嵩草屬牧草休眠期內(nèi)生細(xì)菌研究范文

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《草業(yè)學(xué)報(bào)》2016年第8期

摘要：

采用稀釋平板法從兩種嵩草屬牧草休眠期根和種子中分離到23株內(nèi)生細(xì)菌，測(cè)定了其抑菌、溶磷、固氮和產(chǎn)IAA等生物學(xué)功能，并通過16SrDNA基因序列分析進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，兩牧草根和種子中內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量和群落組成存在明顯差異；線葉嵩草內(nèi)生細(xì)菌的種類比矮生嵩草豐富；矮生嵩草根部?jī)?nèi)生細(xì)菌比種子中豐富，而線葉嵩草種子內(nèi)生細(xì)菌較根部豐富；種子存放時(shí)間影響內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量；20株可繼代培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌中具有抑菌、溶磷、固氮和產(chǎn)IAA生物功能的菌株分別占總菌株數(shù)的35％，55％，45％和25％。獲得15株內(nèi)生細(xì)菌的16SrDNA基因序列，經(jīng)同源性比較，其分別屬于芽孢桿菌屬、葉桿菌屬、葡萄球菌屬、類芽孢桿菌屬、微桿菌屬、原小單孢菌屬和鞘氨醇盒菌屬，且芽孢桿菌屬細(xì)菌為其優(yōu)勢(shì)種群。

關(guān)鍵詞：

嵩草屬；內(nèi)生細(xì)菌；鑒定；多樣性；生物功能

幾乎所有植物中都伴隨有內(nèi)生細(xì)菌［1－2］，其與宿主植物在長(zhǎng)期共同進(jìn)化過程中形成密切關(guān)系，是植物微生物生態(tài)系統(tǒng)的主要成員［3］。隨著植物內(nèi)生細(xì)菌研究的不斷深入，明確了其通過抑菌、溶磷和固氮等生物功能，增強(qiáng)了宿主植物的抗病性、抗旱性及生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力等［4－5］，成為近年來研究的熱點(diǎn)，特別是相關(guān)功能方面的研究報(bào)道較多。植物內(nèi)生細(xì)菌可分泌吲哚乙酸（IAA）［6－7］，促進(jìn)植物根的生長(zhǎng)及分布，有利于從土壤中吸收更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；內(nèi)生固氮菌生活在植物體內(nèi)，避免了化合態(tài)氮的抑制及土著微生物的競(jìng)爭(zhēng)，表現(xiàn)出更高的固氮效率［8－9］；楊成德等［10］也從內(nèi)生細(xì)菌中擴(kuò)增出了nifH基因片段。關(guān)于內(nèi)生細(xì)菌抑菌能力［11－17］和溶磷能力［7，11］方面的報(bào)道較多；另外，植物內(nèi)生細(xì)菌具有激活植物基本抗病性或誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗病性的潛力［18］，還可以提高植物抗重金屬鹽的能力［19］；所以，植物內(nèi)生細(xì)菌具有豐富的功能多樣性，是植物病害生物防治、內(nèi)生固氮菌篩選及抗病性誘導(dǎo)等功能的天然菌源，也是研究植物與微生物互作的良好材料，具有極高的理論研究?jī)r(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，也具有開發(fā)為微生物源農(nóng)藥或肥料的巨大潛力［20－21］。植物內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量和種類存在豐富多樣性［22－23］，且在不同宿主及不同器官的種類、數(shù)量、群落結(jié)構(gòu)和多樣性存在較大的差異［24－25］。矮生嵩草和線葉嵩草是高寒草地的多年生草本植物，草質(zhì)柔軟，抗逆性強(qiáng)，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，為高寒草地的優(yōu)良牧草。目前，關(guān)于高寒草地嵩草屬生長(zhǎng)期內(nèi)生細(xì)菌已有報(bào)道［6－7，15］，但是，有關(guān)休眠期種子及根系內(nèi)生細(xì)菌方面的研究未見報(bào)道。因此，為了明確休眠期內(nèi)生細(xì)菌的多樣性，本試驗(yàn)從2種嵩草屬牧草種子及根系中分離純化其內(nèi)生細(xì)菌，研究其種類及抑菌、溶磷和產(chǎn)IAA等功能，以期為明確2種嵩草屬牧草休眠期內(nèi)生細(xì)菌的多樣性提供依據(jù)，也為高寒草地特有植物內(nèi)生細(xì)菌的開發(fā)和利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1．1試驗(yàn)地概況

