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自我國(guó)首個(gè)國(guó)產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉晉棉26號(hào)于1998年在山西省誕生以來[1],山西省的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉生產(chǎn)發(fā)展得到了較快發(fā)展。迄今為止,全省已全部種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉,抗蟲棉品種主要來源于自育(自審)和外引(引種),品種類型主要為常規(guī)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉,雜交抗蟲棉僅有少量種植。本研究對(duì)山西省棉花區(qū)試參試品種的抗蟲特性等主要性狀進(jìn)行了多年的跟蹤調(diào)查,并對(duì)調(diào)查結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)分析,為山西乃至全國(guó)的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的安全發(fā)展提供一定的科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。
1試驗(yàn)材料材料來源于2003-2010年共8年間的山西省棉花區(qū)試,包括了我國(guó)山西、河北、山東、河南、四川、江蘇等各省科研單位或種子公司提供的自育或引種材料。本試驗(yàn)每年從山西省區(qū)試參試材料中隨機(jī)取樣200g后播種于山西農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行試驗(yàn)。
2檢測(cè)內(nèi)容
2.1連鎖標(biāo)記基因抗性檢測(cè)棉花蕾期用5mmol•L-1卡那霉素水溶液涂抹頂部嫩葉,檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉中與抗蟲基因連鎖的標(biāo)記基因(NPTII)的表達(dá)狀況[2]。
2.2材料抗蟲性檢測(cè)供試棉鈴蟲為購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所植保室室內(nèi)飼養(yǎng)的初孵幼蟲。在棉花蕾期至初花期,每個(gè)材料選取上述標(biāo)記基因檢測(cè)為陽(yáng)性的植株10株,每株取1片頂部剛展開的嫩葉,置于玻璃指形管內(nèi),每片葉接種棉鈴蟲1齡幼蟲3頭,4d后觀察葉片被取食情況、幼蟲存活與否及其蟲體大小,用以評(píng)判轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗棉鈴蟲性能[2]。棉鈴蟲取食葉片情況分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):“1+”表示棉鈴蟲取食葉片很少,損傷為很少的小孔,表明抗棉鈴蟲效果很好;“2+”表示棉鈴蟲取食葉片較上略多,損傷為稍多小孔,表明抗棉鈴蟲效果較好;“3+”及更多的“+”表示棉鈴蟲取食葉片較前更多,損傷為更多小孔或成片,表明抗棉鈴蟲效果較差。各級(jí)檢測(cè)值計(jì)算方法:單個(gè)參試材料檢測(cè)抗蟲株數(shù)為1+、2+的材料數(shù)除以該參試材料檢測(cè)總數(shù)。
2.3新病害檢測(cè)棉花萎蔫綜合癥(簡(jiǎn)稱“萎蔫癥”)是近年來發(fā)生的新病害[3],在棉花生長(zhǎng)中期調(diào)查其發(fā)生情況,并在收獲時(shí)單獨(dú)采摘以統(tǒng)計(jì)其對(duì)產(chǎn)量造成的損失。
2.4產(chǎn)量性狀檢測(cè)收獲期取樣調(diào)查棉花鈴重、衣分等產(chǎn)量性狀以及纖維品質(zhì)性狀。全株采收計(jì)產(chǎn)。
3結(jié)果分析
3.1轉(zhuǎn)基因抗蟲棉標(biāo)記基因(NPTII)檢測(cè)參試棉花品系的標(biāo)記基因檢測(cè)結(jié)果表明,被檢測(cè)材料NPTII陽(yáng)性反應(yīng)株率達(dá)80%~100%的材料數(shù)占參試材料的百分率由2003年的33.33%逐漸上升到2010年的91.24%,其中2006-2009年升幅度較大,從47.61%上升到78.26%(表1)。NPTII陽(yáng)性反應(yīng)株率達(dá)100%的材料數(shù)占參試材料的百分率更是由2003年的5.56%逐漸上升到2010年的54.29%。說明2003年轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的標(biāo)記基因表達(dá)較低,純合度不高,而近年來被檢測(cè)材料標(biāo)記基因純合度越來越高。
