醋酸棉酚對小鼠生育能力實驗范文

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【摘要】目的探索醋酸棉酚對雄鼠生殖系統的影響，為生態滅鼠藥的研制提供實驗依據。方法將雄性小鼠隨機分成對照組和實驗組，每組10只，通過灌胃的方法，對照組灌生理鹽水，實驗組按50、120、200mg/kg體質量濃度灌胃，分別于灌胃10d、20d后解剖，取睪丸、附睪，進行精子細胞觀察、精子計數、精子活率和精子形態觀察，如指標有變化，進行交配試驗檢測醋酸棉酚對小鼠生育能力的影響。結果灌胃10d各指標組間差異均無顯著性；20d后，200mg/kg組與對照組精子數目和睪丸系數變化差異有顯著性（P<0.05），睪丸切片可見120mg/kg和200mg/kg組生精小管的初級精母細胞與精原細胞或基膜之間有較大的空隙，部分生精小管腔內的精子尾部減少。合籠后產子數量和懷孕率對照組與120mg/kg組和200mg/kg組差異有顯著性（P<0.05），120mg/kg組和200mg/kg組間差異無顯著性（P>0.05）。結論醋酸棉酚對雄鼠生殖系統的影響可能與其濃度和藥物作用的時間有關。50mg/kg組在20d內對小白鼠生育能力沒有影響，120mg/kg和200mg/kg組在20d內對小白鼠生育能力有影響。

【關鍵詞】醋酸棉酚；避孕藥；生殖系統

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofgossypolacetateonreproductivesystemsofmalemice,providingusefuldatafordevelopmentofenvironmentfriendlyratpoison.MethodsMalemicewererandomlyassignedintotwogroups,with10miceineachgroup.Miceincontrolgroupwereadministeredintragastricallywiththephysiologicalsaline,andmiceintheexperimentalgroupswereadministeredintragastricallywithgossypolacetateatthedoseof50,120,200mg/kg.Epididymisweretakentoobservethespermcounts,motilityrateandthespermshapeafter10daysand20daysrespectively.Inthecasethatdiversifiedparameterswereobserved,matingtestwasconductedtodetecttheeffectsofgossypolacetateonfertilityofmalemice.ResultsTherewerenostatisticssignificancebetweentheexperimentalgroupandcontrolgroupafter10days,however,spermcountsandtesticle/bodyweightindiceshadstatisticssignificance(P<0.05)after20days.Thurdermore,therewerevisibledifferencebetweenthegroupsadministeredwithgossypolacetateatthedosesof120,200mg/kgandthecontrolgroupintesticlesectionobservationwithmicroscopy.Afterhavingthebirthabilitytest,numberofbabymouseandpregnancyrateshavestatisticsignificanceinthegroupsadministeredwithgossypolacetateatthedosesof120and200mg/kggroups.ConclusionsTheeffectofgossypolacetatewaspossiblyconcernedwithitsconcentrationandtheadministrationtime.Therewasnoeffectinthegroupadministeredwithgossypolacetateatthedoseof50mg/kgin20days,butnotinthegroupadministeredwithgossypolacetateatthedosesof120mg/kgand200mg/kg.

Keywords:gossypolacetate;contraceptive;reproductivesystem

隨著全球對環保的日益關注，人們在滅鼠理念上開始發生明顯的轉變，從殺死個體向控制種群和降低種群數量的角度轉變，積極尋找、開發用于鼠類防治的抗生育劑是目前研究的新方向。醋酸棉酚是人類曾經廣泛應用的男性避孕藥。動物實驗表明,棉酚藥理作用機制是通過破壞雄性睪丸細精管的生精上皮細胞,從而導致精子數量的減少,直至無精子產生,停藥后可恢復［1］。本研究利用醋酸棉酚的抗生育作用進行生態滅鼠藥的研制。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物5周齡昆明小鼠，普通級，合格證號:SCXK(粵)20030002，粵監證字2006A017，28～30g，雄性40只，雌性80只，購于廣東省實驗動物中心。

1.1.2藥品復方醋酸棉酚片，每片含醋酸棉酚20mg，國藥準字H61022557，20mg×3片×150盒。

1.1.3其他實驗用品經高壓滅菌的生理鹽水，95％乙醇，10％甲醛，0.5％伊紅染液，血細胞計數板，細胞計數器，電子天平，解剖工具及灌胃工具等。

1.2方法

1.2.1分組購回的小鼠正常飼養1周以適應實驗的環境。1周后，實驗小鼠隨機分到實驗組和對照組，其中實驗組分為3個體質量濃度分別為200mg/kg，120mg/kg，50mg/kg，每組10只。

1.2.2灌胃實驗灌胃前稱出平均體質量，對照組灌生理鹽水，實驗組灌50mg/kg,120mg/kg，200mg/kg體質量濃度的醋酸棉酚混懸液，1周平均灌4次，每次0.3mL，灌胃期間喂給正常飼料和水。分別于灌胃10d、20d后，從每組隨機抽出4只小鼠脫臼處死，取睪丸和附睪，進行觀察。

1.2.3附睪標本的制備頸椎脫臼法處死小鼠，取出兩側附睪，放入盛有1mL生理鹽水的小燒杯中，用眼科剪將附睪縱向剪1～2刀，靜止3～5min，輕輕搖動，用四層擦鏡紙過濾。觀察精子活率［2］、精子計數（1000/精子計數）［2］、精子形態、精子細胞［3］等指標。