位于甘肅省天祝縣金強(qiáng)河甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)高寒草原試驗(yàn)站前金桿溝山麓兩側(cè)，北緯37°11′－37°18′、東經(jīng)102°23′－102°47′，海拔2900～3200m，年均溫－0．1℃，全年大于0℃年積溫1380℃；無絕對(duì)無霜期，冷季長(zhǎng)達(dá)7個(gè)月，植物生長(zhǎng)季為120～140d，年降水量416mm，多為地形雨，集中于7－9月；10月底至第2年4月為降雪期；年蒸發(fā)量1592mm；植被主要為草本植物。

1．2試驗(yàn)材料

供試內(nèi)生細(xì)菌：分離自2011年11月進(jìn)入休眠期的矮生嵩草和線葉嵩草的根系及2011年10月采集的種子，種子內(nèi)生細(xì)菌分離時(shí)間為2011年12月和2012年12月。供試病原菌：馬鈴薯枯萎病菌、馬鈴薯壞疽病菌和馬鈴薯炭疽病菌，均為甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室保存菌種。供試培養(yǎng)基：肉汁胨培養(yǎng)基（NA）用于內(nèi)生菌的活化和保存［26］；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）用于植物病原真菌的培養(yǎng)和對(duì)峙試驗(yàn)［26］；金氏（King）培養(yǎng)基用于菌株產(chǎn)IAA的測(cè)定；Pikovaskaia培養(yǎng)基（PKO）用于菌株溶解無機(jī)磷的測(cè)定；蒙金娜培養(yǎng)基用于測(cè)定菌株溶解有機(jī)磷的能力［27］；阿須貝無氮培養(yǎng)基用于固氮能力測(cè)定［28］。

1．3內(nèi)生細(xì)菌的分離

將牧草的根和種子表面消毒，即對(duì)根用水沖洗干凈后稱取1g，在無菌條件下依次用10％NaClO浸泡3min，0．1％升汞浸泡10min，處理間均用無菌水沖洗3～4次；稱取1g種子，計(jì)算粒數(shù)后消毒方法同根。取最后1次無菌水沖洗液0．2mL涂布NA培養(yǎng)基，檢驗(yàn)表面滅菌效果。將消毒后的材料置于無菌的盛有少量石英砂的研缽中磨碎（加入5mL生理鹽水），取上清液梯度稀釋到濃度為10－1～10－3，取3個(gè)稀釋度的菌懸液各0．2mL涂布于NA平板上，重復(fù)3次，置于28℃恒溫培養(yǎng)3～5d，根據(jù)菌落形態(tài)分類劃線純化，將純化后的菌種4℃保存于NA斜面上［29］。同時(shí)根據(jù)菌落數(shù)計(jì)算每g根和種子中的內(nèi)生細(xì)菌總數(shù)及每粒種子帶內(nèi)生細(xì)菌數(shù)，利用新復(fù)極差法進(jìn)行顯著性分析。

1．4內(nèi)生細(xì)菌的功能多樣性

1．4．1拮抗能力測(cè)定

采用平皿對(duì)峙法測(cè)定抑菌效果，即將經(jīng)PDA培養(yǎng)基上活化的病原真菌打成直徑6mm的菌餅接種于PDA培養(yǎng)基平板中央，再將活化后的內(nèi)生細(xì)菌點(diǎn)接于距菌餅2．5cm處，每平板接4點(diǎn)，以點(diǎn)接無菌水為對(duì)照，重復(fù)3次，置25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，對(duì)照滿皿后測(cè)量抑菌圈（cm）并計(jì)算抑菌率［9－10］。

