人參多糖對鼻咽癌細(xì)胞耐藥作用分析范文

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摘要：目的研究人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細(xì)胞耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及機制。方法本研究所選取的親本細(xì)胞為鼻咽癌細(xì)胞CNE-2，同時建立耐順鉑人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株系CNE-2；采用ATT檢測法對親本細(xì)胞和耐藥CNE-2在經(jīng)過人參多糖作用前后順鉑的抑制濃度，同時計算出耐藥指數(shù)；利用流式細(xì)胞儀對人參多糖對耐藥CNE-2的增殖抑制率進行檢測；使用RT-PCR法對經(jīng)過人參多糖作用前后CNE-3中的β-cateninmRNA表達進行檢測；使用顯微鏡對經(jīng)過人參多糖作用前后的β-catenin蛋白表達進行觀察。結(jié)果經(jīng)人參多糖作用后的耐藥CNE-2對順鉑的抑制濃度與耐藥指數(shù)降低更為顯著（P<0.05）；人參多糖對耐藥CNE-2具有明顯的增殖抑制作用；經(jīng)人參多糖作用后的β-cateninmRNA表達量得到明顯降低（P<0.05）；經(jīng)人參多糖處理后，蛋白表達區(qū)逐漸轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜。結(jié)論人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細(xì)胞耐藥有著顯著逆轉(zhuǎn)作用，而因β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)CNE-2凋亡是該藥物的主要機制。

關(guān)鍵詞：人參多糖；耐順鉑；鼻咽癌；細(xì)胞耐藥；逆轉(zhuǎn)作用

引言

鼻咽癌具有較高的致死率與發(fā)病率，該疾病對化學(xué)治療手段與放射治療手段較為敏感，在近年來，隨著耐藥細(xì)胞株的出現(xiàn)，使鼻咽癌患者在患病后5年內(nèi)的存活率僅達到60%左右。根據(jù)相關(guān)調(diào)查資料顯示[1]，人參中所包含的人參多糖成分在進入人體后，能夠起到明顯的逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥以及抗腫瘤的效果，但其中的機制尚不明確。由此，為了進一步觀察人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細(xì)胞耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及機制，本研究將鼻咽癌細(xì)胞CNE-2作為親本細(xì)胞展開研究分析，并將詳細(xì)結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1使用材料。人參多糖注射液（產(chǎn)自山西普德藥業(yè)公司，規(guī)格為3g/L）、順鉑（產(chǎn)自上海源葉生物）、人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株系CNE-2（由天津市腫瘤系研究所提供）、二甲基亞砜、二甲基四氮唑藍、CCK8試劑（來源于國內(nèi)卡邁舒生物科技）。

1.2實驗方法1.2.1將培養(yǎng)箱內(nèi)溫度調(diào)整為37℃，且濕度適宜，將耐藥細(xì)胞株誘放置其中培養(yǎng)。使用順鉑含量為3.3μmol/L的培養(yǎng)基對培養(yǎng)細(xì)胞進行1d的培養(yǎng)，并測定培養(yǎng)過程中的IC50。使用順鉑含量為3.3μmol/L的培養(yǎng)基對培養(yǎng)細(xì)胞進行沖擊培養(yǎng)，時長1d。后更換為順鉑IC50逐漸提高的培養(yǎng)基，直至培養(yǎng)細(xì)胞能在順鉑含量為3.3μmol/L的環(huán)境中穩(wěn)定成長，且能夠?qū)崿F(xiàn)長達3次或3次以上的連續(xù)傳代，經(jīng)最后測定順鉑IC50為7.5μmol/L，并將其命名為耐藥CNE-2。1.2.2使用MTT法測定藥物敏感型和人參多糖干預(yù)。取對應(yīng)的耐藥CNE-2以及親本細(xì)胞，將細(xì)胞密度調(diào)整為1×105個/mL，并在其中加入孔板96個，設(shè)置處理孔進行細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)時長為48h，在每隔處理孔中加入10mg/ml的15μLMTT，持續(xù)培養(yǎng)4h后將培養(yǎng)基吸出，并在每個孔中加入200μLDMSO，輕微震蕩使結(jié)晶溶解。在酶標(biāo)儀上對各個孔的吸光度數(shù)值進行檢測，后使用MTT分析法展開數(shù)據(jù)分析，同時計算出耐藥指數(shù)與IC50，以此得出最終的藥物敏感性。耐藥指數(shù)=/耐藥細(xì)胞IC50/親本細(xì)胞IC50。1.2.3使用CCK8法觀察人參多糖對耐藥CNE-2的增值影響。使用對應(yīng)的耐藥CNE-2制作密度為5×104個/L細(xì)胞血液，并把細(xì)胞懸液接種在孔板上，于1d之后，在孔板上加入不同濃度的人參多糖培養(yǎng)液，在設(shè)置空白對照的同時，進行比色試驗。細(xì)胞增殖抑制率=（1-AGPS/A空白對照）×100%。1.2.4觀察人參多糖對耐藥CNE-2中β-cateninmRNA的表達影響。使用RT-PCR法，并取對數(shù)長生期，選擇經(jīng)人參多糖培養(yǎng)液處理48h后的耐藥CNE-2，提取其中的RNA，對β-cateninmRNA的表達進行檢測觀察。1.2.5觀察人參多糖對耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區(qū)域的影響。將耐藥CNE-2接種與6個孔板之中，并放置在溫度為37℃的CO2培養(yǎng)箱中過夜，當(dāng)細(xì)胞株鐵壁后，將0.4g/L的人參多糖培養(yǎng)液加入其中，處理時長為48h。使用顯微鏡對檢測結(jié)果進行觀察[2]。

