乳頭瘤病毒感染與食管鱗癌的關系范文

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【摘要】目的:檢測高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)在十堰地區食管鱗癌(esophagealsqua-mouscellcarcinoma，ESCC)組織中的感染率，分析其相關性。方法:收集十堰地區87例食管鱗癌組織和50例對照組食管組織，實時熒光定量PCR法檢測組織中HPV16感染率。結果:食管鱗癌組織和對照組食管組織中HPV16的檢出率分別為57．5%和36．0%，食管鱗癌組織中HPV16感染率顯著高于對照組(P=0．016＜0．05)。分析食管鱗癌患者年齡、性別、病理分級、大體分型、浸潤深度、淋巴結侵犯以及TNM分期與HPV16感染的關系，差異均無統計學意義。HPV16感染與食管鱗癌患者臨床特征未見顯著相關性。結論:HPV16感染可能是十堰地區食管鱗癌發生的因素之一，針對高危型HPV感染的防治對于該地區食管鱗癌的發生具有重要意義。

【關鍵詞】食管鱗癌;人乳頭瘤病毒;PCR

食管惡性腫瘤中90%以上的病例為食管鱗癌(esophage-alsquamouscellcarcinoma，ESCC)，是我國常見的消化道腫瘤［1］。由于早期診斷不易明確，疾病進展迅速，食管鱗癌患者的5年生存率僅為10%［2］。人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)屬于雙鏈環狀DNA病毒，依據其與人體惡性腫瘤發生的關系，分為低危型和高危型。高危型HPV，包括HPV16與HPV18等，與人體多種腫瘤的發生均有關系［3］。Syrjanen［4］在1982年最早依據鏡下觀察到的食管癌形態學的改變提出了高危型HPV感染與食管鱗癌發生的關系，近來的研究報道顯示HPV16與我國食管鱗癌的發生存在密切關系。我國的北方太行山區、新疆地區均屬于食管鱗癌相對高發區，研究表明當地人群中食管鱗癌患者與HPV16的感染狀態密切相關［5，6］。當前有關高危型HPV感染與湖北十堰地區食管鱗癌發生的研究尚未見相關報道。本研究收集了十堰地區食管鱗癌新鮮組織標本87例和對照組食管良性病變、正常組織等共50例，采用實時熒光定量PCR技術對組織進行HPV分型檢。

1資料與方法

1．1標本來源及臨床資料

收集于東風總醫院接受手術切除并經過明確病理診斷為食管鱗癌的新鮮組織標本87例，同期收集該院的食管良性病變組織，如食管炎癥、食管瘺、食管憩室等共38例，收集食管正常組織12例。食管良性病變組織和食管正常組織納入為對照組，共50例。所有組織新鮮標本均在術后立即儲存于液氮中備用。所有納入研究的患者之前均未行放療或者化療。食管鱗癌87例患者中，男性58例，女性29例。年齡38～80歲，中位年齡61歲，平均年齡60．09歲。病理分級:高分化9例;中分化66例;低分化12例。依照國際抗癌聯盟(UICC)制定的TNM國際食管癌分期標準，浸潤深度依次為T1:黏膜下(9例);T2:淺肌層(14例);T3:深肌層(55例);T4:管壁全層(9例)。區域淋巴結分期為N0:區域淋巴結無轉移(51例);N1:區域淋巴結有轉移(36例)。TNM分期:Ⅰ期11例;Ⅱ期36例;Ⅲ期37例;Ⅳ期3例。病理分型:髓質型43例;潰瘍性38例;縮窄性3例;蕈傘型3例。吸煙狀況:吸煙者38例;不吸煙者49例。

1．2組織中DNA的提取

采用購于德國Qiagen公司的人體組織DNA提取試劑盒，按照試劑盒中操作方法和步驟抽提食管鱗癌組織和對照組中的總DNA。

1．3HPV16熒光定量PCR檢測

由上海生工生物有限公司合成HPV16和內參照β－ac-tin引物。HPV16上游引物:TCAAAAGCCACTGTGTCCTG，下游引物:CGTGTTCTTGATGATCTGCA，擴增長度為120bp。β－actin上游引物:TCACCCACACTGTGCCCATCT，下游引物GTGAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGTC，擴增長度為106bp。收集各個樣本DNA，分組并標記，加入到PCR反應體系中擴增。擴增條件如下:94℃1min預變性，95℃5s到60℃30s循環40次，最后72℃延伸8min。采用購自美國MJResearch公司的MJOpticon2Monitor全自動熒光定量PCR檢測儀，設定PCR反應體系為40μl，熒光信號收集設置為60℃，自動對擴增進行實時動態檢測和結果分析。

