綿地花菌黃酮類物質抗氧化探析范文

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《安徽科技學院學報》2016年第3期

摘要:

目的:探討綿地花菌黃酮類化合物的抗氧化活性。方法:采用有機溶劑萃取的方法，獲取綿地花菌子實體黃酮類化合物，以VC作為對照，測定清除DPPH•、羥基自由基、亞硝酸鹽、超氧陰離子的能力等指標。結果:綿地花菌黃酮類化合物能有效的清除DPPH•、羥自由基、亞硝酸鹽和超氧陰離子，其清除能力的大小與濃度呈正相關。結論:綿地花菌黃酮類化合物具有較強的體外抗氧化活性。

關鍵詞:

綿地花菌;子實體;黃酮類物質;抗氧化

綿地花菌是屬于多孔菌目、地花菌科、地花菌屬的稀有蕈菌［1］。有研究表明其子實體富含蛋白質、氨基酸、微量元素、維生素等營養物質［2］，同時還含有多糖、多酚類、三萜類等特殊活性成分，具有治療高血壓、抗腫瘤、抗衰老、抑菌等功效［3－4］，是一種極具有開發前景的藥食同源菌。黃酮類化合物是一類廣泛存在于大型真菌與植物體中的次生代謝產物，具有降血脂、抗病毒、抗氧化、防衰老及抗癌等多種藥用功效。目前已有不少關于黃酮類化合物抗氧化活性的報道［5－6］，但有關綿地花菌黃酮類物質的相關報道較少。為此本實驗通過體外化學檢測法，對其抗氧化活性進行了初步的研究，以期為綿地花菌的開發及次生代謝產物的深入研究提供科學依據。

1材料與方法

1．1供試材料綿地花菌子實體，購自于安徽省岳西縣。

1．2方法

1．2．1黃酮類化合物樣品的制品

稱取子實體粉末10g，加入正己烷–乙醇混合溶劑(10∶1，v/v)100mL脫脂2h，抽濾，重復2次。脫脂后的粉末再加入100mL70%乙醇分別置于電熱恒溫水浴鍋于60℃條件下提取12h，提取液冷卻至室溫，抽濾后，真空冷凍干燥備用。

1．2．2黃酮類化合物含量的測定

精確稱取120℃干燥至恒重的蘆丁標準品20mg，置于100mL容量瓶中，加70%乙醇溶解，稀釋至刻度，即得0．2mg/mL的蘆丁標準溶液。參照遲恩忠等［7］的方法:準確吸取0．0mL、0．5mL、1．0mL、1．5mL、2．0mL、2．5mL、3．0mL分別置于25mL具塞試管中，加入1．5%AlCl38mL和醋酸－醋酸鈉的緩沖液(pH5．5)4mL，并用70%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置0．5h。以0號管作參比，在波長415nm處測定各溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，建立回歸方程。準確稱取黃酮類化合物的粗提物100mg，用70%乙醇配制成濃度為0．2mg/mL樣品液。通過上述方法測定樣品液的吸光值，由回歸方程計算出粗提物中黃酮類化合物的含量。

1．2．3黃酮類化合物抗氧化活性的測定

精確稱取黃酮類化合物樣品，先利用70%的乙醇配制成質量濃度為5mg/mL黃酮類化合物溶液，根據需要再利用70%稀釋成不同濃度的樣品液。參照繆成貴等［8］的實驗方法進行DPPH自由基清除率測定;參照李正鵬等［9］的實驗方法進行羥自由基清除率測定;參照吳雪輝等［10］的實驗方法進行亞硝酸鹽清除率測定;采用鄰苯三酚法［11］進行超氧陰離子自由基的清除率測定。所有實驗測定均采用與樣品相同濃度的抗壞血酸(VC)作陽性對照，并進行三次重復實驗。

2結果與分析

2．1綿地花菌黃酮類化合物對DPPH•的清除作用

對二苯代苦味酰基自由基(DPPH•)的清除率的測定，是最常用的檢測樣品抗氧化能力的方法之一。綿地花菌黃酮類化合物對DPPH•的清除率如圖1所示。在設定的濃度范圍內，隨著黃酮類化物及VC溶液濃度的增大，其對DPPH•的清除率也逐漸提高。在濃度達到0．25mg/mL時，兩者對DPPH•的清除率分別為77．52%和89．07%。表明兩者對DPPH•都有較高的清除效率。但綿地花菌黃酮類化合物對DP-PH•的清除率要小于同等濃度的VC溶液。

2．2綿地花菌黃酮類化合物對羥基自由基的清除作用

對羥基自由基的清除效率是反映物質抗氧化作用的重要指標。綿地花菌黃酮類化合物對羥自由基的清除率結果如圖2所示。在設定的濃度范圍內，綿地花菌黃酮類化合物和VC對隨著濃度的增加，在濃度為0．25mg/mL時，兩者對羥自由基的清除率分別達到38．93%和39．15%。方差分析表明在兩者濃度為0．25mg/mL時對羥自由基的清除率差異不顯著(P＜0．05)。

