分子生物技術在中藥鑒定中應用范文

本站小編為你精心準備了分子生物技術在中藥鑒定中應用參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

【摘要】分子生物技術與植物學、動物學研究的結合，使中藥品種研究進入了一個新的高度。中藥材（不含礦物藥）所依賴的生物資源的多樣性是基于其基因的多態性結果，而基因多態性可在分子水平上檢測，它是比在形態、組織、化學水平上的檢測更能代表其變異類型的遺傳標記。

【關鍵詞】分子生物技術；基因技術；中藥鑒定

近年來分子生物技術與植物學、動物學研究的結合，使中藥品種研究進入了一個新的高度。中藥材（不含礦物藥）所依賴的生物資源的多樣性是基于其基因的多態性結果，而基因多態性可在分子水平上檢測，它是比在形態、組織、化學水平上的檢測更能代表其變異類型的遺傳標記。目前，用于中藥鑒別的分子生物學方法主要有：隨機擴增多態性DNA、DNA直接測序法、限制性片斷長度多態性分析技術、多聚酶鏈反應測序技術、生物芯片技術、DNA指紋技術等。

1基因技術

1.1DNA分子遺傳標記技術［1］

這是一種根據不同生物個體遺傳物質DNA的差異來鑒別生物物種的方法。生物的外觀性狀、細胞形態、組織結構、化學成分、蛋白質等不僅受遺傳因素的影響，還與生物的生長環境、發育階段、生理狀態有關。而DNA作為遺傳信息的直接載體，不受上述因素的影響，因此DNA分子遺傳標記鑒別藥材的方法具有高度的準確性與可靠性。（1）限制性片段多態性（RFLP）是依據不同植物個體來源的DNA所形成的不同的譜帶模型與低拷貝的DNA探針雜交得到DNA的限制性片段多態性，它代表的是基因組DNA在限制性內切酶消化后產生的片段在長度上的差異。（2）隨機擴增多態性DNA（RAPD）原理是根據DNA聚合酶鏈反應技術（PCR），采用人工合成的隨機引物，以植物組織分離的基因組DNA為模板，進行多態性DN段的隨機合成反應，從而根據DN段，將植物不同基因組予以區別。（3）擴增片段長度多態性（AFLP）是RFLP和RAPD兩種技術相結合的一種分子標記技術，既有RFLP的專一性、可靠性，又有RAPD技術的隨機性、方便性。如：用AFLP技術構建人參和西洋參的指紋圖譜，具有豐富的多態性，對鑒別真假人參、人參品種提供了非常有效的工具。用AFLP技術對石斛屬植物進行了鑒定，具有快捷、準確、可信度高的特點。（4）DNA測序法以PCR擴增產物作為測序引物，提高了DNA序列分析的效率。直接對某基因片段PCR擴增產物測序，找出其種屬特異性來鑒別中藥其中常用的基因片段包括線粒體細胞色素和rRNA基因等。如龜甲的鑒定［2］。

1.2mRNA差異顯示技術

該法旨在找出不同組織或細胞在基因表達上的差異，是通過將RNA反轉錄成單鏈cDNA，然后PCR擴增，最后分離不同分子大小的DNA，挑選出有差異表達的基因進行序列分析，這樣既可以制備探針用于穩定靈敏的檢測實驗，亦可制備其蛋白產物及其抗體進行免疫檢測［3］。借助該技術可以將種植與野生的植物藥、道地藥材與普通藥材之間的差異鑒別出來。

2DNA序列標記技術

基于PCR的DNA直接測序技術是以PCR擴增產物作為測序引物，極大地提高了DNA序列分析的效率。目前用于DNA測序的基因，主要有植物類葉綠體基因組的rbcL，matKy與核基因組的rRNA，ITS等，動物類線粒體基因組的cytb［13］。利用特異性引物對當歸、大黃種子中rRNA基因內轉錄間隔區進行套式PCR擴增，并將其堿基序列測定，結果顯示當歸、大黃種子rRNA基因內轉錄間隔區的堿基序列具有明顯的差異和可對比性，不同植物中藥材種子rRNA基因內轉錄間隔區堿基序列可作為從分子水平進行鑒定的標記。如測定分析了8種24個麻黃樣品的ITS序列，8個種被分成3個群體，分類結果與地理關系相一致，顯示出了地理差異性，同時依此結果設計了一套引物用于不同產地麻黃的鑒別［3］。但常規PCR所需的引物對必須是在已知靶DNA序列的前提下才能設計、合成，這大大限制了未知序列的基因組DNA擴增的應用范圍。

3生物芯片技術

基因芯片技術是指采用原位合成或顯微打印手段，將數以萬計的DNA探針固定于支持物表面上，產生二維DNA探針陣列，然后與標記樣本雜交，通過檢測雜交信號來實現對生物樣品的快速、并行、高效檢測或醫學檢測。基因芯片鑒別中藥材這一技術的前提是獲取不同的中藥樣本的特異性基因序列，即基因分型。研究者找出某種中藥品種的特定基因或DNA序列后，將這些特定序列作為探針固定于玻片上制成基因芯。當一個來自植物或動物的中藥樣本中含有與之互補的特定基因片段時，基因芯片可將其測試出來，由單片芯片就可用于多種中藥樣品鑒別［4］。生物芯片在中藥研究中的應用，目前還處在摸索階段，其理論與方法還不成熟。隨著生物芯片技術研發的進行，生物芯片技術在藥物研究與開發領域的應用也將更廣泛更深入。

總之，利用分子生物技術鑒別中藥的方法與傳統的中藥鑒別方法相比具有準確性高、重現性好、真實、穩定、可靠的優點。分子生物技術在中藥鑒定實踐中的不斷應用和日臻完善，利用現代化分析技術鑒別中藥的真偽，創建更為先進的中藥質量評價體系，發展現代中藥質量控制技術，已經成為保證中藥安全、有效、可控，實現中藥現代化的關鍵。新晨：

【參考文獻】

［1］方和桂.基因技術在中藥鑒定中的應用［J］.中草藥，2006，37（2）：315.

［2］StudyonPCRidentificationoftheChinesecrudedrOviductusRanae［J］.ApplEnvironmBiol，2000，6（2）：166167.

［3］ShiMM.Enablinglargescalepharmacogeneticsstudiesbyhighthroughputmutationdetectionandgenotypingtechnologies［J］.ChinchemLett，2001，47（2）：164.

［4］CaiZH，LiP，DongTTX，etal.Moleculardiversityof5rRNAspacerdomaininFritillariaspeciesrevealedbyPCRanalysis［J］.PlantaMed，1999，65（4）：360