(xué)生的開題報告、實驗室預(yù)約單、實驗記錄、教師指導(dǎo)等環(huán)節(jié)進行逐項檢查，并要求學(xué)生提交畢業(yè)論文（設(shè)計）中期檢查表。中期檢查工作堅持做到不走形式，發(fā)現(xiàn)問題，提出批評，糾正偏誤，對于典型突出問題院分管領(lǐng)導(dǎo)主抓，動員協(xié)調(diào)各方力量，盡早解決。對于畢業(yè)論文（設(shè)計）中期檢查發(fā)現(xiàn)未按規(guī)定要求完成預(yù)期任務(wù)的情況，院內(nèi)做出通報批評，由指導(dǎo)教師與輔導(dǎo)員聯(lián)合督查，加強指導(dǎo)，最終使學(xué)生趕上進度，順利完成該項工作。3.2.3全面答辯，把好論文質(zhì)量關(guān)所有參加答辯的學(xué)生在答辯前一周都要進行資格審查，審查內(nèi)容如下：①論文復(fù)制比檢測。對于檢測結(jié)果過高的論文需要重新修改，直至符合標準。②審查論文撰寫規(guī)范。畢業(yè)論文撰寫（語言文字、邏輯格式、排版等）應(yīng)符合學(xué)校相關(guān)要求。③實行預(yù)答辯。每名學(xué)生必須參加指導(dǎo)教師組織的預(yù)答辯，導(dǎo)師模擬正式答辯提出問題，著重就學(xué)生論文初稿、制作的PPT質(zhì)量、語言表達等方面提出意見和建議，并最終決定其是否具有參加正式答辯的資格。④院內(nèi)統(tǒng)一確定論文評閱教師，實行指導(dǎo)教師、評閱教師負責(zé)制，真正起到提高畢業(yè)論文質(zhì)量的作用。3.2.4跟進相關(guān)制度第一，創(chuàng)新畢業(yè)論文學(xué)分制度。鼓勵學(xué)生在校期間參與教師科研課題，主持大學(xué)生創(chuàng)新、創(chuàng)業(yè)項目，取得的具有創(chuàng)新意義的成果（論文、專利），經(jīng)學(xué)校認定后可替代畢業(yè)論文（設(shè)計）環(huán)節(jié)學(xué)分。第二，加大實驗室開放力度。學(xué)校應(yīng)每年逐步加大對基礎(chǔ)實驗、實訓(xùn)條件的投入，持續(xù)改善提高實驗室整體運行能力，并且逐年統(tǒng)計每個實驗室運營率，對實驗室開放率設(shè)定要求，保障畢業(yè)論文（設(shè)計）順利實施的可持續(xù)性。第三，畢業(yè)論文指導(dǎo)工作認定。學(xué)校對指導(dǎo)學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)、學(xué)科競賽等教學(xué)活動給予科研和教學(xué)量化的認可。同時，該項工作納入個人年終考評和職稱晉升考核必須項目中。第四，設(shè)立畢業(yè)論文專項基金。對公開、獲得優(yōu)秀論文的學(xué)生與其指導(dǎo)教師進行適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)和精神獎勵，充分調(diào)動師生的積極性和主動性，不斷提高優(yōu)秀畢業(yè)論文比率。
4結(jié)語
目前，影響本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）質(zhì)量的因素也有很多，但只要我們從管理制度入手，規(guī)范過程監(jiān)督，加強質(zhì)量監(jiān)控，除了把好“選題關(guān)”和“實驗關(guān)”外，還必須把好“撰寫關(guān)”和“評審關(guān)”[4]，做好畢業(yè)論文的選題、開題、實施、答辯等各環(huán)節(jié)的質(zhì)量監(jiān)控。當(dāng)然，適時補充出臺更加合理的激勵制度（例如在校期間通過申報參加大學(xué)生創(chuàng)新等實踐項目和教師科研，公開發(fā)表學(xué)術(shù)論文也可納入創(chuàng)新學(xué)分或算入畢業(yè)論文（設(shè)計）學(xué)分之中）以及加大實驗室開放力度等也是提高該項工作成效的有力措施。
參考文獻：
[1]熊小琴.關(guān)于提高本科畢業(yè)論文質(zhì)量的探討[J].楚雄師范學(xué)院學(xué)報，2011，26（3）：53-56.
[2]魏育新，陳蕊麗.如何提高公安院校本科生畢業(yè)論文質(zhì)量[J].求實，2012，（1）：269-270.
[3]韓濁清.關(guān)于提高經(jīng)管類本科畢業(yè)論文教學(xué)質(zhì)量的思考[J].高等教育研究，2012，29（1）：42-45.
