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1材料與儀器
細胞株：人卵巢癌SKOV3細胞購自中國醫學科學院腫瘤研究所,由廣西腫瘤防治研究所臨床中心實驗室傳代保存。細胞用含有10%滅活小牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養液于37℃、5%CO2條件下培養。MR-300酶標儀為美國產,倒置顯微鏡為日本產。MTT(噻唑藍)購自Sigma公司,RPMI1640和小牛血清為Gibco公司產品，其余均為國產分析純試劑。莪術油注射液購自黑龍江瑞格制藥有限公司（生產批號：051101,國藥準字：H20023314）。
2方法
2.1噻唑藍(MTT)法確定莪術油注射液對卵巢癌SKOV3細胞的存活抑制作用取對數生長期的卵巢癌SKOV3細胞,濃度為5×103個/ml，加入到96孔板，每孔加含細胞的培養液180μl,置37℃,5%CO2培養箱孵育24h后,以依次加入終濃度為15.625，31.25，62.5，125，250μg/ml莪術油注射液,同時以1640培養液作為空白對照組,每孔的終體積均為200μl，分別培養12，24，36，48h后加入20μlMTT(2g·L-1),37℃,5%CO2培養箱孵育4h后,棄上清液,每孔加入DMSO200μl,于492nm波長處測定吸光度OD值，每個濃度平行測定3孔。按下列公式求出生長抑制率(IR)，通過由IR對濃度作圖,求出半數抑制濃度IC50。實驗重復3次取平均值。
生長抑制率IR（%）=（1-實驗組平均A值/空白對照平均A值）×100%
2.2細胞形態學觀察倒置顯微鏡觀察：細胞爬片后,分別加入31.25，62.5，125μg/ml濃度的莪術油注射液作用48h后，倒置顯微鏡觀察，攝片。
2.3統計學處理所有數據用SPSS11.0軟件進行單因素方差分析分析，計量資料結果以±s表示，當P＜0.05認為差異有顯著性意義。
3結果
3.1MTT法檢測結果MTT法檢測不同濃度、不同時間莪術油注射液對SKOV3細胞抑制效果，見表1。
結果表明，莪術油注射液對SKOV3細胞體外生長具有明顯的抑制作用，其抑制作用隨時間、濃度的增加而不斷加強，呈現一定的-時-效、量-效關系，其中各濃度藥物作用48h后的抑制效果最好,計算出IC50=55.16μg/ml。a=-0.3390，b=0.2356，r=0.9271。
3.2倒置顯微鏡結果（細胞形態學變化）細胞培養48h后觀察，空白對照組SKOV3細胞生長旺盛，分裂相較多，細胞透明，細胞間連接緊密，密度較大呈復層性生長，部分重疊成簇狀，形態多樣，多角形或短梭形,胞核圓形或橢圓形,多突起，具有較好的折光性，胞漿豐富透亮,部分細胞內可見分泌顆粒，細胞為梭形或短梭形，細胞內顆粒較少，細胞核隱約可見，培養液中極少見懸浮的死亡細胞以及細胞碎片（見圖1～2）。選擇31.25，62.5，125μg/ml濃度的莪術油作用細胞48h后觀察,大體可見細胞密度明顯減少，胞體變長,細胞內顆粒感增強，細胞界限模糊,細胞間隙逐漸增寬，細胞質減少,胞漿減少,細胞脫落呈懸浮狀,存活細胞減少，細胞核碎裂，可見細胞碎片，隨著莪術油作用濃度的增加，上述現象更加明顯（具體見圖3～8）。
表1莪術油注射液對SKOV3細胞增殖的抑制率（略）
不同濃度之間比較的方差分析結果為F=309.901，組間均為P＜0.01；不同時間各組之間的方差分析結果為F=103.571，組間均為P＜0.01
圖1人卵巢癌SKOV3細胞(100×,細胞鑲嵌排列,呈柵欄狀或成腺趨勢生長)（略）
圖2人卵巢癌SKOV3細胞(200×，顯示瘤細胞形態)（略）
圖3濃度31.25μg/ml莪術油作用后卵巢癌SKOV3細胞顯微鏡觀察圖(100×，部分細胞核開始變形，顆粒感增強)（略）
圖4濃度31.25μg/ml莪術油作用后卵巢癌SKOV3細胞顯微鏡觀察圖(200×，部分細胞體積增大，胞漿減少，培養液中出現死亡細胞)（略）
圖5濃度62.5μg/ml莪術油作用后卵巢癌SKOV3細胞顯微鏡觀察圖(100×，細胞損傷明顯加重，細胞核變形明顯)（略）
圖6濃度62.5μg/ml莪術油作用后卵巢癌SKOV3細胞顯微鏡觀察圖(200×，多數細胞體積增大，胞漿明顯減少，培養液中死亡細胞增多)（略）
圖7濃度125μg/ml莪術油作用后卵巢癌SKOV3細胞顯微鏡觀察圖(100×，核漿比例增大,細胞排列極性消失，顆粒感明顯)（略）
圖8濃度125μg/ml莪術油作用后卵巢癌SKOV3細胞顯微鏡觀察圖(200×，細胞損傷非常明顯，細胞質顆粒脫落，胞漿溶解，培養液中大量死亡細胞和細胞碎片)（略）
4討論
莪術油作為一種具有良好應用前景的抗癌藥物,其方便、快捷、經濟，日益引起人們的重視,成為研究的熱點。本實驗以莪術油注射液5種濃度,分別作用于卵巢癌SKOV3細胞12，24，36，48h后,發現隨藥物濃度增加、作用時間延長,抑制率也增加。實驗表明，藥物作用48h效果最明顯,利用中效方程式計算出48h的IC50值為55.16μg/ml；小劑量莪術油(15.625μg/ml)對SKOV3細胞的抑制作用并不明顯。用濃度為31.25，62.5，125，250μg/ml莪術油作用SKOV3細胞48h后，其抑制率有明顯的量-效關系；250μg/ml的莪術油抑制率高達86.7%，但是在倒置顯微鏡下觀察可見滿視野的細胞碎片，絕大多數細胞壞死，幾乎找不到貼壁細胞。因此，選擇濃度為31.25，62.5，125μg/ml的莪術油作用SKOV3細胞48h后，主要從細胞體積、細胞質感、細胞漿、細胞質等方面，通過倒置顯微鏡進行形態學觀察：與對照組比較，31.25μg/ml濃度莪術油作用后可見部分細胞核開始變形，顆粒感增強，細胞體積增大，胞漿減少；62.5μg/ml濃度莪術油作用后可見細胞損傷明顯加重，細胞核變形明顯，多數細胞體積增大，胞漿明顯減少，細胞界限模糊；125μg/ml濃度莪術油作用后可見核漿比例增大,細胞排列極性消失，顆粒感明顯，細胞損傷非常明顯，細胞質顆粒脫落，細胞核出現裂解，胞漿溶解，大量細胞碎片。本實驗研究證實莪術油能夠抑制人卵巢癌細胞株SKOV3的增殖，并初步觀察到細胞死亡的大體形態學變化，其具體的作用機制有待進一步探討。