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【摘要】建立hplc法測(cè)定抗骨質(zhì)增生丸中淫羊藿苷的含量。方法用DiamonsilC18（4.6mm×200mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm。結(jié)果淫羊藿苷在0.04052～0.5065μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系好，r=0.99995，平均回收率為99.4%，RSD為0.6%（n=6）。結(jié)論本法測(cè)定簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性和分離度好，可用于抗骨質(zhì)增生丸的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】HPLC淫羊藿抗骨質(zhì)增生丸含量測(cè)定
【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationoficariininKangguzhizengshengpills.MethodsADiamonsilTMC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithamobilephaseofacetonitrile-water（26:74）.Theflowratewas1.0ml·min-1andthedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThelinearrangewasat0.04052?g～0.5065?g（r=0.99995）andtheaveragerecoverywas99.4%withRSD0.6%（n=6）.ConclusionThedeterminationmethodissimpleandaccurateanditcanbeusedforthequalitycontrolofKangguzhizengshengpills.
【Keywords】HPLC;icariin;Kangguzhizengshengpills;determination
抗骨質(zhì)增生丸為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第一冊(cè)收載的品種［1］，由熟地黃、淫羊藿、肉蓯蓉等九味中藥組成，具有補(bǔ)腰腎、強(qiáng)筋骨、活血、止痛等功效。用于治療增生性脊椎炎、頸椎綜合征、骨刺等骨質(zhì)增生癥。原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定方法，方中淫羊藿為主要藥味,其有效成分為淫羊藿苷。有關(guān)淫羊藿苷的含量測(cè)定方法，主要為HPLC法［2，3］。為能有效地控制藥品質(zhì)量，本研究用HPLC測(cè)定淫羊藿苷，建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
1儀器與試藥
ShimadzuHPLC色譜儀（ShimadzuLC-20ALiquidChromatograph,ShimadzuSIL-20AAutoSampler,ShimadzuSPD-M20ADiodeArrayDetector,ShimadzuCTO-10ASVPColumnOven）LCSolution色譜工作站。水為I級(jí)純化水，乙腈為色譜純，其他為分析純。淫羊藿苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：110737-200312）。抗骨質(zhì)增生丸：山東臨清華威藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：20060507、20060601）。
2試驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），柱溫：35℃，流動(dòng)相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm。
2.2溶液的制備
2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品10.13mg，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.26μg的溶液，備用。
2.2.2供試品溶液的制備取本品，剪碎，混勻，取3g，精密稱定，加等量硅藻土，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加熱回流2h，棄去氯仿液，藥渣揮干，精密加甲醇50ml，稱重，超聲1h，加甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。
2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備取缺淫羊藿的處方，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。
2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液、陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣10μl，色譜圖見(jiàn)圖1。淫羊藿苷峰保留時(shí)間為20.9min，陰性對(duì)照色譜圖在淫羊藿苷峰位置無(wú)干擾峰。
2.4線性關(guān)系考察精密吸取對(duì)照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得方程：Y=-4.80×103+2.26×106X，r=0.99995，線性范圍為0.04052～0.5065μg。
圖1HPLC色譜圖2.5精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣7次，每次10μl，峰面積積分值RSD=0.8%
2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（20060601）樣品6份，按供試品液制備方法制備，依法測(cè)定，結(jié)果淫羊藿苷含量RSD=1.0%，表明本法重復(fù)性好。
2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品溶液（20060601）在0、6、12、24h分別進(jìn)樣10μl，依法測(cè)定，淫羊藿苷峰面積RSD=0.5%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8加樣回收試驗(yàn)取已知含量的樣品（20060601），精密加入淫羊藿苷對(duì)照品適量，按樣品測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率試驗(yàn)結(jié)果
2.9樣品測(cè)定取6批樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液，依法測(cè)定淫羊藿苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。表2&
nbsp;6批樣品含量測(cè)定結(jié)果
3討論
3.1考察流動(dòng)相中乙腈對(duì)淫羊藿苷保留時(shí)間和分離度的影響曾采用抗骨增生膠囊中測(cè)定淫羊藿苷的流動(dòng)相乙腈-水（30：70）［4］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），結(jié)果表明乙腈量增大，保留時(shí)間提前，但分離效果差，與雜質(zhì)峰無(wú)法分離，以乙腈-水（26：74）較合適。
3.2本實(shí)驗(yàn)考察了供試品溶液的提取方法（索氏提取與超聲處理）和提取時(shí)間，結(jié)果索氏提取2h，能除去大部分干擾雜質(zhì)，超聲處理1h后繼續(xù)超聲，含量不再增加，故采用此提取方法。
【參考文獻(xiàn)】
1衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑，第一冊(cè)，86.
2干國(guó)平,李水清,張蓮萍,等.HPLC法測(cè)定更年靈膠囊中淫羊藿苷的含量.中國(guó)藥師,2006,9（8）:743-744.
3洪行球,黃燕芬.HPLC測(cè)定乳腺康顆粒劑中淫羊藿苷的含量.中成藥,2004,26（2）:165-167.
4國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，470-471.新晨