ICA對鼠免疫效能的影響范文

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作者：劉婧言瑩史冰楠王德海單位：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院武漢

方法

1試驗(yàn)設(shè)計(jì)及指標(biāo)檢測

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行設(shè)計(jì)。將100只6周齡健康SPF級昆明系小鼠隨機(jī)分為2組:對照組50只，灌服生理鹽水0．4mL/d;試驗(yàn)組50只，灌服含ica的生理鹽水0．4mL/d，ICA的終濃度為100mg/kg，連續(xù)灌服。在試驗(yàn)開始后第0，1，4，7，10，13，16，19天每組分別隨機(jī)選取5只小鼠采血。采血后一部分血液立即進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的測定，另一部分血液加入溶血劑后進(jìn)行血紅蛋白含量的測定。血液涂片采用酸性α－醋酸萘酯酶(ANAE)染色法進(jìn)行T淋巴細(xì)胞活性的測定。

2組織學(xué)觀察

將浸泡于10%甲醛固定液中的小鼠胸腺、脾臟和腸系膜淋巴結(jié)修整標(biāo)號，制備石蠟切片，H．E．染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行組織學(xué)觀察，照相。

3數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，并用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。

結(jié)果與分析

1ICA對小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(結(jié)果見表1，2)

由表1可見:試驗(yàn)組小鼠在灌服ICA后，血液中白細(xì)胞數(shù)量一直呈現(xiàn)升高趨勢，并在試驗(yàn)后第7天達(dá)到最高值，隨后維持在較高水平，在試驗(yàn)結(jié)束時(試驗(yàn)后第19天)略有下降，其中在試驗(yàn)后第13天顯著高于對照組(P＜0．05)，在試驗(yàn)后第7，10，16，19天極顯著高于對照組(P＜0．01)。血液中的紅細(xì)胞數(shù)也一直呈升高趨勢，在整個試驗(yàn)期內(nèi)都高于對照組，并在試驗(yàn)開始后第16天達(dá)到最高值，其中在試驗(yàn)后第13，16天顯著高于對照組(P＜0．05)。

由表2可見:試驗(yàn)組小鼠在灌服ICA后，血紅蛋白濃度在試驗(yàn)初期變化并不明顯，直到試驗(yàn)后第16天才顯著高于對照組(P＜0．05)，在試驗(yàn)后第19天極顯著高于對照組(P＜0．01)。ANAE+T淋巴細(xì)胞的認(rèn)定以淋巴細(xì)胞中有紅色顆粒為指示指標(biāo)(見164頁彩圖1A)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)，ANAE+T淋巴細(xì)胞比率與對照組相比一直處于較高的水平，并于試驗(yàn)后第4天達(dá)到最高值，與對照組相比差異極顯著(P＜0．01)，隨后略有下降，但顯著高于對照組水平(P＜0．05)，并直至試驗(yàn)結(jié)束。

2ICA對小鼠免疫器官影響的組織學(xué)觀察

組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，在整個試驗(yàn)周期內(nèi)，對照組小鼠淋巴結(jié)的被膜完整，結(jié)構(gòu)清晰，皮質(zhì)區(qū)可見較多淋巴小結(jié)和淋巴竇，髓質(zhì)區(qū)的髓索和髓竇清晰完整，淋巴竇內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞;胸腺中可見散在的大量胸腺小體，皮質(zhì)部可見各種分化程度的淋巴細(xì)胞，髓質(zhì)部淋巴細(xì)胞少而稀疏;脾臟被膜完整，脾臟巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞較多，脾小梁和脾小體結(jié)構(gòu)清晰(見164頁彩圖1B)，并可見到較多的血竇。試驗(yàn)組小鼠的胸腺、脾臟和淋巴結(jié)在整個試驗(yàn)周期內(nèi)與對照組相比無明顯眼觀差異(見164頁彩圖1C)。

討論

ICA作為傳統(tǒng)補(bǔ)益類中藥淫羊藿黃酮類提取物，其免疫功能已被研究證實(shí)。趙連梅等［6］通過灌服方法對環(huán)磷酰胺所致的免疫抑制小鼠給予ICA。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ICA能極顯著提高小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，使脾淋巴細(xì)胞的數(shù)量增加和增殖反應(yīng)提高，促進(jìn)小鼠脾自然殺傷和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性和脾細(xì)胞腫瘤壞死因子(TNF－α)的產(chǎn)生，并增加脾臟CD4T淋巴細(xì)胞和自然殺傷T淋巴細(xì)胞的比率，表現(xiàn)為明顯的逆轉(zhuǎn)化療小鼠免疫抑制狀態(tài)的作用，同時也說明ICA對機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用主要表現(xiàn)為激活T淋巴細(xì)胞。

汪海東等［7］利用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測了脾CD4T淋巴細(xì)胞的凋亡率，利用電泳遷移率(EMSA)技術(shù)檢測了細(xì)胞NF－κB的活性，并利用Western－blot印跡法檢測了細(xì)胞P65蛋白的表達(dá)水平，認(rèn)為ICA可經(jīng)NF－κB信號通路提高NF－κB的活性和誘導(dǎo)P65蛋白的高表達(dá)，進(jìn)而抑制機(jī)體淋巴細(xì)胞的過度凋亡，延緩動物免疫衰老。而本試驗(yàn)的結(jié)果也表明，小鼠灌服ICA后可明顯提高其外周血中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的數(shù)量，并可使血紅蛋白濃度升高，這一結(jié)果與趙連梅等［8］的結(jié)論相同。同時本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，ICA引起外周血ANAE+T淋巴細(xì)胞比率的增加要早于對機(jī)體淋巴細(xì)胞數(shù)量的提升，這表明ICA在體內(nèi)首先發(fā)揮激活T淋巴細(xì)胞的功能，并繼而表現(xiàn)為刺激機(jī)體產(chǎn)生大量的免疫細(xì)胞，但本試驗(yàn)對小鼠免疫器官的組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，ICA對機(jī)體免疫器官的作用并不明顯，免疫組織的淋巴細(xì)胞數(shù)量并未見眼觀變化，這一結(jié)論與王洪武等［5］的研究結(jié)果并不一致，產(chǎn)生這種不一致的原因可能是試驗(yàn)檢測方法的不同。

灌服ICA可明顯增強(qiáng)小鼠免疫功能，但對機(jī)體免疫組織結(jié)構(gòu)的影響不顯著，可見ICA對機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)是以刺激、激活機(jī)體內(nèi)原有免疫細(xì)胞為主的，此種作用及其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。