沙利度胺對人宮頸癌細(xì)胞增殖抑制的影響范文

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【摘要】目的：目的：探討沙立度胺對人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖抑制的作用。方法方法方法:::體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞株，加入不同濃度的沙利度胺（50、100、200ug/ml），同時設(shè)空白對照組；采用MTT法測量各組細(xì)胞增殖抑制率，Western-blot法檢測細(xì)胞中環(huán)氧化酶-2（COX-2）的變化。結(jié)果：結(jié)果：結(jié)果：沙利度胺對人宮頸癌Hela細(xì)胞的生長具有明顯的抑制作用，并隨藥物濃度和時間的增加實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞的抑制率逐漸增加，較對照組差異有顯著性（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組中COX的表達(dá)均低于對照組（P<0.05）。結(jié)論：結(jié)論：結(jié)論：沙利度胺對宮頸癌Hela細(xì)胞的生長具有抑制作用，其機(jī)制可能與下調(diào)COX-2有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】沙利度胺；宮頸癌細(xì)胞；環(huán)氧化酶-2.

沙利度胺一個曾給人類帶來上萬名嬰兒肢體畸形的藥物，最近研究顯示其具有廣泛免疫調(diào)節(jié)作用和抗血管形成作用[1]，而被逐漸引起重視。為進(jìn)一步研究沙利度胺的抗腫瘤作用，本研究旨在觀察沙利度對宮頸癌Hela細(xì)胞抑制作用，并探討其可能的作用機(jī)制，為其在宮頸癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

人宮頸癌細(xì)胞株Hela購于河北醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院細(xì)胞庫，沙利度胺（Thal）、DMSO、0.25%姨酶均系購于美國Sigma公司產(chǎn)品，胎牛血清購于杭州四季青生物工程材料公司，RPMI1640購自美國Gibco公司，兔人抗COX-2試劑盒購自美國Sigma公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)

將Hela細(xì)胞置于含10%小牛血清培養(yǎng)液，于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以每周傳代2-3次，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2MTT法檢測沙利度胺對宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響

取對數(shù)生長期的Hela細(xì)胞，以1x106／ml，接種于96孔培養(yǎng)板每孔100ul,細(xì)胞貼壁生長24小時后，棄去培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)組分三組（高濃度組、中濃度組、低濃度組）分別加入Thal濃度50、100、200ug/ml的培養(yǎng)液200ul，空白對照組加入DMSO的培養(yǎng)液200ul。每孔設(shè)6個復(fù)孔。分別培養(yǎng)24、48、72h后，每孔加入5mg/mlMTT100ul，繼續(xù)培養(yǎng)4h,棄去培養(yǎng)液，加入DMSO100ul震蕩10分鐘，使結(jié)晶充分溶解，用全自動酶標(biāo)儀檢測490nm處每孔的吸光度（A），計(jì)算增殖抑制率。細(xì)胞增殖抑制率（%）=（1-實(shí)驗(yàn)組A值/空白對照組A值）x100%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值。

1.2.3Westernblot法對COX-2表達(dá)檢測

分組同上，分別取各組人宮頸癌Hela細(xì)胞，用蛋白裂解液充分的裂解細(xì)胞；離心，取上清提取總蛋白；采用酚試劑法進(jìn)行對蛋白定量；采用聚丙烯酰胺凝膠電泳和電轉(zhuǎn)儀將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜，封閉，過夜；按說明書要求加入待檢測的一抗以及相應(yīng)的二抗，顯色，掃描測定雜交帶的灰度值，用目的蛋白活性片段與內(nèi)參β-肌動蛋白灰度值的相對比值代表各COX-2活化蛋白的相對含量。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)以sx±的形式表示，組與組間均數(shù)用t檢驗(yàn)，P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同濃度沙利度胺對Hela細(xì)胞增殖的抑制作用

采用MTT法測定細(xì)胞增殖抑制率可知沙利度胺實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長出現(xiàn)明顯抑制，隨著沙利度胺濃度增加，抑制率顯著升高（P<0.05），相同藥物濃度，隨著作用時間延長，抑制率顯著升高（P<0.05），呈顯劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。

3討論

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及病死率在我國呈顯上升和年輕化趨勢，嚴(yán)重危害婦女健康和生命[2]。而傳統(tǒng)化療方案在宮頸癌治療方面療效欠佳，且毒副作用大、易發(fā)生耐藥性，因此尋找新的、有效的、毒副作用小的化療藥物至關(guān)重要。沙利度胺（反應(yīng)停，酞咪哌叮酮，thalidomide）曾因嚴(yán)重的致畸作用而被禁用。近年來研究表明沙利度胺具有抗腫瘤作用，并可通過抑制血管形成[3],而抑制腫瘤的生長，但尚未見在宮頸癌中報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)用不同濃度的沙利度胺作用于宮頸癌Hela細(xì)胞后，通過MTT法觀察發(fā)現(xiàn)，沙利度胺可抑制細(xì)胞的生長，且隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長而逐漸增強(qiáng)，說明沙利度胺對宮頸癌Hela細(xì)胞生長的抑制作用具有一定的量效、時效性,提示沙利度胺可能通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖而起到抗腫瘤作用。COX-2(cyclooxgenase-2)是前列腺素合成限速酶，在正常組織中不表達(dá)或表達(dá)水平較低，而在許多惡心腫瘤中存在高表達(dá)，如肺癌、胰腺癌、大腸癌等[45]。COX-2可能通過某種機(jī)制上調(diào)某些因子如VEGF等的表達(dá)而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移能力[6]。而COX-2抑制劑可通過影響COX-2的活性來阻止腫瘤發(fā)生及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞早期凋亡。研究證實(shí)，COX-2在宮頸癌中高表達(dá)，并與宮頸癌的發(fā)生發(fā)生展、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)[78]。

本研究結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞COX-2表達(dá)情況隨沙利度胺劑量增加逐漸降低。綜上所述，沙利度胺可抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的生長，并可通過減少細(xì)胞內(nèi)的COX-2表達(dá)，從而抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖與遷移能力，為其在宮頸癌的分子靶向治療提供了理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)：[1]SHORTTJ,HSUAK,JOHNSTONERW.Thalidomide-analoguebiologyimmunologicalmolecularandepigenetictargetsincancertherapy[J].Oncogene,2013,32(36):4191-4202..[2]張晗雪，張新.宮頸癌保留生育功能手術(shù)的臨床病例報(bào)道及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J],中華臨床醫(yī)師雜志，2015,9（5）:865-868.[6]管小青,顧書成,吳驥,等.生存素和COX-2在乳腺癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移癌組織的表達(dá)[J].江蘇醫(yī)藥,2012,38(1):33-35[7]徐惠勤,王瓊.宮頸癌患者血清和組織MMPCOX-2CD147和IGF的變化研究.浙江臨床醫(yī)學(xué),2015(17):535-536.[8]曹卉,劉穎.COX-2與Bcl-2蛋白在公家鱗癌中的表達(dá)及其與宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系研究.臨床和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015(14):1692-1695.

作者：楊麗萍；侯俊德；馮海芹（通訊作者）；劉凌凌；李哲；韓丹 單位：河北省邯鄲市中心醫(yī)院