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【摘要】建立hplc法測定抗骨質(zhì)增生丸中淫羊藿苷的含量。方法用DiamonsilC18（4.6mm×200mm，5μm）色譜柱，流動相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，檢測波長：270nm。結(jié)果淫羊藿苷在0.04052～0.5065μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系好，r=0.99995，平均回收率為99.4%，RSD為0.6%（n=6）。結(jié)論本法測定簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性和分離度好，可用于抗骨質(zhì)增生丸的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】HPLC淫羊藿抗骨質(zhì)增生丸含量測定
【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationoficariininKangguzhizengshengpills.MethodsADiamonsilTMC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithamobilephaseofacetonitrile-water（26:74）.Theflowratewas1.0ml·min-1andthedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThelinearrangewasat0.04052?g～0.5065?g（r=0.99995）andtheaveragerecoverywas99.4%withRSD0.6%（n=6）.ConclusionThedeterminationmethodissimpleandaccurateanditcanbeusedforthequalitycontrolofKangguzhizengshengpills.
【Keywords】HPLC;icariin;Kangguzhizengshengpills;determination
抗骨質(zhì)增生丸為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第一冊收載的品種［1］，由熟地黃、淫羊藿、肉蓯蓉等九味中藥組成，具有補腰腎、強筋骨、活血、止痛等功效。用于治療增生性脊椎炎、頸椎綜合征、骨刺等骨質(zhì)增生癥。原標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定方法，方中淫羊藿為主要藥味,其有效成分為淫羊藿苷。有關(guān)淫羊藿苷的含量測定方法，主要為HPLC法［2，3］。為能有效地控制藥品質(zhì)量，本研究用HPLC測定淫羊藿苷，建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
1儀器與試藥
ShimadzuHPLC色譜儀（ShimadzuLC-20ALiquidChromatograph,ShimadzuSIL-20AAutoSampler,ShimadzuSPD-M20ADiodeArrayDetector,ShimadzuCTO-10ASVPColumnOven）LCSolution色譜工作站。水為I級純化水，乙腈為色譜純，其他為分析純。淫羊藿苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：110737-200312）。抗骨質(zhì)增生丸：山東臨清華威藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號：20060507、20060601）。
2試驗方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），柱溫：35℃，流動相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，檢測波長：270nm。
2.2溶液的制備
2.2.1對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品10.13mg，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.26μg的溶液，備用。
2.2.2供試品溶液的制備取本品，剪碎，混勻，取3g，精密稱定，加等量硅藻土，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加熱回流2h，棄去氯仿液，藥渣揮干，精密加甲醇50ml，稱重，超聲1h，加甲醇補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。
2.2.3陰性對照溶液的制備取缺淫羊藿的處方，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。
2.3系統(tǒng)適用性試驗分別取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液進樣10μl，色譜圖見圖1。淫羊藿苷峰保留時間為20.9min，陰性對照色譜圖在淫羊藿苷峰位置無干擾峰。
2.4線性關(guān)系考察精密吸取對照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進樣量為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，得方程：Y=-4.80×103+2.26×106X，r=0.99995，線性范圍為0.04052～0.5065μg。
圖1HPLC色譜圖2.5精密度試驗取對照品溶液連續(xù)進樣7次，每次10μl，峰面積積分值RSD=0.8%
2.6重復(fù)性試驗取同一批號（20060601）樣品6份，按供試品液制備方法制備，依法測定，結(jié)果淫羊藿苷含量RSD=1.0%，表明本法重復(fù)性好。
2.7穩(wěn)定性試驗取同一樣品溶液（20060601）在0、6、12、24h分別進樣10μl，依法測定，淫羊藿苷峰面積RSD=0.5%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8加樣回收試驗取已知含量的樣品（20060601），精密加入淫羊藿苷對照品適量，按樣品測定方法測定含量，計算回收率，結(jié)果見表1。表1回收率試驗結(jié)果
2.9樣品測定取6批樣品，按2.2.2項下方法制備樣品溶液，依法測定淫羊藿苷的含量，結(jié)果見表2。表2&
nbsp;6批樣品含量測定結(jié)果
3討論
3.1考察流動相中乙腈對淫羊藿苷保留時間和分離度的影響曾采用抗骨增生膠囊中測定淫羊藿苷的流動相乙腈-水（30：70）［4］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），結(jié)果表明乙腈量增大，保留時間提前，但分離效果差，與雜質(zhì)峰無法分離，以乙腈-水（26：74）較合適。
3.2本實驗考察了供試品溶液的提取方法（索氏提取與超聲處理）和提取時間，結(jié)果索氏提取2h，能除去大部分干擾雜質(zhì)，超聲處理1h后繼續(xù)超聲，含量不再增加，故采用此提取方法。
【參考文獻】
1衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑，第一冊，86.
2干國平,李水清,張蓮萍,等.HPLC法測定更年靈膠囊中淫羊藿苷的含量.中國藥師,2006,9（8）:743-744.
3洪行球,黃燕芬.HPLC測定乳腺康顆粒劑中淫羊藿苷的含量.中成藥,2004,26（2）:165-167.
4國家藥典委員會.中國藥典，一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，470-471.新晨