SLE患者外周血漿細(xì)胞變化研究范文

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摘要：本文通過(guò)研究新疆維吾爾族sle患者外周血pDC的變化，探討其在維吾爾族SLE發(fā)病中的作用。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血pDC水平，ELISA檢測(cè)血清IFN－α、IL－23濃度。研究發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血pDC水平顯著低于正常對(duì)照組，其中SLE活動(dòng)組水平明顯低于緩解組，其pDC水平與SLE活動(dòng)性指數(shù)（SLEdiseaseactivityindex，SLEDAI）評(píng)分呈負(fù)相關(guān)；SLE患者血清IFN－α、IL－23水平明顯升高，且兩者濃度與pDC水平呈正相關(guān)。上述結(jié)果提示，維吾爾族SLE患者外周血pDC水平顯著降低，并且與病情活動(dòng)度相關(guān)，其相應(yīng)細(xì)胞因子表達(dá)異常，引發(fā)機(jī)體的免疫異常，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞：系統(tǒng)性紅斑狼瘡；漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞；干擾素α；白介素23

SLE是以免疫性炎癥為主的彌漫性結(jié)締組織病，目前認(rèn)為主要由免疫系統(tǒng)紊亂、多種自身抗體產(chǎn)生及細(xì)胞因子活性異常引起［1－2］，并導(dǎo)致全身多系統(tǒng)、臟器受損。SLE在女性中多見(jiàn)，尤其是20～40歲的育齡女性。研究發(fā)現(xiàn)SLE患者體內(nèi)的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)均與DC功能異常密切相關(guān)，普遍認(rèn)為自身抗原、DC和免疫應(yīng)答是SLE發(fā)生和發(fā)展的3個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)［3］。DC是來(lái)源于骨髓單個(gè)核細(xì)胞的一組異質(zhì)性細(xì)胞，數(shù)量稀少卻廣泛存在于人體組織中，作為APC，它在維持胸腺和外周免疫耐受中發(fā)揮重要作用。結(jié)構(gòu)性去除DC可打破CD4＋T細(xì)胞的自我耐受狀態(tài)，引起自身免疫病。根據(jù)不同的來(lái)源、受體和功能DC可分為髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞（myeloidden－driticcell，mDC）和漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞（plasma－cytoiddendriticcell，pDC）［4］。pDC在不同分化階段和不同刺激誘導(dǎo)下可表現(xiàn)出不同的免疫調(diào)節(jié)功能，其功能異常可引起自身免疫性疾病［5－8］。研究顯示，pDC過(guò)度活化及產(chǎn)生的IFN－α、IL－23在SLE的發(fā)病過(guò)程中具有重要作用［3］。SLE臨床表現(xiàn)多樣，部分患者早期疾病表現(xiàn)不典型，極易誤診。近年世界醫(yī)療組織研究發(fā)現(xiàn)SLE的發(fā)病率與種族有很大關(guān)系，而種族是在體質(zhì)形態(tài)上具有某些共同遺傳特征的人群。因此，本課題組通過(guò)檢測(cè)新疆維吾爾族SLE患者外周血pDC表達(dá)水平的變化，并研究其與IFN－α、IL－23表達(dá)水平的相關(guān)性，來(lái)探討pDC在維吾爾族SLE患者發(fā)病中的作用。

1資料與方法

1．1臨床資料

收集2014年1月至2016年1月新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科60例維吾爾族SLE患者，診斷符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，參照SLE活動(dòng)性指數(shù)（SLEdiseaseactivityindex，SLEDAI）評(píng)分作為病情活動(dòng)判斷標(biāo)準(zhǔn)，SLEDAI評(píng)分大于8分，病情處于活動(dòng)期，其中30例為病情活動(dòng)組，30例為病情緩解組；30例新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院體檢中心的維吾爾族健康人作為正常對(duì)照，均無(wú)風(fēng)濕病史和風(fēng)濕病家族史。各組間年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1）。所有患者知情同意并且實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1．2方法