1．4．2溶磷能力測(cè)定

將內(nèi)生細(xì)菌接于Pikovaskaia培養(yǎng)基（PKO）或蒙金娜培養(yǎng)基平板上，每皿接5點(diǎn)，重復(fù)3次，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察并測(cè)量菌株在培養(yǎng)基平板上形成的溶磷圈大小。根據(jù)溶磷圈直徑／菌落直徑（D／d值）確定內(nèi)生細(xì)菌的溶磷能力［9－10］。

1．4．3固氮能力測(cè)定

經(jīng)活化的供試菌株用無菌生理鹽水配制菌懸液，以200μL分別接種于阿須貝無氮平板（涂布）和液體培養(yǎng)基內(nèi)，3次重復(fù)，以接種無菌水為對(duì)照，28℃培養(yǎng)（液體振蕩120r／min），在第3和7天目測(cè)其生長(zhǎng)狀況，平板上有菌落和三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基變渾濁者為陽性［30］。

1．4．4產(chǎn)生IAA能力測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線采用純3－IAA制作。將經(jīng)King培養(yǎng)液培養(yǎng)12d的菌懸浮液和空白對(duì)照離心（4℃，10000r／min，10min），取上清液4mL加等量比色液，在黑暗中靜置30min，立即測(cè)定OD530值，重復(fù)測(cè)3次，以加比色液的空白對(duì)照調(diào)零。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出內(nèi)生細(xì)菌分泌IAA的量［30］。

1．516SrDNA基因序列分析鑒定

內(nèi)生細(xì)菌16SrDNA基因序列擴(kuò)增引物序列為：引物1：5′－CCGGATCCAGAGTTTGATCATGGCTCAGCA－3′，引物2：5′－CGGGATCCTACGGCTACCTTGTTACGACTT－3′，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成；擴(kuò)增和檢測(cè)方法等具體參考文獻(xiàn)［9］進(jìn)行，與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)（http：／／www．ncbi．nlm．nih－gov／blast．cgi）中序列相似性比較，并用Clustal（1．8）軟件進(jìn)行多重序列比較和用Mega（4．0）軟件鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定其系統(tǒng)發(fā)育學(xué)地位。

2結(jié)果與分析

2．1內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量多樣性休眠期根內(nèi)生細(xì)菌分離結(jié)果表明，矮生嵩草2011年根中內(nèi)生細(xì)菌有3個(gè)種類，分別命名為ASG1、ASG2和ASG3，內(nèi)生細(xì)菌總數(shù)為3．5×105cfu／g；線葉嵩草2011年休眠期根內(nèi)分離到5種內(nèi)生細(xì)菌，分別命名為XSG1、XSG2、XSG3、XSG4和XSG5，多于矮生嵩草，但內(nèi)生細(xì)菌數(shù)為0．5×105cfu／g（表1），顯著低于矮生嵩草（P＜0．05）。矮生嵩草種子中2011年共分離到4種類型，分別命名為ASZ1、ASZ2、ASZ3和ASZ4，內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量為1．44×105cfu／g，低于根內(nèi)，每粒種子帶菌數(shù)為1．12×102cfu／粒；2012年種子中內(nèi)生細(xì)菌分離到3個(gè)種類，分別命名為2ASZ1、2ASZ2和2ASZ3，內(nèi)生細(xì)菌總數(shù)為0．13×105cfu／g，每粒種子帶菌數(shù)為0．38×102cfu／粒（表1），顯著低于2011年（P＜0．05）。線葉嵩草種子中2011年分離得到4個(gè)種類，分別命名為XSZ2、XSZ2′、XSZ3和XSZ4，內(nèi)生細(xì)菌數(shù)為22．27×105cfu／g，顯著高于根內(nèi)數(shù)量，也顯著高于矮生嵩草（P＜0．05），每粒種子帶菌數(shù)為19．39×102cfu／粒；2012年種子分離得到4個(gè)種類，與2011年沒有變化，分別命名為2XSZ1、2XSZ2、2XSZ3和2XSZ4，內(nèi)生細(xì)菌數(shù)為2．14×105cfu／g，每粒種子帶菌數(shù)為2．37×102cfu／粒（表1），顯著低于2011年，但顯著高于矮生嵩草（P＜0．05）。