1.3統(tǒng)計法分析。本研究所獲的所有數(shù)據(jù)均通過統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS20.0統(tǒng)計處理，計數(shù)資料用“[n（%）]”表示，用“χ2”檢驗；計量資料用“（±s）”表示，用“t”檢驗，若P<0.05，提示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1觀察在經(jīng)過人參多糖作用前后耐藥CNE-2的耐藥指數(shù)與對順鉑的IC50。在經(jīng)過人參多糖作用前的耐藥CNE-2與親本細(xì)胞對順鉑的IC50為（0.16±0.12）μmol/L、（7.51±2.82）μmol/L，耐藥CNE-2對順鉑的耐藥指數(shù)為26.7；在經(jīng)過濃度分別為0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L的人參多糖作用48h后，耐藥CNE-2與親本細(xì)胞對順鉑的IC50為（3.22±1.13）μmol/L、（1.15±0.52）μmol/L、（0.65±0.39）μmol/L，耐藥指數(shù)為9.6、6.4、3.3。由此可見，相較于作用前，經(jīng)人參多糖作用后的耐藥CNE-2的耐藥指數(shù)與對順鉑的IC50明顯降低（P<0.05）。

2.2觀察人參多糖對耐藥CNE-2增殖產(chǎn)生的影響。人參多糖對耐藥CNE-2增殖有著明顯的抑制效果（P<0.05），見表1。

2.3觀察在經(jīng)過人參多糖作用后耐藥CNE-2中β-cateninmRNA的表達。在經(jīng)過不同濃度的人參多糖作用48h之后，耐藥CNE-2中的β-cateninmRNA的表達量為2.4觀察經(jīng)人參多糖作用后耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區(qū)域變化。經(jīng)人參多糖作用前，耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區(qū)域主要在細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核；經(jīng)人參多糖作用后，耐藥CNE-2中β-catenin蛋白表達區(qū)域逐漸轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜。

3討論

根據(jù)相關(guān)研究資料顯示[3]，人參多糖能夠有效提高人體免疫力，同時還具有良好的抗腫瘤與治療腫瘤疾病的效果，且能減少一定的不良反應(yīng)，具有較高的使用價值。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)人參多糖作用后的耐藥CNE-2對順鉑的抑制濃度與耐藥指數(shù)降低更為顯著（P<0.05）；人參多糖對耐藥CNE-2具有明顯的增殖抑制作用；經(jīng)人參多糖作用后的β-cateninmRNA表達量得到明顯降低（P<0.05）；經(jīng)人參多糖處理后，蛋白表達區(qū)逐漸轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜。證實了使用人參多糖治療鼻咽癌，對該疾病患者來說具有重大的現(xiàn)實意義。綜上所述，人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細(xì)胞耐藥有著顯著逆轉(zhuǎn)作用，而因β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)CNE-2凋亡是該藥物的主要機制。

參考文獻

[1]孫冰潔.人參多糖對耐順鉑人鼻咽癌細(xì)胞耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及其機制[J].山東醫(yī)藥,2017,57(20):31-33.

[2]吳曉民,趙丹,朱艷萍,等.人參多糖的藥理作用與臨床研究進展[J].人參研究,2016,28(05):40-46.

[3]趙燕.人參皂苷Rg3對鼻咽癌Th1/Th2細(xì)胞因子表達情況及臨床治療效果分析[J].陜西中醫(yī),2018,39(01):101-103.

作者：徐林娣 單位：江陰市中醫(yī)院