1．2．1標(biāo)本采集采集受試對(duì)象空腹靜脈血5mL，EDTA抗凝，分離血清，轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中，－80℃冰箱保存?zhèn)溆谩２捎脴?biāo)準(zhǔn)Ficoll密度梯度離心法分離得PBMC。1．2．2主要試劑和儀器FITC標(biāo)記的抗Lin1抗體、APC標(biāo)記的抗CD123、抗HLA－DR抗體（美國(guó)BD公司）；IFN－α、IL－23ELISA試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；FACSCalibur型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）；Statfax4200美國(guó)酶標(biāo)儀（AWARENESS公司）1．2．3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)將PBMC懸液分裝至5個(gè)流式管，調(diào)整體積為100μL，每管均加入FITC標(biāo)記的抗CD11C抗體、APC標(biāo)記的抗CD123、抗HLA－DR抗體，室溫避光孵育30min。1000r／min離心5min，PBS洗滌2遍，離心，棄上清，加2％多聚甲醛固定。流式細(xì)胞儀檢測(cè)中CD123＋DC即pDC，運(yùn)用CellQuest軟件分析pDC細(xì)胞數(shù)量（見(jiàn)圖1）。圖1流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析1．2．4細(xì)胞因子IFN－α、IL－23水平檢測(cè)操作均按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，取血清和不同稀釋倍數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品100μL加入ELISA試劑盒96孔板中；加入人生物素標(biāo)記抗體（Biotin）100μL；室溫18～25℃孵育2h，洗滌，甩干；加辣根過(guò)氧化物酶親和素，室溫18～25℃孵育1h，洗滌，加入TMB顯色，室溫避光孵育10～15min；加終止液；讀取酶標(biāo)儀測(cè)得D（450nm）值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IFN－α、IL－23濃度。1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11．5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。定量資料用x±s表示。按照分組進(jìn)行方差齊性分析，若齊性行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，不齊行Mann－Whitney秩和檢驗(yàn)，分析相關(guān)性時(shí)，采用雙變量相關(guān)分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．1SLE患者外周血pDC水平

SLE患者外周血pDC水平（0．067±0．035）顯著低于正常對(duì)照組（0．152±0．061），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），其中活動(dòng)組pDC水平（0．048±0．021）％明顯低于緩解組（0．074±0．031）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見(jiàn)表2，圖2。

2．2活動(dòng)組SLE患者SLEDAI評(píng)分與外周血pDC水平的相關(guān)性

活動(dòng)組SLE患者SLEDAI評(píng)分與外周血pDC水平呈負(fù)相關(guān)（r＝－0．243），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見(jiàn)表3。

2．3SLE患者血清IFN－α表達(dá)水平及其與pDC水平的相關(guān)性

SLE患者血清IFN－α水平明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），且pDC水平與IFN－α水平呈正相關(guān)（r＝0．373，P＜0．05），見(jiàn)表2、3。

2．4SLE患者血清IL－23表達(dá)水平及其與pDC水平的相關(guān)性

SLE患者血清IL－23水平明顯高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），且pDC水平與IL－23水平呈正相關(guān)（r＝0．298，P＜0．05），見(jiàn)表2、3。