2．2內(nèi)生細(xì)菌功能多樣性

在所分離得到的23株內(nèi)生細(xì)菌中，有20株可以進(jìn)行繼代培養(yǎng)，并對(duì)其進(jìn)行了抑菌、溶磷、固氮和產(chǎn)IAA功能測(cè)定。抑菌能力測(cè)定結(jié)果表明（表2），對(duì)馬鈴薯枯萎病菌、馬鈴薯壞疽病菌和馬鈴薯炭疽病菌有拮抗能力的菌株所占比例分別為35％，25％和30％；對(duì)馬鈴薯枯萎病菌和馬鈴薯壞疽病抑菌能力最好的菌株均為XSG4，抑菌率分別為70．93％和75．00％，對(duì)馬鈴薯炭疽病菌拮抗能力最好的菌株為2XSZ4，抑菌率為79．36％，且拮抗菌株對(duì)其抑菌效果較其他2種病原菌好，抑菌率多在70％以上；對(duì)3種病原菌均有拮抗作用的內(nèi)生細(xì)菌分別為XSG4、ASZ4、2XSZ3、2XSZ4和2ASZ2，占總菌株的25％，特別是XSG4對(duì)3種病原真菌的抑菌率均在70％以上，表現(xiàn)出良好的抑菌活性。對(duì)內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行溶磷、固氮和產(chǎn)IAA能力測(cè)定結(jié)果表明（表3），有9個(gè)菌株具有固氮能力，占總菌株的45％；5個(gè)菌株具有溶解有機(jī)磷的能力，占總菌株的25％，10個(gè)菌株具有溶解無機(jī)磷的能力，占總菌株的50％，XSZ2、XSZ2′、ASZ1、XSG1和XSG4同時(shí)具有溶解有機(jī)磷和無機(jī)磷的能力，占總菌株的25％，特別是XSZ2′對(duì)兩種磷溶解能力較強(qiáng)，XSZ3、ASZ2、ASZ4、ASG3、XSG2和XSG3具有溶解無機(jī)磷的能力，且溶磷能力較強(qiáng)；5株菌在含或不含色氨酸的培養(yǎng)基上均可分泌IAA，占總菌株的25％，其中ASZ2在含色氨酸的培養(yǎng)基上分泌IAA的量達(dá)4．52mg／L。

2．3內(nèi)生細(xì)菌種類多樣性

20株可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌中有15株成功提取其基因組DNA并擴(kuò)增出16SrDNA序列。經(jīng)16SrDNA序列相似性分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育分析（圖1），表明2種嵩草屬牧草分離到的內(nèi)生細(xì)菌屬于7個(gè)屬8個(gè)種，且2XSZ2，2ASZ3和2XSZ4屬于芽孢桿菌屬，但種的分類地位有待于進(jìn)一步研究，XSZ4和2ASZ1在屬水平的分類地位待定。7個(gè)屬分別為芽孢桿菌屬、葉桿菌屬、葡萄球菌屬、類芽孢桿菌屬、微桿菌屬、原小單孢菌屬和鞘氨醇盒菌屬，其中線葉嵩草中分離到5種，牧草內(nèi)生細(xì)菌種類豐富，具有豐富的遺傳多樣性，但在不同牧草或器官種類有差別。在上述15個(gè)內(nèi)生細(xì)菌中，6株屬于芽孢桿菌屬細(xì)菌，說明芽孢桿菌屬細(xì)菌為2種牧草內(nèi)生細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌群。

