分子遺傳學(xué)綜述范文
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第1篇
關(guān)鍵詞：動(dòng)物遺傳學(xué) 動(dòng)物科學(xué) 遺傳檢測(cè) 細(xì)胞遺傳學(xué) 分子遺傳學(xué)
中圖分類號(hào)：G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C DOI：10.3969/j.issn.1672-8181.2013.23.150
動(dòng)物遺傳學(xué)是動(dòng)物科學(xué)專業(yè)的重要專業(yè)基礎(chǔ)課程。遺傳學(xué)具有基礎(chǔ)理論抽象、邏輯思維強(qiáng)、知識(shí)面涵蓋廣等特點(diǎn)，是動(dòng)物育種的理論基礎(chǔ)。遺傳學(xué)的基本概念和原理來(lái)自于生產(chǎn)、生活和科學(xué)研究的實(shí)踐，遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)是遺傳學(xué)教學(xué)中重要的環(huán)節(jié)，是理論教學(xué)的深化和補(bǔ)充。近些年，隨著遺傳學(xué)的不斷發(fā)展，取得了很多的進(jìn)展，特別是隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，遺傳學(xué)進(jìn)入了全新的分子遺傳學(xué)時(shí)代，較之之前的形態(tài)遺傳學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)而言，分子遺傳學(xué)更為抽象，因此，長(zhǎng)期沿用下來(lái)的經(jīng)典遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)顯然已經(jīng)不能滿足遺傳學(xué)快速發(fā)展的需求，從而對(duì)遺傳學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課提出了更高的要求。
針對(duì)以上情況，結(jié)合我校動(dòng)物科學(xué)專業(yè)設(shè)置的實(shí)際情況，經(jīng)過長(zhǎng)期的摸索和創(chuàng)新，我校動(dòng)物科學(xué)學(xué)院近年來(lái)開始開設(shè)了實(shí)用遺傳檢測(cè)技術(shù)課程，學(xué)時(shí)120學(xué)時(shí)。主要通過實(shí)驗(yàn)制備和觀察，使學(xué)生從細(xì)胞、分子及群體水平上掌握遺傳學(xué)的實(shí)驗(yàn)操作方法；學(xué)會(huì)基本儀器設(shè)備的使用技巧；了解遺傳學(xué)研究方法和手段，進(jìn)一步加強(qiáng)學(xué)生獨(dú)立分析問題和解決問題的能力，獨(dú)立操作和創(chuàng)新能力及培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力。同時(shí)注意培養(yǎng)學(xué)生實(shí)事求是，嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)操作和良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣，為今后的工作和研究打下良好基礎(chǔ)。本文將就本課程的設(shè)置進(jìn)行綜述，旨在為相關(guān)學(xué)科今后在遺傳學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課程的開設(shè)方面提供借鑒。
1 細(xì)胞遺傳學(xué)篇
細(xì)胞遺傳學(xué)是研究細(xì)胞中染色體遺傳規(guī)律的學(xué)科。 同時(shí)也是在細(xì)胞層次上進(jìn)行遺傳學(xué)研究的遺傳學(xué)分支學(xué)科。著重研究細(xì)胞中染色體的起源、組成、變化、行為和傳遞等機(jī)制及其生物學(xué)效應(yīng)。
圍繞細(xì)胞遺傳學(xué)，設(shè)立了如下實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：①細(xì)胞培養(yǎng)。主要講解細(xì)胞的體外培養(yǎng)原理、條件、技巧和注意事項(xiàng)。主要通過采集動(dòng)物外周血培養(yǎng)2個(gè)周期，用以觀察培養(yǎng)細(xì)胞在體外分裂情況；②培養(yǎng)細(xì)胞的同步化處理。主要講解在體外培養(yǎng)條件下同步化處理的原理、條件、技巧和注意事項(xiàng)。處理培養(yǎng)細(xì)胞分裂中期同步化；③外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制作。