3討論

SLE被認(rèn)為是自身免疫性疾病的原型，目前其病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確。易感個(gè)體在遺傳、感染、紫外線等多種因素的綜合作用下，T、B淋巴細(xì)胞異常活化，自身抗原免疫耐受缺失，最終導(dǎo)致SLE的發(fā)病［7］。國(guó)外研究顯示由于SLE在不同人種和族裔的患病率、發(fā)病機(jī)制及病情演變過(guò)程等不盡相同，因此不同人種和族裔的SLE患者對(duì)于藥物治療的反應(yīng)不同，亦可導(dǎo)致預(yù)后存在顯著差異。DC是目前已知的功能最強(qiáng)的唯一能激活初始T淋巴細(xì)胞的APC，它可以攝取、加工處理抗原，并將抗原信息提呈給T細(xì)胞，誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫反應(yīng)和維持免疫耐受。它聯(lián)系著固有免疫和適應(yīng)性免疫，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。Ber－nasconi等［8］研究發(fā)現(xiàn)自身反應(yīng)性T、B細(xì)胞引起的SLE可能是DC自身穩(wěn)定性改變的結(jié)果，DC異常的激活參與了SLE的發(fā)病。pDC是目前被研究最多的DC亞群，有研究報(bào)道SLE患者外周血pDC減少，炎癥組織和靶器官出現(xiàn)高水平pDC［9］。本研究通過(guò)檢測(cè)新疆維吾爾族SLE患者外周血pDC水平，發(fā)現(xiàn)其計(jì)數(shù)顯著低于健康對(duì)照組，其中活動(dòng)組低于穩(wěn)定組，表明pDC參與了SLE的發(fā)病，與國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道一致。目前認(rèn)為SLE患者外周血中pDC水平下降不是細(xì)胞數(shù)量的下降，而是SLE患者體內(nèi)pDC的分布與正常對(duì)照組不同［10］，也有研究認(rèn)為與pDC過(guò)度凋亡以及自身發(fā)育異常有關(guān)［11－13］。課題組通過(guò)進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)組pDC計(jì)數(shù)明顯減少，并且與SLEDAI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，提示pDC水平與疾病活動(dòng)有關(guān)。國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)報(bào)道，漢族SLE患者外周血pDC水平與SLEDAI評(píng)分無(wú)相關(guān)性［14］，是否與研究對(duì)象的種 族差異有關(guān)尚需進(jìn)一步研究論證。pDC表現(xiàn)為漿細(xì)胞形態(tài)，含有豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，表達(dá)CD4和高水平的IL－3aR，但是缺乏髓樣抗原包括CD11c和大多數(shù)髓系標(biāo)記。病毒感染時(shí)，pDC分泌大量IFN－α。在病毒／TLR刺激下，pDC通過(guò)IFN－α依賴性而非IL－12依賴性通路誘導(dǎo)初始T細(xì)胞向Th1分化［15－16］。在SLE患者體內(nèi)IFN－α通路處于活化狀態(tài)，敲除狼瘡鼠IFN－α受體基因可使動(dòng)物免于發(fā)病，由此IFN－α是SLE患者發(fā)病中重要的細(xì)胞因子之一［17－19］。在SLE患者體內(nèi)存在大量免疫復(fù)合物，可激活pDC內(nèi)的TLR9，引起一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致IFN－α大量合成［20－22］。IFN－α能夠促進(jìn)自身反應(yīng)性T、B細(xì)胞增殖分化，從而引起自身免疫反應(yīng)的異常，促進(jìn)SLE的發(fā)病。在研究中發(fā)現(xiàn)，維吾爾族SLE患者IFN－α濃度也顯著高于正常對(duì)照組，并且與pDC水平呈正相關(guān)，這與國(guó)內(nèi)的漢族人群研究結(jié)論一致［14］，說(shuō)明pDC通過(guò)分泌大量IFN－α參與了疾病的發(fā)生發(fā)展。成熟的DC分泌IL－23，同時(shí)細(xì)菌產(chǎn)物能夠誘導(dǎo)DC持續(xù)表達(dá)IL－23。IL－23是Th17分化發(fā)育過(guò)程中起重要作用的細(xì)胞因子，主要作用于CD4＋T細(xì)胞，誘導(dǎo)其分化為Th17，后者通過(guò)分泌炎性細(xì)胞因子IL－17參與自身免疫性疾病的發(fā)病［23］。大量研究表明，IL－23在自身免疫性疾病如SLE、RA、干燥綜合征及系統(tǒng)性硬化病等患者的血漿及組織中表達(dá)均升高。Puwipirom等［24］研究發(fā)現(xiàn)IL－23／IL－17軸參與到SLE動(dòng)物模型和SLE患者的發(fā)病中。同樣研究者發(fā)現(xiàn)維吾爾族SLE患者血清IL－23濃度也明顯高于正常對(duì)照組，且與pDC水平呈正相關(guān)。以上研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)漢族SLE患者pDC及其IFN－α分泌的研究結(jié)論基本一致，說(shuō)明pDC的異常是SLE患者共同的發(fā)病機(jī)制之一。SLE患者體內(nèi)pDC被激活后分泌大量IFN和IL－23，并釋放至外周血中，而在正常對(duì)照組中pDC不能被激活釋放炎性因子，因此SLE患者組IFN－α和IL－23水平較正常對(duì)照組是升高的。同時(shí)發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血pDC的數(shù)量與IFN－α和IL－23水平具有相關(guān)性，推測(cè)pDC可通過(guò)分泌大量IFN－α和IL－23引發(fā)機(jī)體的免疫異常，最終導(dǎo)致SLE發(fā)病。目前國(guó)外有研究報(bào)道［25］，在狼瘡鼠模型中發(fā)現(xiàn)清除pDC后可降低體內(nèi)IFN水平，同時(shí)能夠減輕疾病癥狀，并且在人體前期和Ⅰ期臨床試驗(yàn)中是安全有效的，表明pDC在SLE的發(fā)病中具有不可或缺的作用。pDC具有一般APC的共性，在免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，同時(shí)也表現(xiàn)出一些特有的生物學(xué)特性。在本次研究中發(fā)現(xiàn)，維吾爾族SLE患者外周血pDC水平顯著降低，并且與病情活動(dòng)度具有相關(guān)性，說(shuō)明pDC計(jì)數(shù)可作為疾病臨床監(jiān)測(cè)的參考指標(biāo)。并且維吾爾族SLE患者血清IFN－α、IL－23水平與pDC之間存在明顯的相關(guān)性，推測(cè)pDC可能通過(guò)釋放大量炎性細(xì)胞因子導(dǎo)致自身免疫過(guò)程的惡性循環(huán)。因此，pDC作為至關(guān)重要的免疫調(diào)控者，在維吾爾族SLE的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有不可或缺的作用，本結(jié)果有助于研究者深化對(duì)疾病發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)，從而為疾病的防治提供新的思路。

參考文獻(xiàn)

［1］張琳，張偉．系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)的生物標(biāo)志物［J］．中國(guó)免疫學(xué)雜志，2007，23（9）：860－863． 

［6］張永亮，曹雪濤．漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能研究進(jìn)展［J］．現(xiàn)代免疫學(xué)，2005，25（2）：167－170．

［14］周晶晶，汪國(guó)生，李向培，等．系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的變化及意義［J］．中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2013，33（5）：334－338．

作者：張繼云 哈利 楊今言 趙旌 李文艷 單位：新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院