抗生素對食用菌種組織分離的影響范文

本站小編為你精心準(zhǔn)備了抗生素對食用菌種組織分離的影響參考范文，愿這些范文能點(diǎn)燃您思維的火花，激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《四川農(nóng)業(yè)科技雜志》2014年第九期

一、培養(yǎng)基配制

1.培養(yǎng)基配方一般食用菌組織分離使用馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA），馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂20g、水1000mL。2.培養(yǎng)基制作以1000mL培養(yǎng)基計(jì)算，先將馬鈴薯洗凈去皮（挖去芽眼）切成小粒，稱取200g，加水1000mL，煮沸15～20分鐘，用4層紗布過濾，取其濾液并補(bǔ)足水至1000mL，加入瓊脂20g，再加熱，瓊脂溶化后，再加入其它藥品。培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)在培養(yǎng)基凝固前進(jìn)行（瓊脂培養(yǎng)基40℃凝固）用大號注射器分裝，裝入量為試管長度1/4，裝好后塞上棉塞，用線繩捆扎起來，棉塞部分用報(bào)紙包扎。3.培養(yǎng)基滅菌將試管直立放入高壓蒸氣滅菌鍋，在0.11MPa/cm2壓力下（鍋入溫度達(dá)121℃），生活壓力鍋開始放氣計(jì)時(shí)，滅菌30～35分鐘，待壓力降到0時(shí)，慢慢放出鍋內(nèi)氣體，趁培養(yǎng)基沒有凝固時(shí)，將試管擺成斜面。

二、菇體選擇

根據(jù)生產(chǎn)菌種的需要，選擇符合要求的菇體。制作生產(chǎn)用菌種則選擇符合品種特性，生長健壯，無病無蟲，6～8成熟的的菇體作為分離材料；優(yōu)良變異單株選擇，則選擇符合栽培目的，有明顯優(yōu)勢的變異單株菇體作為分離材料。

三、組織分離培養(yǎng)

1.接種環(huán)境消毒不論用接種箱或超凈工作臺(tái)接種，在接種前，需對接種箱或接種室用0.2%的來蘇水或漂白粉進(jìn)行消毒處理，然后將滅菌過的組織分離材料放在箱內(nèi)，福爾馬林對接種箱消毒，用20mL福爾馬林加入10g高錳酸鉀加入罐頭瓶密閉薰蒸消毒；煙霧劑接種室消毒，一間房需點(diǎn)燃3盒50g規(guī)格煙霧劑；接種箱消毒每次用4g。熏蒸時(shí)間30分鐘。2.組織分離培養(yǎng)熏蒸結(jié)束，在接種箱內(nèi)，用75%酒精對雙手、小刀、菇體、青霉素、鏈霉素、小刀、鑷子、接種針、打火機(jī)、罐頭瓶、一次性注射器（10mL帶針）進(jìn)行表面消毒；用一次性注射器抽取鏈霉素溶液注入青霉素瓶搖勻，去掉瓶蓋待用（無需考慮抗生素的劑量）。點(diǎn)燃酒精燈，全部在酒精燈火焰上方操作，小刀、接種針在火焰上燒一下使用。然后用小刀去掉菇蓋和菇體表面組織，取菌柄和菌蓋交界綠豆大小的內(nèi)部菇體組織，用鉤狀接種針勾住迅速放入青鏈霉素溶液并立即取出，輕抖掉多余藥液，接入培養(yǎng)基中間部位，輕壓使其接觸培養(yǎng)基，塞好棉塞，試管傾斜成30℃左右放置，讓多余藥液自然流出，防止出現(xiàn)水漬現(xiàn)象，在25℃下培養(yǎng)。菌種培養(yǎng)按品種要求進(jìn)行，培養(yǎng)過程中勤檢查，發(fā)現(xiàn)感染立即剔除。

四、轉(zhuǎn)管培養(yǎng)

培養(yǎng)基制作、接種環(huán)境和器材消毒同上，當(dāng)菌絲長到5cm時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)管培養(yǎng)，選擇菌絲生長健壯，無雜菌感染的母種進(jìn)行轉(zhuǎn)管培養(yǎng)。轉(zhuǎn)管時(shí)，首先去除前端菌絲生長較稀弱和沒有菌絲培養(yǎng)基，勾取菌絲較濃密的黃豆大小菌種塊轉(zhuǎn)接到新的試管培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，分離組織前后各1cm的菌種去掉不用，防止組織塊中有被抗生素抑制的細(xì)菌復(fù)活感染菌種，尾端菌種同前端一樣處理，去除菌絲生長較稀弱和沒有菌絲培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)管培養(yǎng)不需考慮擴(kuò)繁數(shù)量，只保證菌種質(zhì)量。組織分離獲得的菌種經(jīng)出菇試驗(yàn)合格后用于生產(chǎn)。

五、母種保存

轉(zhuǎn)管培養(yǎng)的菌種在基本長滿試管斜面時(shí)停止培養(yǎng)，放置于0℃以上低溫進(jìn)行母種保存，一般2～3個(gè)月左右視進(jìn)行一次轉(zhuǎn)管。以上技術(shù)措施的關(guān)鍵：母種培養(yǎng)基滅菌要徹底；分離組織蘸取青鏈霉素合劑抑制細(xì)菌；分離組織蘸取藥液動(dòng)作要快，不能水漬；分離組織周圍的菌種不能使用，防止被抑制的雜菌復(fù)活感染菌種。

作者：袁華軍單位：四川省雙流縣彭鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)站