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HPLC法貫葉連翹不同部位中金絲桃素含量范文

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摘要用hplc法測定貫葉連翹根、莖、葉、花、果中金絲桃素的含量;結果表明花中含量最高,莖中含量甚微。

關鍵詞:貫葉連翹;金絲桃素;不同部位;HPLC

貫葉連翹HypericumperforatumL.為藤黃科金絲桃屬植物,藥理實驗證明其主要成分金絲桃素具有抗病毒、抗炎及抗腫瘤作用,對人體激活白細胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。目前以金絲桃素含量為貫葉連翹定量指標。我們建立了HPLC法,并測定了幾個產(chǎn)區(qū)的貫葉連翹原植物根、莖、葉、花、果中金絲桃素的含量,以指導藥材的采收和金絲桃素生產(chǎn)原料的質量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器HPLC儀(美國Perkin-Elmer公司);LC-295型紫外可見檢測器;Series200泵;Plus-1022色譜工作站。

1.2試藥乙腈(色譜純);金絲桃素對照品(Sigma公司,批號97071503);貫葉連翹(Hypericum.PerforatumLinn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱:Nova-PakODS(4.6mm×200mm);流動相:甲醇∶乙腈∶0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(400∶100∶100);流速:1ml/min;檢測波長:588nm;Range:0.05AUFS;進樣量:10μl,金絲桃素保留時間11min。

2.2供試液的制備將原藥材各部位樣品分別粉碎,使全部過60目篩。精密稱取約1g,用甲醇-吡啶(90∶10)20ml超聲提取1h,放冷至室溫,最后定容于25ml量瓶中,用0.45μm濾膜濾過,濾液即為供試液。精密稱取金絲桃素對照品,用吡啶-甲醇(1∶9)溶解并稀釋為0.01mg/ml的溶液,作為對照品溶液。

2.3提取溶媒的選擇金絲桃素為多酚羥基雙蒽酮類,在甲醇中加入一定吡啶使提取溶劑呈弱堿性,有利于金絲桃素的溶出。

2.4提取時間對同一藥材樣品分別加入吡啶-甲醇溶液20ml超聲提取15,30,45,60,90min后測定,表明45min以后金絲桃素的含量測定結果趨于穩(wěn)定(15%),考慮超聲時間過長溶劑升溫,故采取超聲1h為宜。

2.5標準曲線的制備分別吸取0,2.5,5,10,15,20μl的金絲桃素對照品溶液進樣,以峰面積對進樣量回歸得方程:y=38707x-8804,r=0.9991。

同法取供試品溶液測定。結果見表1。取同一藥材測定9次,RSD=3.30%。

表1不同產(chǎn)地貫葉連翹各部位的含量

產(chǎn)地花葉莖根果實全草甘肅文縣0.0720.0460.002未檢出0.028甘肅康縣0.0900.035未檢出未檢出0.039湖南龍山0.0580.0370.007未檢出0.0190.019貴州畢節(jié)0.0570.0360.003未檢出0.0090.022陜西丹鳳0.0860.033未檢出未檢出0.018湖北恩施0.0850.040未檢出未檢出0.015四川達川0.0500.035未檢出未檢出0.018

2.6加樣回收試驗精密稱取藥材粉末3份,分別加入不同量的金絲桃素對照品,按樣品測定方法操作,金絲桃素平均回收率為100.3%,RSD=4.17%。

3討論

①金絲桃素含量測定可用薄層掃描法〔2〕或HPLC法,熒光檢測并配合梯度洗脫〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外檢測器,且為等度洗脫,較上述方法簡便、實用,具有較強的可操作性。

②從含量測定結果可知:金絲桃素在花中含量最高,葉次之,果實含量低,莖中含量甚微,根中未檢出金絲桃素。故應在花期采收地上部分,棄去莖干;藥材質量以花葉多者為優(yōu)。

參考文獻

〔1〕EzioBombardelli,PaoloMorazzoni.Hypericumperforatum.Fitoterapia,1995(1):43

〔2〕KartnigThandGbelI.Determinationofhypericinandpseudohypericinbythinlayerchromatography-den-sitometry.JChromotogr,1992(609):423

〔3〕GiuseppeMicali,FrancescoLanuzza,PaolinaCurro.Highperformanceliquidchromatographicdeterminationofthebiologicallyactiveprinciplehypericininphytotherapeaticvegebrextractsandalcoholicbeverages.JChromotogr,1996(731):336新晨

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