白車軸草夏枯病菌探討范文

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《吉林農業大學學報》2016年第3期

摘要:

對白車軸草夏枯病菌的生物學特性及藥劑敏感性進行了研究。結果表明:病菌菌絲生長適宜溫度為25～30℃，最適溫度28℃，菌核形成適宜溫度為15～30℃，最適溫度28℃;最適菌絲生長的培養基為PSA，最適菌核形成的培養基為PDA;最適菌絲生長的碳源為Richard培養基，最適菌核生長的碳源為可溶性淀粉;以L-精氨酸為氮源的培養基最適菌絲生長，L-α-丙氨酸為菌核形成最佳氮源;pH5.0～10.0適宜菌絲生長，pH6.0菌核產量最高;半光照利于菌絲生長，全光照利于菌核形成。藥劑敏感性研究表明，病菌對吡唑醚菌酯、肟菌•戊唑醇、咯菌腈、多粘類芽孢桿菌、唑醚•代森聯、異菌脲和多菌靈的敏感性較高，EC50＜1.0mg/L，EC90＜5.0mg/L，可進一步用于田間試驗。

關鍵詞:

白車軸草;夏枯病;立枯絲核菌AG1-IB;生物學特性;藥劑敏感性

白車軸草，又名白三葉草，為豆科車軸草屬多年生草本植物。白車軸草全草皆可入藥，具有祛痰止咳、鎮痙止痛等功效［1］。因其具有營養價值高、生長速度快、可多次刈割等優點，是畜牧業的優質飼料［2］。又因其具有耐踐踏、耐貧瘠、葉花優等優點，一直是城市草坪綠化的首選植物。吉林省白山市已將該草作為市草，大面積鋪植于城市，成為該市草坪的主體草種［3］。筆者于2012—2014年，先后在吉林省通化市和吉林農業大學校園綠化帶、動物科學技術學院牧草種質資源圃及長春市居民區綠地的白車軸草上發現一種病害，該病害主要危害白車軸草的葉片和葉柄，初期為水漬狀小斑，濕度大時，病斑擴展非常迅速，可致整個葉片和葉柄發生水爛，莖葉坍塌，產生大量蛛絲樣菌絲，并形成白色絮狀物，進而形成灰褐色菌核，嚴重時導致車軸草大面積死亡，對車軸草的生產及觀賞價值均造成嚴重影響。經研究確定該病害由夏枯病菌引起［4］。本試驗著重就白車軸草夏枯病菌的生物學特性及其對殺菌劑敏感性進行研究，以期為該病害的發生規律及防治過程中藥劑的選擇提供理論依據。

1材料與方法

1.1供試病原菌供試白車軸草夏枯病菌BSYJ11，由吉林農業大學植物病理教研室分離鑒定并保存。

1.2病菌生物學特性研究

1.2.1培養基對病菌菌絲生長和菌核產量的影響在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)、馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基(PSA)、黃瓜煎汁、蘋果煎汁、番茄煎汁、梨煎汁、燕麥片(OA)、玉米粉、胡蘿卜煎汁、水瓊脂平板培養基上分別放置直徑為8mm的病原菌菌餅，4次重復，25℃恒溫培養，2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5］。菌核產量測定:病菌培養7d后，將菌核取出置電熱恒溫鼓風干燥箱40℃烘干至恒重，稱量。

1.2.2溫度對菌絲生長和菌核產量的影響將直徑為8mm的菌餅放置于PDA培養基平板中(15mL/皿)，分別置于4，10，15，20，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，40℃下培養，4次重復。培養2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5］，7d后測定菌核產量。

1.2.3pH對菌絲生長和菌核產量的影響用HCl(1mol/L)和NaOH(1mol/L)將PDA培養基的pH分別調節為4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，向上述不同pH平板(15mL/皿)中移入菌餅(直徑8mm)，25℃恒溫培養，4次重復，2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產量。

1.2.4碳源和氮源對菌絲生長和菌核產量的影響(1)碳源:分別稱取等質量碳素的二水合檸檬酸三鈉、α-乳糖、D-山梨醇、D-甘露醇、D(+)-麥芽糖等碳源替代查氏培養基［6］中的蔗糖，配置成培養基。移植菌餅(直徑8mm)到上述平板培養基中(15mL/皿)，25℃恒溫培養，4次重復。2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產量。(2)氮源:分別稱取等質量氮素的L-α-丙氨酸、L-精氨酸、L-苯丙氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酰胺等氮源代替查氏培養基中的硝酸鈉，配置成培養基。移植菌餅(直徑8mm)到上述平板培養基中(15mL/皿)，25℃恒溫培養，4次重復。2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產量。