主要包括以下過程：收集細(xì)胞低滲處理固定涂片染色觀察；④骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備。主要包括以下過程：秋水仙素處理取管狀骨沖取骨髓細(xì)胞低滲處理固定涂片染色觀察；⑤果蠅唾液腺染色體標(biāo)本的制備。主要包括以下過程：培養(yǎng)果蠅三齡幼蟲解剖分離唾液腺水解處理染色壓片觀察；⑥染色體顯G帶。主要包括以下過程：制備染色體標(biāo)本片胰蛋白酶處理染色觀察；⑦各種顯微鏡的調(diào)試實(shí)用實(shí)踐。主要包括熟悉普通研究顯微鏡，相差顯微鏡，暗場(chǎng)顯微鏡，熒光顯微鏡的光路合軸、聚光器調(diào)焦、濾鏡選用等操作；⑧染色體標(biāo)本的觀察照相。主要包括以下過程：顯微鏡下觀察制備好的染色體標(biāo)本片統(tǒng)計(jì)分裂相的比例數(shù)細(xì)胞染色體數(shù)選形態(tài)良好數(shù)目占眾數(shù)的分裂相拍照；⑨染色體核型分析。主要包括以下過程：染色體照片photoshop軟件裁剪整理同源染色體配對(duì)排序測(cè)染色體臂長(zhǎng)計(jì)算相對(duì)長(zhǎng)度和臂比。
2 分子遺傳學(xué)篇
隨著遺傳學(xué)的迅猛發(fā)展，分子遺傳學(xué)已經(jīng)滲透到了遺傳學(xué)的各個(gè)角度，分子遺傳學(xué)也因此在教學(xué)中已經(jīng)占有了相當(dāng)大的比重。分子遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)也成為研究者使用得最多的分析手段，這就進(jìn)一步要求我們的實(shí)驗(yàn)教學(xué)也要適應(yīng)遺傳學(xué)的發(fā)展。
圍繞分子遺傳學(xué)，設(shè)立了如下實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：①動(dòng)物組織（肌肉）中DNA的提取。主要包括以下過程：采集動(dòng)物組織材料破壞細(xì)胞膜和核膜白和DNA分離抽提純化DNA乙醇沉淀DNA檢測(cè)DNA純度和量；②動(dòng)物性別鑒定。主要包括以下過程：提取動(dòng)物組織DNAsry特異引物PCR擴(kuò)增電泳判斷；③DNA酶切電泳。主要包括以下過程：λDNA限制性內(nèi)切酶酶切瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)；④動(dòng)物來(lái)源物種鑒定。主要包括以下過程：樣品采集基因組DNA提取PCR-RFLP瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)判斷；⑤動(dòng)物組織總RNA的提取。主要包括以下過程：樣品采集RNA提取瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)；⑥Total RNA質(zhì)量的檢測(cè)及cDNA的制備。主要包括以下過程：紫外分光光度計(jì)檢測(cè)Total RNA質(zhì)量反轉(zhuǎn)錄cDNA檢測(cè)；⑦microRNA指紋圖譜技術(shù)（MTFP）在肉品質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用。主要包括以下過程：樣品采集總RNA提取及檢測(cè)cDNA的制備及檢測(cè)PCR反應(yīng)及檢測(cè)PAGE電泳檢測(cè)和分析；⑧PCR-RFLP鑒定ABO基因型。主要包括以下過程：毛囊（毛發(fā)）中總DNA的提取及電泳檢測(cè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因片段擴(kuò)增及電泳檢測(cè)擴(kuò)增片段限制性酶切及電泳檢測(cè)。
遺傳學(xué)是研究生物遺傳和變異的科學(xué)。隨著現(xiàn)代生物科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，遺傳學(xué)已成為生命科學(xué)領(lǐng)域中發(fā)展最為迅速的基礎(chǔ)學(xué)科之一，而實(shí)驗(yàn)實(shí)踐教學(xué)環(huán)節(jié)為培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維、探索思維和實(shí)踐創(chuàng)新能力提供重要途徑，并且可以提高學(xué)生的實(shí)際動(dòng)手能力和分析問題、解決問題的能力。遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法是遺傳學(xué)建立和發(fā)展的基礎(chǔ)，如今現(xiàn)代的遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)已廣泛滲透到生命科學(xué)的各個(gè)分支領(lǐng)域，并正在發(fā)揮其獨(dú)特的作用。