3.2轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的棉鈴蟲抗蟲性檢測(cè)抗棉鈴蟲檢測(cè)結(jié)果表明:棉鈴蟲取食葉片等級(jí)1+和2+(即抗蟲很好與抗蟲較好的全部抗蟲材料)的檢測(cè)值≥50%的材料比例由2003年的94.44%逐年下降到2010年的62.86%,其中2008年只有40.91%;1+和2+的檢測(cè)值80%~100%的材料比例也由55.56%下降到22.86%,其中2009年只有8.70%;1+和2+的檢測(cè)值能達(dá)到100%的由2003年的22.22%下降到2010年的5.71%,其中2008年、2009年檢測(cè)值為0(表2)。
3.3棉鈴蟲存活率檢測(cè)對(duì)參試材料的棉鈴蟲存活率檢測(cè)結(jié)果可知,喂飼4d時(shí)棉鈴蟲在其上存活的株率≥70%的材料數(shù)所占比例由2004年的6.8%上升到2010年的62.5%;而無蟲株材料比例在2003年為27.77%,之后不斷下降,2007年后則一直為0(表3)。這說明參試材料抗棉鈴蟲綜合效果是在由較高水平逐年向較低水平發(fā)展。在檢測(cè)參試材料的同時(shí),另取部分大田生產(chǎn)主栽品種進(jìn)行檢測(cè),其檢測(cè)結(jié)果與參試材料趨勢(shì)基本相同。
3.4轉(zhuǎn)基因抗蟲棉新病害檢測(cè)及其對(duì)產(chǎn)量影響近年來,一種新病害即棉花萎蔫綜合癥在轉(zhuǎn)基因抗蟲棉田發(fā)生。發(fā)生萎蔫癥的棉株棉鈴發(fā)育遲緩,內(nèi)容物淀積極不正常,吐絮不暢,棉花產(chǎn)量受嚴(yán)重影響。2010年調(diào)查的40個(gè)材料中,發(fā)病材料有31個(gè),發(fā)生萎蔫癥的材料占參試材料的77.5%;萎蔫癥發(fā)病株率為2.6%~68.6%。當(dāng)萎蔫癥發(fā)病株率10%~20%時(shí),皮棉減產(chǎn)37.42%~27.84%,但也有33.3%的材料增產(chǎn)(產(chǎn)量形成是多種因素,少部分材料發(fā)病卻增產(chǎn),可能與品種本身生產(chǎn)能力強(qiáng)有關(guān));當(dāng)萎蔫癥發(fā)病株率在30%~70%時(shí),所有材料都減產(chǎn),減產(chǎn)比例達(dá)39.20%~71.71%,呈現(xiàn)發(fā)病株率越高減產(chǎn)比例越大的趨勢(shì)(表4)。3.5轉(zhuǎn)基因抗蟲棉產(chǎn)量性狀分析對(duì)山西省多年區(qū)試抗蟲棉產(chǎn)量結(jié)果分析表明,在2004-2010年,參試轉(zhuǎn)基因抗蟲棉材料的平均產(chǎn)量逐年升高(圖1),最高值2004年為1218kg•hm-2,2005年為2054kg•hm-2,2009年達(dá)2574kg•hm-2,2010年最高值為2395kg•hm-2。從參試材料看,常規(guī)轉(zhuǎn)基因棉花產(chǎn)量已維持在較高水平。近年也有少量雜交轉(zhuǎn)基因抗蟲棉參加區(qū)試,與常規(guī)抗蟲棉相比,增產(chǎn)幅度并不是很大。參試材料平均鈴重:2004-2010年為4.0~7.0g(圖2),2010年極值達(dá)7.5g。但是衣分變化幅度不大,不同參試材料的衣分保持在35%~40%。
4討論
2003年以來的山西省棉花區(qū)試參試材料考察結(jié)果說明:首先,在山西省參加區(qū)試的材料中,來自外省的材料經(jīng)常占到1/3左右,因此,本文的結(jié)果在一定程度上應(yīng)能反映北方棉區(qū)的現(xiàn)狀。其次,我國(guó)棉花產(chǎn)量已維持在較高水平,國(guó)產(chǎn)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉研發(fā)速度很快,棉花產(chǎn)量水平提高幅度較大。另外,抗蟲棉品種的萎蔫綜合癥發(fā)生嚴(yán)重,如何預(yù)防這一病害的發(fā)生仍需深入研究。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,轉(zhuǎn)基因棉花攜帶的標(biāo)記基因純合度提高較快,但由于對(duì)攜帶的抗棉鈴蟲目的基因選擇壓力嚴(yán)重不夠,導(dǎo)致抗蟲棉的抗蟲能力呈下降趨勢(shì)。因此,對(duì)于轉(zhuǎn)基因抗蟲棉新品種選育,除了以抗性標(biāo)記基因作為田間選育抗蟲棉方法外,更應(yīng)注重提高抗蟲基因的選育水平,二者緊密結(jié)合,以保證選育抗蟲棉抗蟲性水平的穩(wěn)定,從而避免以標(biāo)記基因作為抗蟲棉選育依據(jù)造成抗蟲棉抗性的下降。此外,新的復(fù)合性狀轉(zhuǎn)基因棉花是轉(zhuǎn)基因棉花育種的發(fā)展趨勢(shì)[4],在這一背景下,需不斷挖掘新的抗主要害蟲、抗除草劑、抗病等基因,并將多個(gè)外源基因組裝在一起,采用新的快速、簡(jiǎn)便、高效方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化,加快選育新型的轉(zhuǎn)基因棉花,從而提高轉(zhuǎn)基因抗蟲棉生產(chǎn)的效率和拓寬抗蟲棉的抗蟲性能。