民族民間藥山茶花中咖啡因的含量范文

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《中國民族醫(yī)藥雜志》2015年第一期

1方法與結(jié)果

1．1咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:精密稱取咖啡因?qū)φ掌?．00mg，置于100mL容量瓶，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，得到濃度為50μg•mL－1的咖啡因?qū)φ掌啡芤海瑐溆谩?/p>

1．2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇:將紫外可見分光光度計(jì)的掃描波長(zhǎng)定為200～400nm，取2份蒸餾水樣進(jìn)行基線掃描，待基線平穩(wěn)后，分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液在紫外分光光度計(jì)上于200～400nm波長(zhǎng)處進(jìn)行掃描，結(jié)果對(duì)照品與供試品溶液在273nm處均有最大吸收，故確定273nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1．3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密移取咖啡因?qū)φ掌啡芤?．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL的對(duì)照品溶液至25mL容量瓶中，分別加蒸餾水定容至刻度，得到濃度分別為4．0、8．0、12．0、16．0、20．0μg•mL－1的咖啡因?qū)φ杖芤阂姳?。對(duì)咖啡因的對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)得到咖啡因的濃度－吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=0．0502x－0．0011，r=0．9998，線性范圍為4～20μg•mL－1，結(jié)果見圖3。

1．4供試品提取條件的考察及結(jié)果分析:為了確保提取質(zhì)量，以控制樣品咖啡因的含量為指標(biāo)，選出提取時(shí)間，提取溫度，料液比例3個(gè)提取因素，每個(gè)因素3個(gè)水平(表2)的L9(34)正交設(shè)計(jì)方案，經(jīng)9次試驗(yàn)得出最佳提取條件。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:對(duì)正交試驗(yàn)有關(guān)數(shù)據(jù)作極差分析，結(jié)果見表2、3，影響因素中，提取溫度影響最大、其次是料液比、提取時(shí)間影響最小，提取工藝各因素對(duì)咖啡因提取率影響程度依次為C3＞A3＞B2，因此，料液比為1:150，提取時(shí)間為1．5h，提取溫度為95℃時(shí)為山茶花中咖啡因提取的最優(yōu)條件，為山茶花的供試品溶液制備提供了依據(jù)。正交設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3。

1．5供試品溶液的制備:稱取山茶花粉末約1．0g，精密稱定。加150mL蒸餾水于圓底燒瓶中在95℃水浴鍋中加熱1．5h，立即趁熱抽濾，轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中并加蒸餾水至刻度，從容量瓶中精密吸取12．0mL溶液，加入50mL的容量瓶中，再向其中精密加入0．01molHCl5．0mL及50%的醋酸鉛1．0mL，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，靜置抽濾。在濾液中滴入3滴濃硫酸，再次靜置抽濾。精密吸取濾液25．0mL轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，得供試品溶液。

1．6方法學(xué)考察

1．6．1穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一份供試品溶液，每隔2h測(cè)定其吸光度，觀察吸光度的變化并記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果見表4。測(cè)定結(jié)果其RSD為1．18%，說明該藥品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

1．6．2精密度試驗(yàn):精密吸取供試品溶液5．0mL到10mL的容量瓶中，定容，在最大波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，平行測(cè)定6份，結(jié)果見表5。測(cè)定結(jié)果其RSD為0．58%，說明實(shí)驗(yàn)精密度良好。

1．6．3重現(xiàn)性試驗(yàn):對(duì)同一批樣品分別制備樣品供試液，測(cè)定并計(jì)算咖啡因含量，結(jié)果見表6，RSD為1．67%。表明同批樣品經(jīng)多次測(cè)定，重現(xiàn)性良好。

1．6．4回收率試驗(yàn):精密稱取已知咖啡因含量的山茶花細(xì)粉(同一批次)0．5g，6份，分別加入咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品適量，按“3．5”方法平行制備。測(cè)定結(jié)果見表7。平回收率為100．9%，RSD為1．06%，在有效范圍內(nèi)，說明該實(shí)驗(yàn)回收率較高。

1．7含量測(cè)定:稱取山茶花粉末約1．0g，精密稱定。按“3．5供試品溶液的制備”方法制備溶液，在測(cè)定波長(zhǎng)處進(jìn)行含量測(cè)定，依該法分別對(duì)3批山茶花藥材進(jìn)行含量測(cè)定，得出的數(shù)據(jù)見表8。

2討論

本試驗(yàn)所用山茶花已經(jīng)確定含有咖啡因，對(duì)照品和供試品都在273nm波長(zhǎng)處有最大吸收，與文獻(xiàn)基本一致，所以確定供試品在273nm的吸收峰為咖啡因的吸收峰。咖啡因在溫度大于100℃時(shí)具有升華的性質(zhì)，所以對(duì)于試驗(yàn)溫度應(yīng)控制在100℃以下，所以參考文獻(xiàn)選擇了85℃，90℃，95℃三個(gè)溫度進(jìn)行正交試驗(yàn)，并通過試驗(yàn)確定最優(yōu)溫度為95℃。在對(duì)供試品溶液進(jìn)行光譜掃描所得的曲線峰值均為268～274nm，說明干擾雜質(zhì)已基本除去，不影響峰形，保證了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)對(duì)山茶花中咖啡因的提取方法進(jìn)行了研究，通過正交試驗(yàn)確定其最佳的提取條件，用此最優(yōu)條件提取山茶花種的咖啡因進(jìn)行含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)，確定山茶花中咖啡因的含量。同時(shí)進(jìn)行一系列的檢測(cè)性試驗(yàn)，如精密度試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)及加樣回收率實(shí)驗(yàn)，以確定此次試驗(yàn)的精確度及準(zhǔn)確度。

山茶花作為民族民間藥材可用于燙傷、止血與涼血作用。而適量的咖啡因具有興奮利尿作用，臨床上用作利尿劑、強(qiáng)心劑和復(fù)醒劑，同時(shí)也是配制復(fù)方乙酰水楊酸和氨非咖片等的主要原料。本次試驗(yàn)對(duì)山茶花提取方法及咖啡因含量進(jìn)行了測(cè)定，為深度開發(fā)山茶花藥材資源提供依據(jù)。

作者：孫超屈愛桃李洋劉翔宇牧丹于西單位：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)