本文通過數(shù)名長(zhǎng)期工作在遺傳學(xué)本科教學(xué)一線的教師多年的教學(xué)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合動(dòng)物科學(xué)專業(yè)設(shè)置的特色，摸索了一套適合動(dòng)物科學(xué)專業(yè)本科生實(shí)際的實(shí)驗(yàn)課教學(xué)體系，旨在為培養(yǎng)理論與實(shí)踐兼?zhèn)涞母咚刭|(zhì)動(dòng)物科學(xué)方向的本科生做出一定的貢獻(xiàn)，也期望為國(guó)內(nèi)同行遺傳學(xué)教學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)課的開設(shè)提供一定的借鑒作用。
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作者簡(jiǎn)介：蘇蕊，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)科院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018
張燕軍，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)科院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018
第2篇
[關(guān)鍵詞]林麝；分子遺傳學(xué)；分子標(biāo)記；人工繁育；泌香
林麝Moschusberezovskii又名麝鹿、香獐，屬偶蹄目Artiodactyla、麝科Moschidae、麝屬M(fèi)oschus，是目前養(yǎng)殖規(guī)模較大、數(shù)量最多的麝科動(dòng)物之一。雄麝香腺分泌的外激素――麝香在傳統(tǒng)中藥領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用[1-2]。由于國(guó)際香料市場(chǎng)和醫(yī)療行業(yè)對(duì)麝香需求量的大增，人類“殺麝取香”和對(duì)其棲息地的嚴(yán)重破壞，已使該物種野生種群數(shù)量急劇減少，現(xiàn)存麝類已面臨瀕危。目前，林麝已被列人CITES附錄Ⅰ中，《中國(guó)瀕危動(dòng)物紅皮書》將麝列為瀕危或易危動(dòng)物[3]。我國(guó)1988年頒布的野生動(dòng)物保護(hù)法將林麝列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，2002年又將其提升為一級(jí)保護(hù)動(dòng)物。麝的珍貴引起了許多生物學(xué)工作者的濃厚興趣，在林麝的生態(tài)學(xué)[4]、行為學(xué)[5]、分類學(xué)[6]、生理學(xué)[7]以及麝香的藥理學(xué)與臨床應(yīng)用[8]等方面開展了積極的探索。
近年來(lái)，隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展，細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等新興生物技術(shù)開始被不斷地運(yùn)用到林麝遺傳育種工作中，為林麝的育種保護(hù)工作注入新的活力。其中，以新興發(fā)展起來(lái)的分子遺傳標(biāo)記技術(shù)最引人注目，分子遺傳標(biāo)記的出現(xiàn)使基于此類標(biāo)記的選擇育種技術(shù)有了實(shí)現(xiàn)的可行性，顯現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用潛力。當(dāng)前，分子遺傳標(biāo)記在林麝遺傳育種中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在遺傳分類、人工繁育、泌香、疾病等方面。本文就分子遺傳學(xué)在林麝研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀做一綜述，并對(duì)后期研究進(jìn)行了展望，以期為提高林麝的生產(chǎn)性能提供參考。
1林麝分子遺傳標(biāo)記
分子遺傳標(biāo)記是基于DNA差異進(jìn)行個(gè)體或群體遺傳多樣性分析的有力工具。常用于林麝遺傳多樣性分析的分子標(biāo)記方法有AFLP，mtDNA，微衛(wèi)星DNA等。
