土壤養分對雙酯型生物堿的影響范文

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《湖北農業科學雜志》2014年第十一期

1試驗方法

1.1色譜條件AgilentZorbaxExtend-C18（250mm×416mm，5μm）色譜柱，柱溫25℃，檢測波長240nm，流動相為A和B兩相梯度洗脫［A：乙腈；B：40mmol/L乙酸銨緩沖液（氨水調pH10.0）；洗脫程序：0～10min，A為28%；10～15min，A為28%～33%；15～45min，A為33%～50%；45～60min，A為50%］，流速為1.0mL/min。進樣量為20μL。

1.2標準曲線的制備準確吸取0.51mg/mL次烏頭堿、0.38mg/mL烏頭堿、0.45mg/mL中烏頭堿各1mL的混合標品溶液分別進樣2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，平行進樣3次，記錄峰面積。以平均峰面積（y，mAu）為縱坐標，質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標，進行線性回歸。各物質的回歸方程、相關系數和線性范圍見表2。

1.3總生物堿生物堿含量的測定采用酸性染料比色法。

1.4土壤理化性質的測定土壤肥力指標的測定參考《土壤分析技術規范》，其中土壤有機質采用油浴加熱重鉻酸鉀氧化—容量法；土壤全氮采用凱氏定氮法；速效磷采用碳酸氫鈉浸提—鉬銻抗比色法；土壤速效鉀采用原子吸收分光光度法。

2結果與分析

2.1精密度試驗將“1.2.2”中的含適宜濃度的生物堿對照品溶液，按“1.2.1”中色譜條件連續平行進樣5次，記錄各次的峰面積，并計算其RSD值。結果顯示，中烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿的RSD值分別為0.61%、0.21%、0.74%、。

2.2穩定性試驗取同一附子生藥材供試品溶液，室溫放置0、2、4、6、8、10、12、24、36h后，按“1.2.1”中色譜條件平行進樣3次，記錄各次峰面積，計算各自的生物堿含量。結果顯示，中烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿在不同時間量的RSD值分別為0.76%、0.84%、0.93%。

2.3重復性試驗稱取附子生藥材細粉共5份，每份約2g，按樣品制備方法制備供試品溶液，按“1.2.1”中色譜條件測平行樣3次，記錄各次峰面積，計算3種單酯型生物堿的含量，結果顯示中烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿質量分數的RSD值分別為0.48%、0.36%、0.45%。

2.4加樣回收率試驗稱取附子干燥細粉末共15份，每份1g，每5份用于一種生物堿的回收率的測定，一共3組。每一組樣品分別加入相同對照品溶液適量，按樣品制備方法進行供試品溶液的制備和色譜分析。根據測得量和加入量計算其回收率。計算結果表明，中烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿平均加樣回收率（n=5）分別為99.1%、99.4%、99.0%；RSD值分別為1.21%、1.41%、1.17%。

2.5不同產地附子中6種生物堿含量的比較不同產地的附子雙酯型生物堿及總堿含量的分析結果見表3。由表3可知，不同栽培區附子的雙酯型生物堿以及總堿含量差異明顯。其中就總堿含量比較，006號四川江油種源總堿含量明顯高于其他5個栽培區總堿含量，這與附子道地產區質量較高的結論相符合；就雙酯型生物堿含量比較而言，3種雙酯型生物堿含量總和從631.66μg/g到1156.80μg/g，平均931.13μg/g，四川布拖、四川北川以及四川江油（001、005、006）種源明顯高于陜西勉縣、陜西城固以及云南布拖（002、003、004）3種種源。這可能與各栽培區的自然環境、土壤條件以及栽種水平等多種因素有關。

2.6不同栽培區土壤養分含量的比較不同栽培區土壤養分的含量見表4。由表4可知，附子不同栽培區土壤理化性質進行分析發現，不同栽培區土壤有機質、全氮、速效磷、速效鉀均存在明顯差異。其中四川布拖以及四川江油（001和006）的全氮以及有機質含量明顯高于其他4個栽培區；陜西城固、勉縣以及云南祿勸3個栽培區土壤養分含量較低，而四川北川、江油、布拖栽培區土壤肥力狀況較好，速效磷和速效鉀的含量明顯高于陜西城固、勉縣以及云南祿勸3個栽培區。這一結果與四川地區的附子產品質量高于陜西以及云南地區產品的現象相一致。但是附子生長以及成分積累不僅與土壤條件有關，遺傳、環境以及栽種方式等因素都與其有密切關聯。