第2篇
獲得足夠多的微生物種類和數(shù)量是有效篩選產(chǎn)油微生物的前提。那么，從外界環(huán)境中高效分離純化微生物顯得非常重要，但有同學(xué)不能有效地進行實施。就分離產(chǎn)油真菌而言，透氣性好、富含有機質(zhì)的偏酸性土壤中真菌較多，而有的學(xué)生卻隨意從校園一角采土樣進行菌株分離，影響分離所得微生物種類和數(shù)量;也有學(xué)生在分離過程中，選用的培養(yǎng)基中不添加抗生素(如鏈霉素或氯霉素等)和孟加拉紅，致使細菌、放線菌和真菌交織生長在一起，不利于后續(xù)菌株純化。此外，還有學(xué)生在篩選到菌株后，僅從菌落形態(tài)方面簡單判斷后就將類似菌株丟棄，人為地降低了所得微生物的豐度。
2產(chǎn)油菌株篩選
學(xué)生通過查閱文獻不難發(fā)現(xiàn)產(chǎn)油微生物篩選常用的方法是脂肪粒計數(shù)法。該方法是使用70%蘇丹黑乙醇溶液將細胞內(nèi)的脂肪粒氧化成藍黑色，細胞質(zhì)經(jīng)過0．5%蕃紅復(fù)染后成紅色，顯微鏡下統(tǒng)計脂肪粒數(shù)而進行初篩［4］。但有學(xué)生在實驗前期沒有篩選到產(chǎn)油微生物，了解得知學(xué)生初篩時間存在問題。初篩時間過早，會造成一些油脂積累緩慢的微生物漏篩，但菌株培養(yǎng)時間過長也會造成產(chǎn)油優(yōu)勢菌株細胞內(nèi)的脂肪粒重疊而產(chǎn)生誤差。
3產(chǎn)油菌株鑒定
當(dāng)前微生物一般采用多相分類鑒定。為了保證畢業(yè)論文質(zhì)量，開闊學(xué)生視野，要求學(xué)生同時利用形態(tài)學(xué)觀察與生理生化特征等經(jīng)典方法和現(xiàn)代分子生物學(xué)手段對所分離得到的產(chǎn)油微生物進行分類鑒定。經(jīng)典鑒定方法中，產(chǎn)油霉菌以形態(tài)特征為主要指標，產(chǎn)油酵母則形態(tài)特征和生理生化指標兼用;分子生物學(xué)方法采用通用引物ITS1和ITS4擴增其ITS1-5．8S-ITS4保守序列，后擴增產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公司進行純化測序;測序結(jié)果提交到NCBIGenBank中Blast，獲得同源性較高菌株ITS序列，先利用ClustalX進行多重比對，再用Mega5．0構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化樹，綜合形態(tài)和生理生化特征，確定產(chǎn)油菌株的分類地位。4期馬博:生物技術(shù)專業(yè)本科畢業(yè)論文實驗的探索與實踐111實踐證明，經(jīng)典鑒定方法繁瑣耗時，而分子生物學(xué)方法簡單便捷，但實驗技能要求較高，其關(guān)鍵步驟是高質(zhì)量基因組制備和PCR擴增條件優(yōu)化。微生物基因組質(zhì)量好壞直接影響后續(xù)PCR擴增實驗。雖然多數(shù)學(xué)生提取的基因組能夠滿足PCR擴增要求，但瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果顯示都存在不同程度的彌散拖尾現(xiàn)象，表明制備的基因組有降解或含有RNA、多糖及蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。那么，基因組DNA提取過程中應(yīng)該注意哪些呢?一是在水浴保溫期間，搖動不能太劇烈，以防基因組DNA斷裂;二是用等體積氯仿/異戊醇抽提時，上清液應(yīng)無色，且EP管中的有機相與水相交界處無明顯的雜質(zhì)，否則應(yīng)重復(fù)抽提。另外，還應(yīng)在DNA提取溶液中加入1μg/LRNase，以除去RNA，提高基因組質(zhì)量。PCR擴增實驗精微，需要格外細心。如微量移液器的使用方法和PCR體系中各種藥品的添加順序都會對實驗結(jié)果產(chǎn)生重要影響，應(yīng)及時對學(xué)生進行指導(dǎo)。此外，退火溫度是PCR擴增實驗關(guān)鍵反應(yīng)條件之一。退火溫度過低會導(dǎo)致PCR產(chǎn)物雜帶過度，退火溫度過高又擴增不到目的片段。指導(dǎo)教師詳細講解PCR擴增實驗原理之后，學(xué)生掌握了PCR擴增實驗方法和注意事項。通過多次實驗，最終確定了所使用引物的退火溫度，產(chǎn)油霉菌和產(chǎn)油酵母分別為56℃和54℃。