AFLP技術(shù)在種群結(jié)構(gòu)和差異的調(diào)查中起著非常重要作用[9]。陳軒[10]根據(jù)AFLP分子標(biāo)記的特點(diǎn)，以四川養(yǎng)麝研究所白沙養(yǎng)麝場(chǎng)21只林麝樣品和金鳳山養(yǎng)麝場(chǎng)14只林麝樣品為材料，對(duì)2個(gè)種群的遺傳多樣性進(jìn)行了比較分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)四川養(yǎng)麝研究所白沙養(yǎng)麝場(chǎng)圈養(yǎng)的2個(gè)林麝種群均具有較高水平的遺傳多樣性，但金鳳山種群具有相對(duì)較高的遺傳多樣性。趙莎莎[11]利用相同的原材料進(jìn)一步檢測(cè)了22對(duì)選擇性引物組合，共獲得了908個(gè)AFLP多態(tài)片段，結(jié)果證明了麝香高產(chǎn)組在多態(tài)位點(diǎn)比率（PPL）上極顯著高于參照組和低產(chǎn)組，在遺傳多樣性水平上也有更高的整體競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。
mtDNA是核外遺傳物質(zhì)，由于mtDNA的控制區(qū)富含A，T堿基，屬于遺傳高變區(qū)，進(jìn)化速度比其他區(qū)域快，多態(tài)性豐富，常被應(yīng)用到野生動(dòng)物群體遺傳多樣性檢測(cè)中。彭紅元等[12]通過分析四川省3個(gè)本地種群中林麝mtDNA控制區(qū)域582bp片段，發(fā)現(xiàn)94個(gè)變異位點(diǎn)，在109個(gè)個(gè)體中檢測(cè)出27個(gè)單倍型，表明3個(gè)群體間很少進(jìn)行遺傳交流，建議建立系譜以增加群體間基因的交流。2014年，馮慧等[13]調(diào)查了陜西省林麝1個(gè)圈養(yǎng)種群3個(gè)野生種群mtDNAD-Loop632bp片段的遺傳多樣性和種群結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，陜西省林麝群體mtDNAD-loop區(qū)序列存在著較豐富的變異和遺傳多樣性，鳳縣野生群體和鳳縣養(yǎng)殖場(chǎng)群體的核苷酸多樣性和單倍型多樣較高，養(yǎng)殖場(chǎng)種群沒有出現(xiàn)近親繁殖及遺傳多樣性下降的情況。鳳縣野生群體和鳳縣養(yǎng)殖場(chǎng)群體兩者遺傳分化較小，存在著較高的基因流水平。
微衛(wèi)星DNA廣泛分布與真核生物基因組中，具有多態(tài)性高、共顯性遺傳、選擇中性、易于操作等特點(diǎn)，是一種極具應(yīng)用價(jià)值的分子遺傳標(biāo)記，由于微衛(wèi)星重復(fù)序列在群體間和不同的個(gè)體間通常表現(xiàn)出很高的序列變異性，并且這種變異呈共顯遺傳，因而在微衛(wèi)星重復(fù)序列廣泛應(yīng)用于物種遺傳多樣分析。2004年，鄒方東[14]運(yùn)用微衛(wèi)星標(biāo)記法構(gòu)建了3個(gè)林麝基因組微衛(wèi)星富集文庫(kù)，每個(gè)文庫(kù)含有上萬(wàn)個(gè)轉(zhuǎn)化子。2005年，Zou等[15]又運(yùn)用了改進(jìn)的富集文庫(kù)方式來(lái)分離微衛(wèi)星位點(diǎn)，獲得了野生林麝的多態(tài)位點(diǎn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)70%的基因組文庫(kù)為（AC）_n文庫(kù)，8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)呈現(xiàn)高度多態(tài)性，可作為研究林麝的分子遺傳標(biāo)記。2006年，夏珊[16]對(duì)構(gòu)建林麝的微衛(wèi)星文庫(kù)篩選了6個(gè)多態(tài)性好的座位，并對(duì)林麝的遺傳多樣性進(jìn)行初步的分析，6個(gè)微衛(wèi)星座位的多態(tài)信息含量（PIC）最低為0.6214，最高為0.7984，說(shuō)明這6個(gè)林麝微衛(wèi)星座位具有高度多態(tài)性，進(jìn)一步證明了微衛(wèi)星DNA是很好的分子遺傳標(biāo)記。
2林麝遺傳分類研究
目前，對(duì)林麝的遺傳分類有3種研究手段，分別為形態(tài)解剖學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)。一種是根據(jù)外形、頭骨和距骨的形態(tài)特點(diǎn)以及生態(tài)習(xí)性、分布等認(rèn)為麝確是一個(gè)獨(dú)立物種[17]。陳服官等[18]根據(jù)林麝生物標(biāo)本，再一次肯定了這種分類方法。林麝作為麝科動(dòng)物一個(gè)亞種除了在形態(tài)解剖學(xué)上得到了明確的肯定外，從細(xì)胞遺傳學(xué)特征來(lái)看，也得到了有力的支持。細(xì)胞的染色體組型和染色體帶型都代表著種的特性，它為不同物種在分類研究和確定其在進(jìn)化過程中的位置提供了一個(gè)重要的依據(jù)。2004年，鄒方東等[19]以林麝外周血淋巴細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，首先建立了適合林麝淋巴細(xì)胞增殖的培養(yǎng)體系，并用培養(yǎng)出的細(xì)胞制備染色體，確定林麝核型是2N=58，且全都是端著絲粒染色體，還首次應(yīng)用染色體G-帶技術(shù)，對(duì)林麝染色體的G-帶帶型進(jìn)行了研究，確定了林麝染色體是2N=58，且全都是端著絲粒染色體，這與其他鹿科動(dòng)物存在較大差異。結(jié)果表明，從細(xì)胞遺傳學(xué)角度將麝分為單獨(dú)一科也是比較合理的。
隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，麝作為獨(dú)立的科在分子水平上相繼得到了印證。Kuznetsova等[20]對(duì)鹿科家族成員和其他偶蹄動(dòng)物的線粒體基因12S和16SrRNA（2445bp）的序列和核β-spectrin基因（828bp）的區(qū)域進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)鹿科和麝存在幾個(gè)分子共源性特征。劉學(xué)東等[21]則利用測(cè)得梅花鹿、坡鹿、原麝和林麝的線粒體12SrRNA基因全序列，與GenBank中檢索到的鼷鹿、長(zhǎng)頸鹿和牛12SrRNA基因全序列進(jìn)行對(duì)比，分別應(yīng)用ME，ML，MP方法重建系統(tǒng)樹，發(fā)現(xiàn)3種樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)一致，結(jié)果顯示麝、鹿、牛、長(zhǎng)頸鹿均各自為單系群，且麝作為一個(gè)單系進(jìn)化。此外，采用PCR技術(shù)和序列測(cè)定方法從線粒體DNA上得到367bp的細(xì)胞色素b基因片段序列，分析其序列可得出在麝、獐、麂和鹿的系統(tǒng)進(jìn)化中，麝約在600萬(wàn)年前與鹿科分歧，而鹿科的3個(gè)亞科是在350～500萬(wàn)年前開始分歧，表明麝可單獨(dú)作為麝科[22]。張亮則采用克隆SRY基因的CDS區(qū)的方法，得到林麝和馬麝的SRY基因，對(duì)其進(jìn)行分析顯示，支持麝作為獨(dú)立一科的觀點(diǎn)[23]。2009年，彭紅元等[12]測(cè)定了林麝全線粒體序列，分別運(yùn)用MP，Baryes方法與其他22種反芻亞目的動(dòng)物相關(guān)基因序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，表明林麝與鹿科動(dòng)物的親緣關(guān)系最為接近，并單獨(dú)形成一支，在牛科和鹿科之前分化出來(lái)，為鹿科、牛科互為姐妹群。2012年，馮慧等[13]從秦嶺林麝的毛發(fā)樣品中提取得到線粒體DNACytb基因的部分序列，并對(duì)其進(jìn)行序列分析，發(fā)現(xiàn)林麝、原麝、馬麝、喜馬拉雅麝、黑麝是5種獨(dú)立的種，林麝與原麝的親緣關(guān)系最近，進(jìn)一步彌補(bǔ)了現(xiàn)有形態(tài)分類研究的不足，得到更有說(shuō)服力的分析結(jié)果。截至目前，運(yùn)用各種克隆方法得到的林麝DNA序列，對(duì)其分析后發(fā)現(xiàn)其遺傳學(xué)分類與形態(tài)解剖學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)得到的結(jié)果是相同，對(duì)麝作為單獨(dú)一個(gè)物種的結(jié)果進(jìn)行了充分的肯定。
3林麝分子遺傳學(xué)在人工繁育上的應(yīng)用
經(jīng)過50多年的發(fā)展，我國(guó)在林麝的人工繁育方面取得了不少優(yōu)秀成果。但是，由于基礎(chǔ)研究及資金等方面的問題，我國(guó)的圈養(yǎng)林麝規(guī)模一直徘徊在6000只左右[24]，并且在林麝養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的種群退化、后代抗病力下降等問題也不斷凸顯，因此，加大對(duì)林麝的人工繁育研究，特別是基礎(chǔ)研究工作力度顯得尤為重要。2004年，鄒方東等[25]首次成功克隆了與林麝生殖相關(guān)的核β-A亞基成熟肽序列，為林麝的人工繁育和麝資源的保護(hù)利用提供了相關(guān)基礎(chǔ)資料。也有人對(duì)俄羅斯西伯利亞地區(qū)、遠(yuǎn)東地區(qū)和薩哈林島的麝進(jìn)行遺傳多樣性分析，發(fā)現(xiàn)隨著棲息地的分裂，麝的近親繁殖遺傳多樣性在不斷上升，進(jìn)而出現(xiàn)種群隔離現(xiàn)象[26]。此外，岳碧松研究團(tuán)隊(duì)對(duì)四川省米亞羅、金鳳、馬爾康3個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的林麝進(jìn)行微衛(wèi)星分析，表明都是有效的群體規(guī)模，其遺傳結(jié)構(gòu)具有重要的保護(hù)意義，并建議在林麝人工育種時(shí)應(yīng)當(dāng)充分考慮這種遺傳結(jié)構(gòu)[27]，這為林麝的選育工作提供了新的認(rèn)識(shí)。2013年，岳碧松研究團(tuán)隊(duì)再次對(duì)四川米亞羅地區(qū)人工繁育林麝的多態(tài)性進(jìn)行微衛(wèi)星分析，發(fā)現(xiàn)由于引入新的血緣，林麝的雜合程度和遺傳多樣性在不斷增加[28]，為林麝的人工繁殖管理提供了一種新的方法。
