小鼠免疫調節的實驗研究范文

本站小編為你精心準備了小鼠免疫調節的實驗研究參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《臨床醫學工程雜志》2014年第八期

1方法

1．1動物分組、造模方法及給藥方法取4批NIH雄性小鼠，每批按體重隨機分為6組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、匹多莫德分散片組（0．267g•kg－1）、參芍葡萄籽提取物方劑高（1g藥材＋80mgGSE•kg－1）、中（0．5g藥材40mgGSE•kg－1）、低（0．25g藥材＋20mgGSE•kg－1）劑量組。正常對照組腹腔注射10mL•kg－1生理鹽水，除正常對照組外，其余免疫抑制小鼠腹腔注射環磷酰胺100mg•kg－1，每周1次，連續4周。各給藥組按劑量灌胃給予相應藥物20mL•kg－1，每天1次，連續30天。

1．2對免疫抑制小鼠免疫器官重量的影響末次給藥后1h脫頸椎處死小鼠，取胸腺、脾臟稱重，計算胸腺指數、脾臟指數［1］。

1．3對2,4－二硝基氯苯誘導免疫抑制小鼠遲發型超敏反應的影響給藥第3周，各組小鼠均背部脫毛，7％DNCB丙酮溶液50μL于脫毛處均勻涂抹致敏。末次給藥后1h，用1％DNCB丙酮溶液20μL涂抹于小鼠右耳兩面進行攻擊，24h后脫頸椎處死小鼠，用8mm金屬打孔器打下小鼠左、右耳片，稱重，以右耳減去左耳重量差值作為遲發型超敏反應值［2］。

1．4對免疫抑制小鼠半數溶血值HC50的影響具體如下［3］：給藥第24天，除正常對照組外每只小鼠腹腔注射0．2mL2％（v／v）SRBC進行免疫。6天后，摘除眼球取血，2000rpm離心10min，取血清用SA緩沖液稀釋（500倍），取稀釋后的血清1mL置試管內，對照管取1mLSA緩沖液，依次加入10％（v／v）SRBC0．5mL，1∶8SA稀釋的豚鼠血清1mL。置37℃水浴中孵育20min后，冰浴終止反應。2000rpm離心10min。取上清液1mL，加都氏試劑3mL，同時取10％（v／v）SRBC0．25mL加都氏試劑至4mL于另一支試管內，充分混勻，放置10min后，于540nm波長測定各管吸光度值。

1．5對免疫抑制小鼠碳粒廓清能力的影響具體如下［1］：末次給藥后1h，小鼠尾靜脈注射墨汁10mL•kg-1（墨汁∶生理鹽水為1∶4）。注入墨汁后2min、15min，小鼠眼眶后靜脈叢取血20μL，加到2mL0．1％Na2CO3溶液中。675nm波長處測吸光度值，以Na2CO3溶液作空白對照。同時將小鼠處死取脾臟和肝臟，按下式計算吞噬指數K和吞噬系數α。

1．6統計方法結果以均值±標準差表示，采用單因素方差分析，組間均數兩兩比較用S－N－K法，由SPSS15．0完成。

2實驗結果

2．1對免疫抑制小鼠免疫器官重量的影響表1表明，與正常對照組比較，模型對照組小鼠胸腺指數、脾臟指數均顯著降低（P＜0．01）。與模型對照組相比，參芍葡萄籽提取物方劑高、中、低劑量組小鼠胸腺指數、脾臟指數均明顯增大（P＜0．01）。

2．2對2,4－二硝基氯苯誘導免疫抑制小鼠遲發型超敏反應的影響表1表明，與正常對照組比較，模型對照組小鼠遲發型超敏反應值顯著減小（P＜0．01）。與模型對照組相比，參芍葡萄籽提取物方劑高、中、低劑量組小鼠遲發型超敏反應值明顯增大（P＜0．01）。

2．3對免疫抑制小鼠半數溶血值HC50的影響表2表明，與正常對照組比較，模型對照組小鼠半數溶血值HC50顯著減小（P＜0．01）；與模型對照組相比，參芍葡萄籽提取物方劑高、中、低劑量組小鼠半數溶血值HC50明顯增大（P＜0．01）。

2．4對免疫抑制小鼠碳粒廓清能力的影響表2表明，與正常對照組比較，模型對照組小鼠K值、α值均顯著減?。≒＜0．01）；與模型對照組相比，參芍葡萄籽提取物方劑高、中、低劑量組小鼠K值、α值均明顯增大（P＜0．01）。

3討論

免疫系統是機體必需的防御系統，脾臟和胸腺是主要的免疫臟器，是淋巴細胞分化、居留、增殖和產生免疫應答的場所。脾臟指數和胸腺指數在一定程度上可反映機體非特異性免疫功能。環磷酰胺作為一種免疫抑制劑，能抑制動物的體液和細胞免疫應答，造成免疫抑制。本試驗腹腔注射CTX4次后，模型對照組小鼠的胸腺指數和脾臟指數顯著低于正常對照組，說明免疫抑制小鼠模型復制成功。實驗結果顯示，各劑量組的參芍葡萄籽提取物方劑均可增加免疫抑制小鼠的胸腺指數和脾臟指數，具有免疫增強活性，且呈一定的劑量相關性。遲發型變態反應是細胞免疫反應，當致敏T淋巴細胞再次接觸相同的抗原時，能引起遲發型變態反應，T淋巴細胞釋放出多種細胞因子，產生以單核細胞浸潤為主的炎癥，表現為皮膚紅腫、硬結等。參芍葡萄籽提取物方劑各劑量組能使小鼠耳腫脹反應值水平較模型對照組顯著升高，表明參芍葡萄籽提取物方劑可增強小鼠細胞免疫功能。血清溶血素水平可反映體液抗體形成水平［5］，反映機體的體液免疫作用的狀態。用SRBC免疫小鼠后，產生抗SRBC抗體（溶血素IgM），在補體參與下導致紅細胞溶解，釋放出血紅蛋白使溶液顏色產生變化，反映紅細胞的溶血量。紅細胞溶血與免疫后血清中產生的抗體含量有關，測定HC50可評價血清中抗體數量，進而反映小鼠體液免疫功能。吞噬細胞的吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的指標之一，非特異性免疫是機體免疫系統的重要組成部分，當細菌、異物等抗原性物質進入機體后，可迅速被單核巨噬系統吞噬和清除，碳粒廓清法測定單核巨噬細胞功能是經典的觀察單核巨噬細胞吞噬能力的方法［8-9］，可反映小鼠非特異性免疫的狀態。

在本實驗中，參芍葡萄籽提取物方劑能通過非特異性免疫調節作用，明顯增加免疫抑制小鼠胸腺指數和脾臟指數；提高免疫抑制小鼠遲發型超敏反應值和HC50值，具有提高細胞免疫及體液免疫的作用；提高吞噬細胞的吞噬能力，具有增強機體非特異性免疫的功能；提示參芍葡萄籽提取物方劑對CTX所致免疫抑制小鼠具有增強免疫功能的作用［10］。以釀酒過程中產生的葡萄籽為原料，提取富含多酚類物質的葡萄籽提取物，不僅能為葡萄的綜合利用開辟新途徑，而且還可帶來巨大的經濟效益和社會效益。歷經幾十年的研究與開發，葡萄籽提取物（GSE）優越的抗氧化活性已為人們認可，并在食品、藥品及化妝品等領域得到了廣泛應用?；趪鴥韧庋芯炕A，結合使用中藥及GSE，有望開發成為具增強免疫功能的保健品。

作者：梁政嬈梁菊單位：廣東省肇慶市中醫院