菌類生長的生物學特征范文

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作者：高玉海許慧春鄧儉姜俊清趙綏林何秉章單位：黑龍江大學伊春分校伊春南岔林業局伊春林業學校東北林業大學哈爾濱園林研究所東北林業大學

苦白蹄〔Laricifomesofficinalis(Vill.exFr.)KotlabaetPouzar〕(別名藥用擬層孔菌、奎寧菌、落葉松層孔菌)廣泛分布于北溫帶。在俄羅斯和中國危害落葉松(Larixspp.),引起落葉松立木和木材的褐色腐朽。在歐洲和美洲,還可危害冷杉(Abeis)、云杉(Picea)和多種松樹(Pinus)〔1,2〕。該菌在前蘇聯民間用于治療胃病,甚有特效。

在歐洲和日本,可治療腹痛、感冒、肺結核盜汗、毒蛇咬傷、慢性支氣管炎等,有的作茶飲用。近年來報道,該菌具有抗癌作用〔3,4〕。

對該菌的分類位置,有過幾次報道,但對該菌的生物學特性的研究報道甚少,為了進一步開發利用該菌種和防治該菌引起的病害,對其生物學特性進行了研究。

1材料

1.1菌種來源采自大興安嶺落葉松立木上的苦白蹄子實體,經鑒定為苦白蹄。

1.2菌種純化

在無菌操作條件下,切取菌體內部黃豆粒大小菌肉組織接種于PDA培養基上,25e培養5d后,從菌落邊緣挑取菌絲再轉管,反復3次,可獲純菌

2實驗方法和結果

2.1不同培養基對菌絲生長的影響配制4種適于真菌生長的培養基,培養基種類及配方見表1,分別接種同質等量菌絲放于25e溫箱中培養,每24h測量一次,并記錄(見表2),且根據每日記錄結果繪制菌絲生長曲線圖(見圖1)。由以上結果可以看出,苦白蹄可以在上述四種培養基上生長,但以PDA、落PDA生長較好,PDA培養基上日均生長量為0.7mm,落PDA培養基上日均生長量為0.9mm。在麥芽糖培養基上生長比較稀疏。

2.2不同溫度對菌絲生長的影響將菌種接于培養皿中PDA培養基上,在不同溫度條件下避光培養,設5、10、15、20、25、30°6個梯度,每梯度3個重復,每24h測量一次,并記錄(見表3),且根據每日記錄結果繪制生長曲線圖(見圖2)。從以上結果可以看出,苦白蹄可以在10~30e培養基上生長,但以20e和25e生長較好,菌絲致密,日均生長量分別為1.6mm和1.5mm,說明此菌為喜溫菌。

2.3光照對菌絲生長的影響將接種的培養基分別置于有光、半光、無光的條件下,溫度均為25°,每24h測量一次,并記錄(見表4、圖3)。從以上結果可以看出,苦白蹄在全光、半光、無光條件下均可生長,但以無光條件下生長最佳,無光培養基上日均生長量為0.9mm。

2.4不同pH值對菌絲生長的影響

2.4.1緩沖液的配制先配制0.2mol/LNa2HPO3#2H2O和0.1mol/L檸檬酸,用二者適量混合配成3、4、5、6、7、8等6個pH值梯度。

2.4.2落PDA培養基做好后,用HCl和NaOH溶液把pH值調至7。

2.4.3將上述緩沖液和培養基高壓滅菌。

2.4.4在無菌條件下倒平板后,立即用一膠頭滴管吸1ml對應緩沖液滴入其中,輕輕搖勻,靜置冷卻。

2.4.5接種,每梯度3個重復,每24h測量一次,并記錄(見表5)。由上述實驗結果可以看出,在pH3~8的條件下,菌絲均可以生長,但以pH3~6生長較好,日均生長量均為1.0mm。說明此菌對pH值的要求不嚴格,在各種pH值下差別不大。

2.5不同C源對菌絲生長的影響

在下面的各項試驗中,均用Lilly和Barnett半組合培養基〔5,6〕。培養基配方見表6。將表6中列出的C源和維生素在距離紫外燈下8cm處鋪成薄層,用紫外燈照射60min滅菌,維生素滅菌后配成原液使用。磷酸鹽用200ml蒸餾水溶解后高壓滅菌。其它物質溶入800ml蒸餾水中高壓滅菌,最后這些成分在無菌的條件下混合。培養基滅菌后,用1mol/L的鹽酸和1mol/L的NaOH調節pH值至6。在半組合培養基中,固定N源(天冬素),分別以不同C源進行培養,每種處理3個重復,每隔24h測量一次菌絲生長半徑,并記錄(見表7)。由上述結果表明,該菌對C源的要求并不十分嚴格,除乳糖、麥芽糖以外,生長均較好,但以萄萄糖、果糖最佳。

2.6不同N源對菌絲生長的影響

固定C源(萄萄糖),分別用不同的N源進行培養,基本方法同上,每24h測量一次,并記錄。結果見表8。由上述結果表明,該菌對N源的要求不嚴格,其中以甘氨酸生長較佳,可作為其生長的最佳N源。

2.7微量元素對菌絲生長的影響

在C、N源(葡萄糖和酒石酸胺)固定下,分別缺少鉀、鎂、鐵、鋅、錳離子,然后與正常生長的對照菌落進行比較(見表9)。從表9中看出,缺K+及Mg2+生長較差,說明該菌對K+、Mg2+等的要求比較嚴格。

2.8維生素VB1對菌絲生長的影響

由上述結果表明,維生素VB1對該菌生長影響不大,有維生素VB1生長較好。

3結論

3.1苦白蹄在落PDA培養基上生長最佳。

3.2苦白蹄在10~30e都能生長,在此溫度區間中生長量與溫度成正比,最適溫度為20e。

3.3光照對苦白蹄生長影響極大,生長量與光量成反比,無光時生長最快。

3.4此菌在pH3~8均能生長,最適生長pH值為3~4。

3.5在庶糖、麥芽糖、葡萄糖、乳糖、果糖、無糖的基質上培養,除乳糖、麥芽糖生長較差外,其余生長較好,最佳C源是葡萄糖。

3.6在所實驗的N源上均生長較好,最佳N源為甘氨酸。

3.7此菌在缺少錳、鋅、鐵離子的情況下與對照相差無幾,但缺鉀、鎂離子的菌絲生長略受阻。

3.8在有VB1的條件下生長較好。