4分子遺傳學(xué)與林麝泌香的關(guān)系
獲取麝香是保護(hù)林麝遺傳資源的本質(zhì)因素，提高麝香的產(chǎn)量，對(duì)林麝泌香相關(guān)的研究已經(jīng)從組織解剖水平深入到泌香分子機(jī)制的研究。陳軒[10]分析了林麝AFLP的多態(tài)性與產(chǎn)香量的關(guān)系，篩選出34個(gè)在高產(chǎn)組和低產(chǎn)組間等位基因頻率分布有顯著（P參照組>低產(chǎn)組（P
白康[29]采用PCR-SSCP、測(cè)序分析等生物技術(shù)手段對(duì)雄性激素受體（AR）基因外顯子1，4，8進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，AR基因外顯子1，4，8在所做樣本中不存在多態(tài)性，說(shuō)明雄性林麝AR基因外顯子（1，4，8）在林麝中具有高度保守性。王勤等[30]克隆了調(diào)控林麝的繁殖和泌香的重要垂體激素FSH-β和LH-β基因，這為開展林麝泌香過程中基因表達(dá)的關(guān)聯(lián)分析提供了一定的理論依據(jù)。
5分子遺傳學(xué)與林麝疾病相關(guān)分析
麝類疾病是長(zhǎng)期阻礙林麝人工養(yǎng)殖發(fā)展的關(guān)鍵因素。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子遺傳標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)運(yùn)用到林麝的疾病診治過程中，這為尋找麝類疾病起因，制定相應(yīng)抗體提供了一種新的借鑒方法。羅燕等[31]對(duì)林麝肺源致病性Escherichiacoli毒力基因進(jìn)行了檢測(cè)及鑒定，為進(jìn)一步研究林麝肺源致病性E.coli的致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)為防治林麝E.coli性肺炎提供了依據(jù)。2013年，鄒丹丹等[32]克隆和表達(dá)了林麝IL-1β基因，為其用于林麝疾病的防治奠定基礎(chǔ)。李靈等[33]以四川養(yǎng)麝研究所的115只林麝個(gè)體為對(duì)象，通過對(duì)MHCⅡ類經(jīng)典的DR和DQ座位的分離、遺傳變異分析和化膿性疾病相關(guān)性的分析，揭示了林麝MHCⅡ基因多態(tài)性的維持機(jī)制及其與化膿性疾病的密切關(guān)系。周鑫等[34]為調(diào)查林麝肺源致病性大腸桿菌O因子血清型以及相關(guān)耐藥基因的流行狀況，采用玻板凝集反應(yīng)法進(jìn)行O因子血清型鑒定，同時(shí)用PCR方法檢測(cè)耐藥基因，發(fā)現(xiàn)29株菌皆攜帶多種耐藥基因，這對(duì)林麝臨床科學(xué)合理用藥有重要指導(dǎo)意義。
6問題及展望
6.1存在的問題
6.1.1林麝馴化程度低，對(duì)分子遺傳工作的開展帶來(lái)極大不便從1958年以來(lái)，全國(guó)陸陸續(xù)續(xù)開展了林麝的馴化研究，并取得了一定的成果，其中包括陜西鎮(zhèn)坪、四川馬爾康、重慶南川等養(yǎng)殖基地[35-37]。但由于科研經(jīng)費(fèi)有限及林麝養(yǎng)殖效益等問題，馴化研究并沒有持續(xù)，這造成了林麝的馴化程度很低。這給林麝分子遺傳研究過程中的樣品采集、生產(chǎn)性能測(cè)定等工作帶來(lái)極大不便，也給林麝帶來(lái)強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)。強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)不僅給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性與穩(wěn)定性造成一定程度的影響，還對(duì)林麝自身的健康造成不利影響。
6.1.2林麝為一級(jí)保護(hù)動(dòng)物且價(jià)格昂貴，限制了某些分子遺傳相關(guān)工作的開展林麝為國(guó)家一級(jí)珍稀瀕危藥用動(dòng)物，不允許因?yàn)榭茖W(xué)研究而對(duì)林麝有任何傷害，因此無(wú)法及時(shí)地采集林麝內(nèi)臟進(jìn)行深入的分子生物學(xué)相關(guān)研究，只能采集林麝毛發(fā)、血液或因疾病死亡林麝的內(nèi)臟，這給林麝分子遺傳學(xué)相關(guān)研究帶來(lái)了不便。同時(shí)，由于林麝資源量有限，存在非常嚴(yán)重的炒種情況，目前每對(duì)林麝的價(jià)格被炒到7萬(wàn)元，昂貴的種源成本大大降低了林麝產(chǎn)香的盈利能力，也大大提高了林麝研究的成本，這種現(xiàn)象不僅嚴(yán)重阻礙了林麝分子遺傳相關(guān)研究，而且不利于整個(gè)林麝養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。