2.7土壤養分與附子中雙酯型生物堿和總堿的相關性土壤養分與附子中雙酯型生物堿和總堿相關性系數見表5。由表5可知，將不同栽培區附子中雙酯型生物堿及總量與相應土壤理化性質進行相關性分析，中烏頭堿與速效鉀有顯著相關性，相關系數為0.888；烏頭堿與速效磷有極顯著相關性，與速效鉀有顯著相關性；次烏頭堿與速效鉀有顯著相關性，相關系數為0.813；雙酯型生物堿總量與速效磷、速效鉀有顯著相關性，相關系數分別為0.840、0.897。附子生物堿總堿與土壤中的速效磷有顯著相關性，且與中烏頭堿、次烏頭堿及雙酯型生物堿總量有顯著相關性；雙酯型生物堿總量與全氮以及pH無顯著相關性。次烏頭堿與中烏頭堿和烏頭堿均有顯著相關性。

3小結與討論

中藥材中的有效成分主要為植物次生代謝產物，生物堿是附子的生理活性物質，同時也是毒性物質。通過比較分析可以看出，不同栽培區的附子品種間雙酯型生物堿以及總堿含量差異明顯。四川江油、北川以及布拖3個栽培區附子的生物堿含量明顯高于陜西勉縣、城固以及云南祿勸3個栽培區。這與6個栽培區土壤養分含量的比較分析的結論基本一致。因此土壤因子對附子中生物堿的含量有明顯影響，但除了土壤條件外，附子中雙酯型生物堿含量的高低可能還與有機體的遺傳特性、植物生長的外界環境以及栽培方式等因素密切相關。眾所周知四川人工栽培附子的歷史悠久，四川江油地區附子的種植方式明顯較其他栽培區精細，因此建立附子最優化栽培方式，實現附子高產、高品質、高效益的栽培模式是附子研究領域內存在并亟待解決的問題。生物堿為附子的主要活性成分，是影響附子藥理作用的主要因素。土壤作為重要的生態因子對附子的質量有較大影響，其理化性質明顯影響附子中化學成分的含量。土壤的理化性質是土壤肥力的重要指標，研究其對附子生物堿含量的影響，對于建立附子最優化栽培方式具有重要的意義。

附子生長和有效成分積累除了受土壤條件影響外，氣象條件也可以直接影響植物的光合作用等生理活動，或通過改變土壤的理化性質來間接影響植物的生長發育和次生代謝物質的積累。由于土壤的固有性質較難改變，但可以通過追施不同比例的有機肥來提高藥材的質量以及產量。一般在生產上，常用氮、磷、鉀以及有機質等養分含量的多少來衡量土壤肥力的高低。四川江油、四川北川、四川布拖、云南祿勸、陜西勉縣、陜西城固6個栽培區土壤中有機質、全氮、速效磷、速效鉀含量存明顯差異。相關性分析表明不同栽培區附子中生物堿的含量與相應土壤的理化性質有一定的相關性。中烏頭堿與速效鉀有顯著相關性；烏頭堿與速效磷有極顯著相關性，與速效鉀有顯著相關性；雙酯型生物堿總量與速效磷有顯著相關性。

附子是植物烏頭的側根，而磷是植物根系生長的必要成分，土壤中磷的豐缺狀況以及供應強度直接影響著附子的生長發育、產量以及品質。土壤中速效磷含量低會影響附子根系生長，也會影響附子生物堿的積累。土壤中鉀的含量對于附子植株生長具有重要影響，附子中烏頭堿和次烏頭堿以及雙酯型生物堿總量均與速效鉀含量有極顯著相關性。在材料005和006中雙酯型生物堿的含量均較高，其相應土壤中速效磷和速效鉀含量亦高，這與相關性分析結果相一致。因此適當追施磷肥和鉀肥可有效提高附子中雙酯型生物堿的含量。附子生物堿含量與土壤有機質和pH無顯著相關性，這就暗示，土壤中適當的有機質以及pH可能有利于附子的生長，也有可能有利于附子產量的提高，但對附子中生物堿的含量沒有明顯影響。

作者：岳聰慧侯大斌匡青芬單位：西南科技大學生命科學與工程學院