1.2.4睪丸切片的制備稱出睪丸質量，將新鮮的睪丸標本放在φ=10％的甲醛中保存。制作切片時，先將標本于自來水沖洗30min以上，再進行脫水、包埋、固定、切片、脫蠟、最后用HE染色。觀察睪丸系數（睪丸質量/體質量）［4］和病理組織學變化。

1.2.5交配試驗在灌胃20d后，每組隨機抽出4只雄鼠，進行合籠交配，期間喂給正常飼料和水。在合籠20d后處死雌鼠，記錄懷孕鼠數及孕鼠平均胎數。

1.3統計學方法用SPSS10.0統計軟件進行統計分析,采用方差分析,以P<0.05為差異有顯著性。

2結果

2.1觀察指標單因素方差分析灌胃20d后，對照組與實驗組精子數目、睪丸系數變化差異有顯著性。為了進一步了解方差分析差異的來源，兩兩比較結果顯示精子數目、睪丸系數經過方差齊性檢驗，方差齊性（P=0.214；P=0.680）。選用TukeyHSD得200mg/kg組精子數目和睪丸系數與對照組比較差異有顯著性（P<0.05），見表1。

2.2交配試驗

經非參數檢驗，對照組與實驗組產子數量和懷孕率的差異有顯著性。經兩兩比較，懷孕率對照組與120、200mg/kg組差異均有顯著性（P=0.015和0.017），對照組與50mg/kg差異無顯著性（P=0.148），120mg/kg組和200mg/kg組差異無無顯著性（P>0.05）；產子數量對照組與120mg/kg、200mg/kg組差異有顯著性（P=0.026,0.076）；50mg/kg差異無顯著性（P=1.000），120mg/kg組和200mg/kg組差異無顯著性（P>0.05）,見表2，3。

表1灌胃20d后單因素方差分析表略

表2對照組與實驗組孕鼠的產子數量比較略

表3對照組與實驗組懷孕率比較略

2.3睪丸切片觀察

高倍鏡下觀察，NS組可見許多生精小管整齊的排列，各期精子細胞層次分明。間質細胞清晰可見，許多精原細胞緊貼于基膜上，可見許多染成粉紅色的精子尾部游離于腔內。

120mg/kg和200mg/kg灌胃組灌胃20d后，睪丸切片可見：部分生精小管排列較疏松，有些間質細胞消失，部分生精小管內基膜上的精原細胞較少，可見一些生精小管的初級精母細胞與精原細胞或基膜之間有較大的空隙，亦有部分生精小管腔內的精子尾部減少。50mg/kg組未見異常，見圖1。

圖1小鼠睪丸切片(略)

3討論

3.1醋酸棉酚可致小鼠精子數目下降

棉酚的避孕原理是鼠類取食后，抑精作用通過對各級生殖細胞續貫作用的結果，使鼠類不能生成成熟的精子而不育，達到降低鼠類種群數量、減少鼠害的目的。大量研究證明，棉酚可抑制大鼠和人精子的數目、活率和活力［5］。本實驗結果顯示醋酸棉酚對雄性小鼠精子數目和睪丸系數組間差異有顯著性，提示灌200mg/kg體質量濃度的醋酸棉酚后，20d小鼠的精子數目減少，初步顯示了棉酚的抗生育作用。

3.2醋酸棉酚可致小鼠睪丸發生病理改變

本次睪丸切片可以看出，與生理鹽水組比較，120mg/kg體質量濃度已經發生生精小管內的精子細胞排列較疏松，少數腔內精子尾部減少，且精原細胞與初級精母細胞間有斷層（出現較大空隙）。與孔佑華等［6］的研究結果一致。

3.3醋酸棉酚可致小鼠生育能力下降

在精子數目和睪丸系數發生變化的基礎上，進行交配試驗結果提示，醋酸棉酚可影響雌鼠懷孕率，降低雌鼠懷孕的幾率，且影響懷孕鼠的胎數。本研究顯示雄性小鼠用120mg/kg醋酸棉酚灌胃20d后，生育能力降低。

綜上所述，醋酸棉酚可影響雄鼠的精子數目前使睪丸發生一定程度的病理改變，其作用的程度可能與藥物的濃度及藥物作用持續時間有關，120mg/kg組20d可影響小鼠生育能力。要達到滅鼠效果，還需要進一步進行更接近鼠類生活習慣的喂食對生育能力影響的研究。

致謝:本次實驗得到李宇聰、張麗銀、鄧家艷、周文、汪潔、李宇政、廖少平、鐘偉苑、曾雪紅等同學的幫助，特此致謝。

【參考文獻】

［1］曹堅,費仁仁,趙躍華,等.服用低劑量醋酸棉酚對正常男性精子堿性核蛋白的影響［J］.中國醫學科學院學報,2000,22(3):220-222.

［2］熊立凡.臨床檢驗基礎［M］.3版.北京：人民衛生出版社,2003:257-259.

［3］組織與胚胎學實驗指導［M］.北京：科學技術文獻出版社，2000，64.

［4］王心如.毒理學基礎［M］.4版.人民衛生出版社，2003:119.

［5］全國男性節育藥協作組.棉酚——一種新的男性抗生育制劑［J］.中華醫學雜志，1978,4:417.

［6］孔佑華,王鳳琴,張金萍,等.棉酚對小鼠睪丸生精細胞凋亡影響的實驗研究［J］.濟寧醫學院學報,2003,3:42.