6.1.3相關(guān)科研人員稀缺，發(fā)展緩慢目前，相對(duì)與其他常見動(dòng)物，從事林麝相關(guān)工作的人員極少，主要分布在四川養(yǎng)麝研究所、重慶市藥物種植研究所、四川大學(xué)、華東師范大學(xué)、浙江大學(xué)、陜西動(dòng)物研究所等科研院所，幾乎沒有進(jìn)行過林麝養(yǎng)殖行業(yè)的專題研討及技術(shù)交流會(huì)。因此先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)在林麝上應(yīng)用的時(shí)間相對(duì)靠后，這也大大地降低了林麝遺傳學(xué)相關(guān)研究的進(jìn)展。
6.2展望
6.2.1麝香資源奇缺是林麝分子遺傳學(xué)研究開展的內(nèi)在動(dòng)力麝香具有極高的藥用價(jià)值，但由于麝香的產(chǎn)量極低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求，這使得麝香的價(jià)格長(zhǎng)期維持在黃金的3倍左右，因此，提高麝香產(chǎn)量就成為了林麝養(yǎng)殖行業(yè)的最重要目標(biāo)。但由于林麝資源量極少且馴化程度低，傳統(tǒng)遺傳育種方法很難在林麝上得到順利開展，因此通過分子遺傳學(xué)方法篩選麝香高產(chǎn)分子標(biāo)記越來(lái)越成為關(guān)注的焦點(diǎn)。
6.2.2新技術(shù)新方法的應(yīng)用將大大加快林麝分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展林麝分子遺傳學(xué)研究隨著分子生物技術(shù)的不斷進(jìn)步已經(jīng)取得了長(zhǎng)足發(fā)展，DNA條形碼鑒定物種技術(shù)[38]、DNA分子性別鑒定技術(shù)[39]已成功運(yùn)用在林麝遺傳資源保護(hù)與與繁育工作中。然而，相對(duì)于林麝如此豐富的遺傳背景，僅靠分子生物學(xué)技術(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，而且相關(guān)的研究成果得不到充分應(yīng)用，因此有必要進(jìn)一步了解林麝的遺傳結(jié)構(gòu)，將傳統(tǒng)研究方法和分子生物技術(shù)相結(jié)合，了解其遺傳結(jié)構(gòu)差異和特征，進(jìn)行針對(duì)性保護(hù)和利用。另外，為了促進(jìn)人工養(yǎng)麝事業(yè)的發(fā)展，提高林麝種群增長(zhǎng)率和麝香產(chǎn)量，須繼續(xù)加強(qiáng)對(duì)林麝的泌香性狀、疾病抗性等表型的標(biāo)記研究，為實(shí)現(xiàn)標(biāo)記輔助選擇（MAS），加速良種培育打下基礎(chǔ)。
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第3篇
關(guān)鍵詞：彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤；形態(tài)學(xué)；分子遺傳學(xué)；免疫表型；預(yù)后
彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse largeB-cell lymphoma，DLBCL）占非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin's lympho-mas，NHL）的31%～34%，在亞洲國(guó)家一般大于40%，是NHL中最常見的一個(gè)亞型。2008年WHO將DLBCL定義為一類彌漫生長(zhǎng)的B細(xì)胞性淋巴瘤，瘤細(xì)胞核大于或等于正常吞噬細(xì)胞核，或大于正常淋巴細(xì)胞的2倍[1]。DLBCL在臨床特征、侵襲部位、組織形態(tài)學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫表型等方面，均表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性。本研究著重從臨床、免疫、分子遺傳學(xué)等方面，對(duì)近年來(lái)的國(guó)內(nèi)外研究工作及進(jìn)展進(jìn)行綜述。
1病因?qū)W
DLBCL的病因尚不清楚，大多數(shù)為原發(fā)，也可從慢性B淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤、某些霍奇金淋巴瘤等發(fā)展和轉(zhuǎn)化而來(lái)，這種轉(zhuǎn)化可能與一些染色體結(jié)構(gòu)改變有關(guān)。