1.2.5光照對菌絲生長和菌核產量的影響將直徑為8mm的菌餅放置于PDA培養基平板(15mL/皿)中，分別在連續光照、12h光暗交替和完全黑暗條件下25℃恒溫培養，每個處理4次重復。2d后，用十字交叉法測量菌落直徑［5-9］，7d后測定菌核產量。上述試驗數據采用DPS軟件鄧肯氏新復極差法(DMRT)進行統計分析。1.3藥劑敏感性測定采用菌絲生長速率法［10-11］，對供試菌株BSYJ11進行藥劑敏感性測定，供試藥劑見表1。將每種藥劑配制成質量濃度分別為1×103，1×102，1×10，1，1×10－1，1×10－2mg/L的含藥平板。取直徑為8mm的菌餅，放置于含藥平板中央，菌絲面朝下，以不加藥劑作為空白對照，每個處理3次重復。25℃恒溫培養箱中培養2d后，采用十字交叉法測量供試病菌在含藥培養基上的菌落直徑，與對照比較計算各藥劑處理對病菌的生長抑制率。查機率值與死亡率(抑制率)換算表，用最小二乘法建立毒力回歸方程，計算出各藥劑對病原菌的有效中濃度(EC50)，比較病原菌對各種藥劑的敏感程度。抑制率=(對照組菌落直徑－處理組菌落直徑)/(對照組菌落直徑－菌餅原始直徑)×100%。

2結果與分析

2.1病菌的生物學特性

2.1.1培養基對菌絲生長和菌核產量的影響試驗結果表明，病菌在10種供試培養基上均能生長。在PSA上菌絲生長最快，在番茄汁培養基上生長最慢;在PDA上菌核產量最高，在水瓊脂上菌核產量最低(表2)。

2.1.2pH對菌絲生長和菌核產量的影響菌絲在pH4～11均能生長，pH5～10適宜病菌菌絲生長;pH4～11均能形成菌核，pH6時菌核產量最高(圖2)。 

2.1.3溫度對菌絲生長和菌核產量的影響菌絲生長適宜溫度為25～30℃，最適溫度28℃;菌核形成適宜溫度為15～30℃，最適溫度28℃，在10℃以下和31℃以上不產生菌核(圖3)。

2.1.4碳源和氮源對菌絲生長和菌核產量的影響在供試的10種碳源中，病菌在Richard培養基上菌絲生長最好，其次為D-山梨醇;菌核在以可溶性淀粉為碳源的培養基上產量最大，在以二水合檸檬酸三鈉為碳源的培養基上不產生菌核(表3)。病菌能夠利用供試的9種氮源，其中病菌菌絲在以L-精氨酸為氮源的培養基上菌絲生長速度最快;菌核在以L-α-丙氨酸為氮源的培養基上產量最大，在以L-組氨酸、L-賴氨酸、L-胱氨酸為氮源的培養基上不產生菌核(表3)。

2.1.5光照對菌絲生長和菌核產量的影響不同光照處理結果顯示:半光照有利于病菌菌絲生長，全光照條件下菌核產量最大(表4)。

2.2病菌對藥劑的敏感性由表5可知，病菌對吡唑醚菌酯、肟菌•戊唑醇、咯菌腈、多粘類芽孢桿菌、唑醚•代森聯、異菌脲和多菌靈的敏感性較高，其EC50＜1.0mg/L，EC90＜5.0mg/L;病菌對代森錳鋅、菌核凈、丙環唑、腐霉利的敏感性次之，EC50＜5.0mg/L，5.0mg/L＜EC90＜10.0mg/L;病菌對多抗霉素、枯草芽孢桿菌、內生芽孢桿菌、氟硅唑、嘧霉胺的敏感性略低，EC50＜5.0mg/L，5.0mg/L＜EC90＜100.0mg/L;對其他藥劑的敏感性較差。

3結論

白車軸草夏枯病(Summerblightofwhiteclo-ver)由R．solaniAG－1-IB引起［4］。該病與白車軸草菌核病的癥狀尤為相似。受害植株，開始病部呈水漬狀、淺褐色斑痕，然后向上蔓延，斑痕色澤由淺褐色變成灰白色，此時莖基部軟腐，長出白色絮狀物，或黑色菌核粒。受害輕者，植株呈星點發黃，重則大片萎蔫枯死［12］。該病害在國內首次被發現，且對白車軸草的生產造成極大的威脅，需引起草業工作者及園林工作者的高度重視。掌握該病害的診斷特征，及時采取有效的防治措施，才能防止病害的擴大蔓延，減少其對草業及景觀造成的重大損失。掌握該病菌的生物學特性和病害的發生規律，是進行病害防治的必要前提。通過研究得知:病菌對營養、光照、酸堿度等的要求并不嚴格，因此病害在營養瘠薄的栽培條件下也可嚴重發生。室內藥劑敏感性試驗結果表明:該病菌對吡唑醚菌酯、肟菌•戊唑醇、咯菌腈、多粘類芽孢桿菌、唑醚•代森聯、異菌脲和多菌靈的敏感性較高，其EC50＜1.0mg/L，EC90＜5.0mg/L;其次為代森錳鋅、菌核凈、丙環唑、腐霉利，5.0mg/L＜EC90＜10.0mg/L，內生芽孢桿菌的10.0mg/L＜EC90＜30.0mg/L。通過藥劑敏感性試驗結果，可以篩選到進一步田間試驗的藥劑，對病害的防治提供了備選藥劑，有利于病害的合理防控，為白車軸草健康生產奠定基礎。

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作者：孫慧穎 楊麗娜 謝昀燁 萬丹鳳 白慶榮 單位：吉林農業大學農學院 吉林省樺甸市夾皮溝鎮農業站