1．4統計學分析

統計學分析采用SPSS19．0軟件，應用χ2檢驗進行統計學處理，P＜0．05被認為差異有統計學意義。

2結果

2．1食管鱗癌組織與對照組中HPV16感染率的比較

共檢測了87例食管鱗癌組織和50例對照組中HPV16的感染率，經統計學分析發現差異有統計學意義(χ2=5．856，P=0．016＜0．05)。

2．2食管鱗癌患者臨床病理特征與HPV16感染狀態的關系

根據食管鱗癌患者的中位年齡，將87例患者按照年齡分為≥61歲組和＜61歲組。同時按照患者的性別、病理分級、大體分型、浸潤深度、淋巴結侵犯以及TNM分期對食管鱗癌中的HPV16感染狀況進行比較分析。結果如表2所示，HPV16感染率在各個分組中的差異均無統計學意義。

3討論

食管鱗癌的發生具有顯著的地域性和種族屬性，與多種因素相關，包括遺傳、環境、營養以及病毒感染等［7］。其中高危型HPV，尤其HPV16在食管鱗癌發生中的作用越來越受到國內外研究的重視和報道。近期有關HPV16感染與食管鱗癌的研究發現，食管鱗癌高發區患者的食管鱗癌組織中HPV16的檢出率顯著增高，研究者采用原位雜交以及設計引物后行PCR檢測，均發現HPV16感染與食管鱗癌的發生密切相關［5，6］。本研究中采用實時熒光定量PCR法檢測十堰地區食管鱗癌組織中HPV16的感染率，結果顯示食管鱗癌組織中HPV16感染率顯著高于對照組食管組織，這也表明十堰地區食管鱗癌的發生與HPV16感染存在顯著相關性。同時我們將87例食管鱗癌患者的臨床資料納入研究，分析HPV16感染與食管鱗癌患者臨床病理特征的關系。統計分析表明食管鱗癌患者的年齡、性別、病理分級、大體分型、浸潤深度、淋巴結侵犯以及TNM分期均與HPV16感染無顯著相關性。這與之前的研究結果較為一致［8，9］，表明HPV16的感染對于食管鱗癌的臨床病理特征無顯著關系。

此外，也有研究發現HPV16感染不僅與食管鱗癌的發生有顯著關系，并且HPV16感染的狀態有可能是影響食管鱗癌患者預后的獨立危險因素之一［10］。這也提示我們對于HPV16感染與食管鱗癌患者預后的影響也是今后的研究方向之一，對于改善食管鱗癌患者的預后具有積極的意義。然而，一項在閩南地區的研究發現，實時熒光定量PCR技術檢測發現HPV16和HPV18均與該地區的食管鱗癌的發生存在相關性［11］。而一項在河南的研究中也發現HPV16、HPV18均與食管癌的發生相關，并且HPV16與食管鱗癌發生的關聯度高于HPV18［12］。這也表明盡管HPV16感染與食管鱗癌的發生密切相關，但同為高危型的HPV18與食管鱗癌的發生關系也應該受到相應的重視，需要進一步的后期研究。

綜上，HPV16感染作為生物致癌因素之一，受到廣泛的關注和研究［13］。本研究中也發現HPV16與十堰地區食管鱗癌的發展有顯著關系，同時HPV16的感染與食管鱗癌患者的臨床病理特征未見顯著相關性。這也提示我們對于食管鱗癌高發病區開展高危型HPV流行病學調查的必要性，及時監測人群中高危型HPV的感染狀態。這也有利于及早發現和干預食管鱗癌的發生，對于改善食管鱗癌患者的預后有積極的臨床意義。

作者：秦豫培；劉鵬；鄒燦；楊麗；孫珊；胡陽黔