DLBCL的發(fā)生可能與病毒感染、免疫缺陷以及自身免疫有關(guān)。EB病毒、人類免疫缺陷病毒（HIV）、人類皰疹病毒8型（HHV-8）等感染與DLBCL的發(fā)生有著較為密切的關(guān)系。2011年5月第十二屆全國(guó)淋巴瘤學(xué)術(shù)大會(huì)肯定了我國(guó)近年來(lái)惡性淋巴瘤發(fā)病率逐年上升與環(huán)境污染和食品添加劑之間具有密切關(guān)系[2]。
2流行性病學(xué)與臨床特征
DLBCL是成人淋巴瘤中發(fā)病最多的一型，多見于60歲以上的老年人，也可見于兒童，男性比女性稍多。DLBCL臨床上以迅速增大的無(wú)痛性腫塊為典型表現(xiàn)，部分患者可有發(fā)熱、體重減輕等癥狀。DLBCL的臨床過程呈侵襲性，多為單個(gè)淋巴結(jié)或結(jié)外病灶出現(xiàn)迅速長(zhǎng)大的局限性腫塊，約1/3的患者有全身癥狀[3]。腫瘤主要原發(fā)于淋巴結(jié)內(nèi)，但有約30%～40%的患者首發(fā)于淋巴結(jié)外，一般呈局限性病灶。結(jié)外發(fā)生部位常見于胃腸道、皮膚、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肺、肝、縱隔、骨骼、生殖器、及韋氏環(huán)，骨髓和血液的原發(fā)或累及少見，最常見的部位是胃腸道（胃和回盲部）[4]。
3分子遺傳學(xué)
DLBCL具有多種特征性的細(xì)胞分子遺傳學(xué)改變，許多病例往往具有復(fù)合性基因異常[5]。DLBCL常見的分子遺傳學(xué)改變包括1號(hào)染色體q2～23、6號(hào)染色體q21～25、14號(hào)染色體q11～12等區(qū)域出現(xiàn)缺失，12號(hào)染色體q12～14增多，非整倍體核型（+5，+6，+7，+18）及6q缺失，bcl-1、bcl-2、bcl-6、bcl-10、c-myc基因易位[5]，等等。
20%～30%的DLBCL中可發(fā)生bcl-2基因和IgH基因易位，有研究表明多數(shù)bcl-2基因易位的DLBCL是由濾泡性淋巴瘤轉(zhuǎn)化而來(lái)。DLBCL中常涉及3 q27區(qū)域的改變，包括bcl-6基因易位、5'-非編碼區(qū)高頻突變及bcl-6基因內(nèi)部缺失等，導(dǎo)致原癌基因bcl-6異常。在約30%～40%的DLBCL中可以檢測(cè)到bcl-6的t（3；14）（q27；q32）易位，該易位與預(yù)后不良有關(guān)，并且是一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因素；40%～70%的DLBCL發(fā)生bcl-6突變；此外，MU M-1基因易位到第14號(hào)染色體I g H增強(qiáng)位點(diǎn)，即t（6；14）（p25；q32）染色體易位，導(dǎo)致MUM-1蛋白過表達(dá)，從而促進(jìn)DLBCL形成。少數(shù)DLBCL中還可檢出染色體易位t（1；14）導(dǎo)致的bcl-10基因易位，t（11；14）導(dǎo)致的bcl-1基因易位，8號(hào)染色體t（8；14）（q24；q32）導(dǎo)致的c-myc基因易位，等等。
在DLBCL中發(fā)現(xiàn)少數(shù)的p53基因的失活，p53抑癌基因在細(xì)胞增殖和存活的調(diào)控中起著重要的作用[6]。在DLBCL病例中因P16基因沉默表達(dá)或者表達(dá)量減少，從而誘發(fā)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)失控，發(fā)生癌變。有研究發(fā)現(xiàn)DLBCL的發(fā)病還與原癌基因擴(kuò)增有關(guān)，相關(guān)的原癌基因包括：rel、myc、bcl-2、rel基因編碼NF-rB信號(hào)途徑中的轉(zhuǎn)錄因子REL蛋白，REL蛋白對(duì)于惡性B細(xì)胞的增殖與生存十分重要[7]。
4免疫表型特征
DLBCL免疫分型方法有Hans分型、Choi分型、Tally分型[8]，目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院采用Hans的方法，通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CD10、BCL-6和MUM-1三種蛋白的表達(dá)，從而將DLBCL分為GCB亞型和非GCB亞型，后者包括ABC亞型和少數(shù)未分類者，其與基因表達(dá)譜分型的符合率可達(dá)80%～86%。有研究顯示兩個(gè)亞型間在化療反應(yīng)性和預(yù)后上與基因表達(dá)譜分型相似[8]。
DLBCL分類采用免疫表型、組織學(xué)及臨床資料相結(jié)合，對(duì)指導(dǎo)臨床治療和判斷預(yù)后有重要意義。
