化妝品中甲醛毒性的測定法研究范文

本站小編為你精心準備了化妝品中甲醛毒性的測定法研究參考范文，愿這些范文能點燃您思維的火花，激發您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《日用化學工業雜志》2014年第五期

1實驗部分

1.1主要儀器及試劑SynergyH1全功能微孔板檢測儀(檢測儀序列號269900)，美國伯騰公司;隔水式恒溫培養箱，上海三發科技有限公司;移液器，賽默飛世爾公司。青海弧菌Q67凍干粉，華東師范大學提供;超純水，Minipore公司;甲醛，色譜純，默克公司。

1.2實驗方法

1.2.1菌劑復蘇與培養1)取適量－20℃保存的青海弧菌Q67凍干粉，加入5mL0.85%(質量分數，下同)的NaCl溶液，充分混合后于20℃放置15min，使青海弧菌Q67恢復穩定發光，所得菌液待用。2)培養基:混合鹽10.0g，硫酸銨4.2g，葡萄糖10.0g，甘油3.0mL，胰胨1.0g，加水至1L，pH=8.5。混合鹽:MgSO45.07g，MgCO32.25g，MgCl20.19g，CaCO30.06g，KCl0.44g，NaCl16.59g，KBr0.24g。將培養基置于500mL錐形瓶中，塞上棉球，用牛皮紙包扎好，經121℃高壓滅菌20～30min后備用［4］。固體培養基:培養基加2%瓊脂即為固體培養基。固體培養基電爐加熱使溶解至透明，趁熱用漏斗分裝于試管中，每支試管裝至1/3，塞上棉球，用牛皮紙包扎好，經121℃高壓滅菌20～30min后取出制成斜面。將青海弧菌Q67凍干粉用0.5mL0.85%的NaCl溶液溶解，迅速轉入50mL培養基中，22℃恒溫培養，每24h后轉接一次斜面，將培養好的第三代斜面置4℃冰箱中備用。3)檢測用菌液制備:將培養好的菌種接入含有固體培養基的平板中，22℃恒溫培養12～18h后加5mL0.85%的NaCl溶液至青海弧菌Q67平板中，適當振蕩將菌體沖下，以漩渦振蕩器將菌液搖勻，測定其吸光度值，并用0.85%的NaCl溶液將細菌濃度調節至合適范圍后備用。

1.2.2標樣配制及樣品處理標樣配制:用超純水將甲醛配制成一定質量濃度的標準液，再用超純水分別稀釋至6個質量濃度，根據先前的試驗結果，使得6個質量濃度的甲醛溶液產生的發光強度抑制率在0～100%均勻分布。樣品處理:準確稱取1.0g預先混勻的樣品于10mL磨口具塞比色管中，加入1mLTween80，加0.85%的NaCl溶液至10mL，輕搖至樣品充分溶解，用0.45μm濾膜過濾，待用。

1.2.3甲醛的毒性檢測向96孔板中的A1孔加入200μL的超純水(作為本底)，A2孔加入200μL的超純水(作為空白對照)，A3—A8孔分別依次加入上述甲醛標樣，再于A2—A8孔中分別加入1.2.1所得菌液50μL(或100μL)，在B和C排做平行樣，然后放入SynergyH1檢測儀中，檢測5，10，15和30min時青海弧菌Q67的發光強度。

1.2.4數據處理通常用相對發光強度反映毒性大小:毒性越大則對發光抑制越厲害，相對發光強度就越小，反之則發光強度越大。相對發光強度的計算公式為:相對發光強度=(樣品發光強度/對照發光強度)×100%根據擬合劑量－效應曲線，計算甲醛與青海弧菌Q67作用不同時間的半效應濃度(EC50)，并以此判斷甲醛對青海弧菌Q67毒性的大小。

2結果與討論

用超純水將甲醛標準液分別稀釋至6個質量濃度(0，0.01，0.02，0.03，0.04和0.05g•L－1)，然后進行檢測。作用時間為5，10，15和30min時，不同質量濃度的甲醛對青海弧菌Q67的劑量－效應擬合曲線見圖1。由圖1可以看出，隨著甲醛質量濃度的升高，青海弧菌Q67的相對發光強度逐漸降低，兩者成線性負相關;隨著作用時間的延長，青海弧菌Q67的相對發光強度逐漸降低，在15min時，線性方程為y=－1456.7x+97.814，相關系數R2=0.995，甲醛對青海弧菌Q67的效應擬合曲線線性較好，甲醛對青海弧菌Q67的EC50為0.033g•L－1。甲醛對青海弧菌Q67的最低檢測限為0.01g•L－1。使用發光細菌法檢測了8個化妝品(編號1—8)的甲醛毒性情況，結果見表1。由表1可知，根據標準曲線計算，在5～30min內，用發光細菌檢測的8個化妝品中，3號，5號和8號樣品中的甲醛質量分數分別為0.0022%，0.0015%和0.0028%，均低于0.2%，其余5個樣品均未檢出甲醛。6號加標樣品15min時相對發光強度為70.86%，根據標準曲線計算得出其甲醛質量濃度為0.019g•L－1，加標回收率約為95%。

分別采用發光細菌法(15min時相對發光強度下)和《化妝品衛生規范》(2007年版)中的甲醛檢測方法檢測化妝品中的甲醛含量，結果見表2。由表2可知，發光細菌法測定的甲醛含量同標準方法測得的甲醛含量基本一致。綜上，發光細菌法進行甲醛毒性的檢測，能直接、客觀地反映出甲醛對生物的急性毒性。對于人為添加原因造成的甲醛殘留，毒性測試可在15min內快速現甲醛的毒性。由于化妝品成分復雜，干擾因素較多，在以后的實驗過程中，應結合其他甲醛標準檢測方法，進一步研究甲醛對發光細菌毒性的影響，同時根據不同的樣品，探索樣品前處理方法，使得甲醛毒性檢測盡量規避其他基質的影響［6－7］。在分析前，還需對一些特定的檢測和一些特別的樣品進行測試前的準備。

3結論

甲醛對青海弧菌Q67的毒性存在顯著的劑量－效應關系，且效應能夠在短時間(15min左右)內顯現并達到較佳效果，甲醛對青海弧菌Q67的EC50為0.033g•L－1。甲醛對青海弧菌Q67的最低檢測限為0.01g•L－1，所以發光細菌法可以用于快速檢測并判定其是否超標。。

作者：張林張鵬鄒勇平周元元王磊傅芳芳趙渝單位：國家洗漱用品質量監督檢驗中心揚州市產品質量監督檢驗所上海師范大學