4結(jié)論
第3篇
1菌株分離純化
獲得足夠多的微生物種類和數(shù)量是有效篩選產(chǎn)油微生物的前提。那么，從外界環(huán)境中高效分離純化微生物顯得非常重要，但有同學(xué)不能有效地進行實施。就分離產(chǎn)油真菌而言，透氣性好、富含有機質(zhì)的偏酸性土壤中真菌較多，而有的學(xué)生卻隨意從校園一角采土樣進行菌株分離，影響分離所得微生物種類和數(shù)量;也有學(xué)生在分離過程中，選用的培養(yǎng)基中不添加抗生素(如鏈霉素或氯霉素等)和孟加拉紅，致使細菌、放線菌和真菌交織生長在一起，不利于后續(xù)菌株純化。此外，還有學(xué)生在篩選到菌株后，僅從菌落形態(tài)方面簡單判斷后就將類似菌株丟棄，人為地降低了所得微生物的豐度。
2產(chǎn)油菌株篩選
學(xué)生通過查閱文獻不難發(fā)現(xiàn)產(chǎn)油微生物篩選常用的方法是脂肪粒計數(shù)法。該方法是使用70%蘇丹黑乙醇溶液將細胞內(nèi)的脂肪粒氧化成藍黑色，細胞質(zhì)經(jīng)過0．5%蕃紅復(fù)染后成紅色，顯微鏡下統(tǒng)計脂肪粒數(shù)而進行初篩［4］。但有學(xué)生在實驗前期沒有篩選到產(chǎn)油微生物，了解得知學(xué)生初篩時間存在問題。初篩時間過早，會造成一些油脂積累緩慢的微生物漏篩，但菌株培養(yǎng)時間過長也會造成產(chǎn)油優(yōu)勢菌株細胞內(nèi)的脂肪粒重疊而產(chǎn)生誤差。
3產(chǎn)油菌株鑒定
當(dāng)前微生物一般采用多相分類鑒定。為了保證畢業(yè)論文質(zhì)量，開闊學(xué)生視野，要求學(xué)生同時利用形態(tài)學(xué)觀察與生理生化特征等經(jīng)典方法和現(xiàn)代分子生物學(xué)手段對所分離得到的產(chǎn)油微生物進行分類鑒定。經(jīng)典鑒定方法中，產(chǎn)油霉菌以形態(tài)特征為主要指標，產(chǎn)油酵母則形態(tài)特征和生理生化指標兼用;分子生物學(xué)方法采用通用引物ITS1和ITS4擴增其ITS1-5．8S-ITS4保守序列，后擴增產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公司進行純化測序;測序結(jié)果提交到NCBIGenBank中Blast，獲得同源性較高菌株ITS序列，先利用ClustalX進行多重比對，再用Mega5．0構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化樹，綜合形態(tài)和生理生化特征，確定產(chǎn)油菌株的分類地位。實踐證明，經(jīng)典鑒定方法繁瑣耗時，而分子生物學(xué)方法簡單便捷，但實驗技能要求較高，其關(guān)鍵步驟是高質(zhì)量基因組制備和PCR擴增條件優(yōu)化。微生物基因組質(zhì)量好壞直接影響后續(xù)PCR擴增實驗。雖然多數(shù)學(xué)生提取的基因組能夠滿足PCR擴增要求，但瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果顯示都存在不同程度的彌散拖尾現(xiàn)象，表明制備的基因組有降解或含有RNA、多糖及蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。那么，基因組DNA提取過程中應(yīng)該注意哪些呢?一是在水浴保溫期間，搖動不能太劇烈，以防基因組DNA斷裂;二是用等體積氯仿/異戊醇抽提時，上清液應(yīng)無色，且EP管中的有機相與水相交界處無明顯的雜質(zhì)，否則應(yīng)重復(fù)抽提。另外，還應(yīng)在DNA提取溶液中加入1μg/LRNase，以除去RNA，提高基因組質(zhì)量。PCR擴增實驗精微，需要格外細心。如微量移液器的使用方法和PCR體系中各種藥品的添加順序都會對實驗結(jié)果產(chǎn)生重要影響，應(yīng)及時對學(xué)生進行指導(dǎo)。此外，退火溫度是PCR擴增實驗關(guān)鍵反應(yīng)條件之一。退火溫度過低會導(dǎo)致PCR產(chǎn)物雜帶過度，退火溫度過高又擴增不到目的片段。指導(dǎo)教師詳細講解PCR擴增實驗原理之后，學(xué)生掌握了PCR擴增實驗方法和注意事項。通過多次實驗，最終確定了所使用引物的退火溫度，產(chǎn)油霉菌和產(chǎn)油酵母分別為56℃和54℃。
4結(jié)論