3討論與結(jié)論

植物內(nèi)生菌的生境特殊性決定了其既有理論研究的廣度和深度，又有廣泛的應(yīng)用潛力，是潛力巨大且尚待開發(fā)的微生物新資源。本文首次研究了線葉嵩草和矮生嵩草休眠期內(nèi)生細(xì)菌在不同部位的多樣性，矮生嵩草2011年根中內(nèi)生細(xì)菌總數(shù)為3．5×105cfu／g，種子中內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量為1．44×105cfu／g；線葉嵩草2011年休眠期根中內(nèi)生細(xì)菌總數(shù)為0．5×105cfu／g，明顯低于矮生嵩草，種子中內(nèi)生細(xì)菌數(shù)為22．27×105cfu／g，多于矮生嵩草，說明矮生嵩草根部比種子中內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量多，而線葉嵩草種子中內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量較根部多。Gagne等［31］曾認(rèn)為由于大多內(nèi)生細(xì)菌來源于根際土壤，所以根部的內(nèi)生細(xì)菌含量最高，本研究中矮生嵩草與其觀點(diǎn)一致，但是線葉嵩草種子內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量比根部數(shù)量多，這可能與牧草種類及不同器官存在差異有關(guān)［24－25］。另外，矮生嵩草2012年種子中內(nèi)生細(xì)菌數(shù)為0．134×105cfu／g，線葉嵩草2012年種子內(nèi)生細(xì)菌數(shù)為2．14×105cfu／g，2種牧草種子內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量均顯著低于2011年，說明種子存放時(shí)間影響其內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量。植物為內(nèi)生細(xì)菌提供相對(duì)穩(wěn)定的生存環(huán)境，而內(nèi)生細(xì)菌可以通過抑菌、固氮、溶磷和產(chǎn)IAA等方式促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。因此，利用內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行生物防治或作為生物肥料，較其他微生物制劑有顯著的優(yōu)勢(shì)。本研究表明，嵩草屬牧草內(nèi)生細(xì)菌存在著抗馬鈴薯壞疽病、馬鈴薯枯萎病和馬鈴薯炭疽病3種病原真菌的抗菌資源，可用于馬鈴薯貯藏期病害防治的潛力。牧草中還存在溶磷、固氮和產(chǎn)IAA的內(nèi)生細(xì)菌，這些菌株可能對(duì)牧草獲得營(yíng)養(yǎng)及抗逆方面具有重要的生物功能，且XSG4同時(shí)具有抑菌、溶磷、產(chǎn)IAA和固氮4種能力，ASZ4具有抑菌、產(chǎn)IAA和溶磷3種能力，ASZ2具有固氮、產(chǎn)IAA和溶磷3種能力，另外，有8株菌同時(shí)具有2種生物功能，這一結(jié)果表明內(nèi)生細(xì)菌具有豐富的生物功能多樣性，也在生產(chǎn)中具有開發(fā)為微生物肥料或農(nóng)藥的潛力。本試驗(yàn)中多功能內(nèi)生細(xì)菌XSG4和ASZ4屬于類芽孢桿菌屬的多粘類芽孢桿菌，ASZ2屬于芽孢桿菌屬，這兩個(gè)屬均為目前報(bào)道較多的內(nèi)生細(xì)菌，且具有多種可利用的生物特性。如胡飛等［32］報(bào)道的多粘類芽胞桿菌DN－1對(duì)水稻紋枯病有較好防治效果；陳雪麗等［33］報(bào)道了多粘類芽孢桿菌BRF－1和枯草芽孢桿菌BRF－2菌懸液及其無菌代謝物不僅對(duì)黃瓜和番茄枯萎病具有較好的防治效果，且具有明顯的促進(jìn)生長(zhǎng)作用；郭芳芳等［34］報(bào)道的多粘類芽孢桿菌對(duì)番茄猝倒病具有較好的防治效果。本研究結(jié)果與其一致。