2．3綿地花菌黃酮類化合物對亞硝酸鹽的清除作用

亞硝酸鹽類物質在人體內積累，可能會導致基因突變等嚴重危害人體健康的情況發生。對亞硝酸鹽的清除能力，也是反映物質抗氧化活性強弱的重要指標之一。綿地花菌黃酮類化合物對亞硝酸鹽的清除率如圖3所示。隨著樣品濃度的增加，其對亞硝酸鹽清除率也相應增加。在濃度為0．25mg/mL時清除率達到58．69%。方差分析表明此濃度下綿地花菌黃酮類化合物與VC對亞硝酸的清除率之間差異不顯著(P＜0．05)。

2．4綿地花菌黃酮類化合物對超氧陰離子的清除作用

超氧陰離子會對細胞產生嚴重的毒害，檢測清除超氧陰離子的能力是測定物質抗氧化活性的重要指標之一。綿地花菌黃酮類化合物對超氧陰離子的清除結果如圖4所示。隨著樣品濃度增加，綿地花菌黃酮類化合物和VC對超氧陰離子的清除率呈現明顯的量效關系，當濃度為0．25mg/mL時清除率分別為60．64%和58．5%。方差分析表明此濃度下綿地花菌黃酮類化合物與VC對超氧陰離子的清除率之間差異不顯著(P＜0．05)。

3結論與討論

眾多人類疾病如癌癥、糖尿病、心血管疾病等都與體內自由基過剩有關，抗氧化物質能夠通過清除體內過多的自由基從而保護機體的健康。人工合成的抗氧化劑如叔丁基對甲酚、特丁基對苯二酚等能夠清除體內過多的有害自由基，但同時會產生毒副作用導致機體發生病變，所以從自然界中尋找植物和真菌天然抗氧化物質成為人們關注的焦點。謝學明等［12］的研究證實華南忍冬的乙醇提取物對DPPH•有很強的抗氧化活性;徐望龍等［13］的研究表明山銀花黃酮類化合物具有顯著的抗氧化損傷及恢復細胞活性作用。中國真菌資源十分豐富，其中食藥用真菌多達1400余種，其提取物中的成分是天然安全抗氧化劑的主要來源之一。謝宗波等［14］研究表明菌核側耳黃酮具有較強的清除自由基的能力。綿地花菌是食用菌中最不易保鮮貯藏的一類真菌，采后的后熟作用非常強烈，目前的利用主要是曬干食用，人們對其活性成分研究報道還較少。本研究通過化學模擬法探討綿地花菌黃酮類化合物的體外抗氧化能力，結果表明其對DPPH•、羥自由基、亞硝酸鹽、超氧陰離子均具有較強的清除能力，且作用效果部分與陽性對照物VC相當，說明綿地花菌黃酮類化合物具有較強的體外抗氧化活性，可以作為天然抗氧化劑，值得進一步的深入研究與開發。

參考文獻:

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［3］陸曉民，劉良燕，李正輝，等．綿地花菌(Albatrellusovinus)中的grifolin及其衍生物［J］．天然產物研究與開發，2013，25(5):617－619．

［4］李正鵬，尚耘，向麗，等．兩種地花菌子實體水提物抗氧化活性的研究［J］．食品工業科技，2014，35(24):104－106，112．

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［7］遲恩忠，王麗，杜傳來，等．藍莓花黃酮飲料的配方優化［J］．安徽科技學院學報，2015，29(6):101－106．

［8］繆成貴，陳慶榆，何華奇．采用DPPH法測定四大藥用名菊抗氧化活性［J］．安徽科技學院學報，2012，26(4):39－42．

［9］李正鵬，吳萍，吳蘇青．樹舌胞內多糖抗氧化活性的研究［J］．食品工業科技，2010，31(6):108－110．

［10］吳雪輝，張喜梅，李廷群，等．板栗花粗提物的抗氧化活性研究［J］．現代食品科技，2008，24(1):14－16，19．

［12］謝學明，鐘遠聲，李熙燦，等．22種華南地產藥材的抗氧化活性研究［J］．中藥藥理與臨床，2006，22(1):48－50．

［13］徐望龍，李云貴，孫林軍，等．山銀花黃酮粗提物抗氧化活性的體外觀察［J］．中成藥，2014，36(6):1292－1294．

［14］謝宗波，陳赟，樂長高．菌核側耳黃酮的超聲法提取及體外抗氧化性能［J］．東華理工大學學報:自然科學版，2013，36(3):332－335．

作者:魏清 李正鵬 單位:皖西衛生職業學院 安徽科技學院