美章網(wǎng) 資料文庫 姜黃素逆轉(zhuǎn)范文

姜黃素逆轉(zhuǎn)范文

本站小編為你精心準(zhǔn)備了姜黃素逆轉(zhuǎn)參考范文,愿這些范文能點燃您思維的火花,激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

1材料與方法

1.1材料姜黃素(Curcumin,CUR),羅丹明-123(Rhodamine-123,R-123)及MTT均為Sigma公司產(chǎn)品。鹽酸阿霉素(Adriamycin,ADR)為深圳萬樂藥業(yè)公司產(chǎn)品。DMEM培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品。膀胱移行細(xì)胞癌株BIU-87,由北京醫(yī)科大學(xué)泌尿外科研究所饋贈;耐藥株BIU-87/ADR系由本實驗室通過采用遞增阿霉素劑量的方式誘導(dǎo)建立的呈典型MDR表型的耐藥細(xì)胞亞株。高表達(dá)P-gp。細(xì)胞在含0.5mg·L-1濃度的阿霉素、10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中以37℃,5%CO2條件培養(yǎng),實驗前2d換無藥培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.2方法

1.2.1MTT實驗將處于對數(shù)生長期的兩種細(xì)胞分別以2×104/ml濃度接種于96孔培養(yǎng)板,每孔終體積200μl。上述條件下培養(yǎng)24h,小心吸盡每孔培養(yǎng)液。實驗組Ⅰ分別加入不同濃度的阿霉素、實驗組Ⅱ分別加入不同濃度的阿霉素加姜黃素(以終濃度0.1%DMSO助溶)。阿霉素終濃度分別為0.05,0.1,0.25,1.5,5(μg/ml),姜黃素終濃度為25μmol·L-1。對照組Ⅰ為不加細(xì)胞僅含培養(yǎng)液的空白對照,對照組Ⅱ為不加藥物僅加細(xì)胞的陰性對照,以上述條件培養(yǎng)48h后,每孔加MTT(5mg/ml)液20μl,37℃繼續(xù)孵育4h,終止培養(yǎng),小心吸棄上清液,每孔加150μlDMSO,振蕩10min使結(jié)晶物充分溶解。由空白孔調(diào)零后,以酶標(biāo)儀檢測490nm處的光吸收值(A)。

細(xì)胞存活率(IC)=實驗組平均A值/陰性對照組平均A值

逆轉(zhuǎn)指數(shù)(RI)=IC50(BIU-87/ADR+ADR)/IC50(BIU-87/ADR+ADR+CUR)

1.2.2羅丹明外排實驗羅丹明作為P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的轉(zhuǎn)運底物能較好的代表其轉(zhuǎn)運功能[1,2]。將處于指數(shù)生長期的BIU-87/ADR細(xì)胞以2×104/ml接種于24孔培養(yǎng)板,每孔終體積1ml。上述條件下培養(yǎng)24h。小心吸棄培養(yǎng)液,加入羅丹明至終濃度為5μg·ml-1,上述條件繼續(xù)培養(yǎng)30min,吸棄培養(yǎng)液,加入不含羅丹明的培養(yǎng)液。實驗組Ⅰ僅含培養(yǎng)液和細(xì)胞,實驗組Ⅱ在Ⅰ的基礎(chǔ)上加入姜黃素至終濃度為25μmol·l-1,對照組為含細(xì)胞不加藥液組。分別于0,0.5,1.0,2.0h收獲細(xì)胞。細(xì)胞收獲方法為:吸棄培養(yǎng)液、0.25%胰酶消化、冷PBS(0℃)吹洗、離心(800r/min)3次后,500μl冷PBS吹散細(xì)胞,在流式細(xì)胞儀上檢測(激發(fā)波長480nm,發(fā)射波長540~660nm),以熒光強度平均值(Mean)表示細(xì)胞內(nèi)羅丹明濃度。細(xì)胞內(nèi)羅丹明濃度以下式計算:A=實驗組平均熒光強度值-對照組平均熒光強度值。

1.2.3統(tǒng)計學(xué)處理實驗結(jié)果取3次實驗的均值,標(biāo)準(zhǔn)差均小于5%,組間顯著性差異用t檢驗。

2結(jié)果

2.1MTT試驗預(yù)試驗以姜黃素最高濃度25μmol·L-1作用兩細(xì)胞株48h,細(xì)胞存活率均在95%以上,排除了對細(xì)胞的毒性作用(見表1)。結(jié)果表明,姜黃素略增加阿霉素對BIU-87的細(xì)胞毒性作用(P>0.05);而對于BIU-87/ADR,姜黃素明顯增加阿霉素細(xì)胞毒性(P<0.05),逆轉(zhuǎn)指數(shù)為4.0。