本研究首次對(duì)2種嵩草屬牧草休眠期內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行了16SrDNA序列分析，結(jié)果表明，高寒草地內(nèi)生細(xì)菌在不同的植物間存在差異，在同種植物的不同部位也存在差異。線葉嵩草分離到5種內(nèi)生細(xì)菌，矮生嵩草分離到6種，線葉嵩草根部分離得到的內(nèi)生細(xì)菌與矮生嵩草根部分離到的種不同，但是兩牧草種子中分離到的內(nèi)生細(xì)菌有兩種是相同的。2種牧草的內(nèi)生細(xì)菌分為7個(gè)屬8個(gè)種說明嵩草屬牧草內(nèi)生細(xì)菌具有豐富的多樣性，且芽孢桿菌屬細(xì)菌是2種牧草內(nèi)生細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)菌群，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［14，17，22－23］，這可能與芽孢桿菌屬細(xì)菌抗逆性強(qiáng)有關(guān)；另外，內(nèi)生細(xì)菌中有3個(gè)菌株在種水平及2個(gè)菌株在屬水平的分類地位需進(jìn)一步研究，說明該生境牧草內(nèi)生細(xì)菌中有新的微生物種類。本研究中內(nèi)生細(xì)菌所屬的7個(gè)屬中，只有芽孢桿菌是常見的內(nèi)生細(xì)菌優(yōu)勢(shì)種群，其他6個(gè)屬均為不常見屬，這可能與本試驗(yàn)大多數(shù)菌株分離自高寒草地休眠期牧草根系和種子有關(guān)。本研究?jī)H利用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法進(jìn)行內(nèi)生細(xì)菌的培養(yǎng)，但許多研究已證實(shí)通過傳統(tǒng)的分離方法鑒定的微生物只占環(huán)境微生物總數(shù)的0．1％～10％［23］，不能充分展示微生物的多樣性狀況，且一部分植物內(nèi)生細(xì)菌由于人工環(huán)境不適宜而不能進(jìn)行繼代培養(yǎng)。因此，為了更全面地了解牧草內(nèi)生細(xì)菌多樣性的真實(shí)水平及其物種組成，有必要利用非培養(yǎng)方法對(duì)其組織內(nèi)未培養(yǎng)微生物進(jìn)行研究。另外，本試驗(yàn)僅利用16SrDNA序列分析方法對(duì)內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行了鑒定，還需利用生理生化試驗(yàn)及（G＋C）％等進(jìn)一步鑒定。

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［7］姚玉玲，王穎，王玉琴，等．矮生嵩草內(nèi)生細(xì)菌溶磷、抑菌和產(chǎn)IAA能力的測(cè)定及鑒定．草地學(xué)報(bào)，2014，22（6）：1252－1257．

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［10］楊成德，李振東，陳秀蓉，等．高寒草地珠芽蓼內(nèi)生拮抗固氮菌Z19的鑒定及其固氮功能研究．微生物學(xué)通報(bào)，2014，41（2）：267－273．

［13］王玉琴，楊成德，王穎，等．針茅內(nèi)生細(xì)菌菌株265ZY4的鑒定及其生物學(xué)功能．微生物學(xué)通報(bào)，2015，42（1）：101－109．

［14］楊成德，王穎，王玉琴，等．東祁連山高寒草地幾株醉馬草內(nèi)生細(xì)菌的生物功能評(píng)價(jià)及鑒定．草業(yè)學(xué)報(bào)，2014，23（5）：249－255．

［15］王穎，王玉琴，楊成德，等．馬鈴薯貯藏期主要病害拮抗內(nèi)生細(xì)菌的篩選、鑒定及功能評(píng)價(jià)．草業(yè)學(xué)報(bào)，2014，23（3）：269－275．

［16］暢濤，王涵琦，楊成德，等．高寒草地禾草內(nèi)生細(xì)菌B－401的鑒定及生物防治潛力評(píng)價(jià)．草業(yè)學(xué)報(bào)，2014，23（3）：282－289．

［17］代金霞，王玉炯．寧夏荒漠草原小葉錦雞兒可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌多樣性及其分布特征．生態(tài)學(xué)報(bào)，2012，32（20）：6300－6307．

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［22］張雪兵，史應(yīng)武，曾軍，等．醉馬草免培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌的多樣性．生態(tài)學(xué)報(bào)，2011，31（8）：2178－2187．

［23］陳澤斌，夏振遠(yuǎn)，雷麗萍，等．煙草可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌的分離及多樣性分析．微生物學(xué)通報(bào)，2011，38（9）：1347－1354．

［24］藍(lán)江林，劉波，朱育菁，等．茄子植物內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)與多樣性．生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào)，2009，18（4）：1433－1442．

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作者:楊成德 王玉琴 陳秀蓉 張振粉 薛莉 王穎 姚玉玲 單位:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院