表1細(xì)胞毒分析IC50(略)

*P>0.05,**P<0.01

2.2細(xì)胞內(nèi)羅丹明濃度圖1為不同時間段細(xì)胞內(nèi)羅丹明濃度的流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果。可以看出,在每一時間點,姜黃素組R-123濃度均顯著高于無姜黃素組。姜黃素明顯抑制了細(xì)胞內(nèi)R-123的外排(P<0.05)。

圖1R-123外排實驗(略)

3討論

盡管生物技術(shù)飛速發(fā)展,傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)在世界的許多地方仍發(fā)揮著極其重要的作用。姜黃素是從姜科姜黃屬植物姜黃根莖中提取的一種酚類色素。姜黃素及其類似物和揮發(fā)油是姜黃主要活性成分,具有抗炎、抗菌、保肝、治療創(chuàng)傷、抗癌、抗病毒等活性。其抗腫瘤作用及機制正受到日益重視。

有文獻(xiàn)表明,姜黃素對人類惡性腫瘤細(xì)胞有誘導(dǎo)分化和增殖抑制作用[3,4],近年研究表明,姜黃素可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[5,6],并且與阿霉素、絲裂霉素具有協(xié)同作用[7~9];有人認(rèn)為其具有化療增敏作用[10]。本實驗結(jié)果顯示,姜黃素可以有效逆轉(zhuǎn)膀胱腫瘤的MDR,姜黃素組BIU-87/ADR對阿霉素的敏感性是無姜黃素組的4倍。P-gp具有ATP依賴的生物膜泵功能,能將胞內(nèi)藥物泵至胞外而產(chǎn)生MDR,R-123外排實驗結(jié)果提示,姜黃素直接抑制P-gp的外泵功能為其機制之一。諸多研究顯示,P-gp既可以單獨介導(dǎo),亦可以參與介導(dǎo)膀胱腫瘤的MDR,是膀胱癌產(chǎn)生MDR的重要機制。由于膀胱癌是人類常見惡性腫瘤之一,具有易復(fù)發(fā)和產(chǎn)生MDR的特性,因此尋找其逆轉(zhuǎn)劑具有重要意義。維拉帕米、環(huán)孢素A等逆轉(zhuǎn)膀胱腫瘤的MDR已有多篇報道[11],但未見關(guān)于植物藥的研究,我們的實驗無疑為逆轉(zhuǎn)膀胱癌MDR提供了一種新的方法。前述研究表明姜黃素發(fā)揮抑瘤效應(yīng)需要較高濃度,系統(tǒng)用藥難以保持持續(xù)高濃度,膀胱癌術(shù)后,膀胱灌注化療是重要的治療手段,由于系局部用藥,因而具有較大的可行性。

主站蜘蛛池模板: 能播放18xxx18女同| 国产99久久亚洲综合精品| sihu永久在线播放地址| 日本三级韩国三级三级a级播放| 天天射天天操天天| 久久在精品线影院精品国产| 欧美孕妇与黑人巨交| 伊人久久久大香线蕉综合直播| 色噜噜一区二区三区| 男人j放进女人p全黄午夜视频| 国产精品免费观看| a级精品国产片在线观看| 成人免费夜片在线观看| 久久天堂夜夜一本婷婷麻豆| 欧美丰满熟妇乱XXXXX网站| 亚洲第一页综合图片自拍| 福利一区二区三区视频在线观看| 国产a三级久久精品| 韩国爱情电影妈妈的朋友 | 精品深夜av无码一区二区| 国产亚洲美女精品久久| 色一情一乱一乱91av| 国产精品视频九九九| 99久久免费国产精精品| 天天综合色天天桴色| 一级毛片在线观看视频| 我的极品岳坶34章| 久久97久久97精品免视看秋霞 | av在线亚洲男人的天堂| 巨胸喷奶水视频www免费视频| 中文字幕热久久久久久久| 日本高清com| 久久精品国产亚洲av电影| 机机对机机120分免费无遮挡| 亚洲国产精品乱码在线观看97| 毛片免费视频播放| 人妻少妇乱子伦精品| 男人天堂伊人网| 免费a级黄色片| 男生女生差差差很痛| 动漫精品一区二区三区3d|