堿性成纖維細胞因子對真皮下血管網皮瓣成活實驗范文

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作者：尹剛賈堂宏劉志功孫炳衛龔維明劉淑恒郭淑亞張慶國

【摘要】目的：研究堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對促進隨意型真皮下血管網皮瓣（SVNF）成活的作用。方法：分別在4只純白色家豬兩側背部各形成6個SVNF，長16cm，寬4cm，將24個皮瓣隨機分為bFGF組和對照組，于術后6d測量各組皮瓣成活率及皮瓣新生血管密度。結果：術后6d，bFGF組與對照組SVNF成活率分別為（81.2±1.7）%和（66.2±1.8）%(P＜0.05)，皮瓣近、中、遠段皮瓣血管密度分別為（16.7±6.0）、(29.7±5.5)、（14.9±6.0）/mm2和（16.6±4.0）、（21.4±5.2）、（3.5±5.1）/mm2(P＜0.05)。大體觀察和組織學觀察bFGF組均優于對照組。結論：皮瓣下局部注射bFGF后，通過促進SVNF遠端基底部和邊緣部的血運，可以提高SVNF成活率，縮短皮瓣的斷蒂時間，擴大皮瓣長寬比例。

【關鍵詞】真皮・外科皮瓣・成纖維細胞生長因子2

BFGFimprovestheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap

【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheapplicationvalveofbFGFtoimprovetheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap.Methods:Fourwhitehealthypigswereused,eachpighad6SVNFonback,16cm×4cm，totally24flapsweredividedrandomlyinto2groups:ThebFGFgroupsandthecontrolgroups.Onpostoperativeday6,weobservedtheappearanceoftheflaps.Thesurvivalareaofeachflapwasmeasuredandtheflapwasharvestedforhistologicalanalysisandthedensityofangiogenesiswasalsoexamined.Results:Onpostoperativeday6,thesurvivalratesofthebFGFgroupandthecontrolgroupwere(81.2±1.7)%and(66.2±1.8)%respectively,theangiogenesisdensityofthemiddleandthedistalsegmentinthebFGFgroupwas(16.7±6.0)/mm2,(29.7±5.5)/mm2,(14.9±6.0)/mm2respectively,while(16.6±4.0)/mm2,(21.4±5.2)/mm2,(3.5±5.1)/mm2respectivelyinthecontrolgroup.ThebFGFgroupwassuperiortothecontrolgroupintheappearanceandhistologicalanalysisoftheflaps.Conclusion:TheresultssuggestthattheinjectionofbFGFlocallycanpromotethesurvivalratebyacceleratingthebloodcirculationoftheSVNF’bottomandedge,shortenthedivisiontimeofSVNFandbroadentheratiooflengthandwidth.

【KEYWORDS】Dermis・Surgicalflap・Fibroblastgrowthfactor2

臨床上經常見皮膚撕脫傷、熱壓傷、嚴重燒傷創面，早期良好的組織覆蓋是外科修復的重要研究內容，對恢復患肢功能，保留良好的外觀至關重要。隨意型真皮下血管網皮瓣（subdermalvascularnetworkflap,SVNF）是近20年來新出現的一種皮瓣，此型皮瓣充分發揮了真皮下血管網的作用，廣泛應用于創傷外科、燒傷整形美容外科，但其供血范圍有一定限度，皮瓣長寬比例一般不超過2.5∶1，故而限制其推廣應用。本實驗采用堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）皮瓣下局部注射給藥，探討bFGF能否提高SVNF的成活率，為臨床應用提供依據。

1材料和方法

1.1實驗動物純白色3個月齡健康家豬4只（由山東大學動物實驗中心提供），體重（20±2.5）kg，雌雄不限。

1.2動物模型的建立在每只家豬兩側背部形成6個SVNF，切斷從腹乳線處發出的軸型血管后形成隨意型皮瓣，長16cm，寬4cm。皮瓣長軸與豬的縱軸垂直。

1.3藥物及給藥方法bFGF購自東大生物工程公司。SVNF形成后，即刻在皮瓣距蒂部12cm、14cm處及皮瓣最遠端分別選擇6個注射點，給予皮下注射。處理如下：bFGF組：每一位點真皮下層注射含有bFGF的肝素化生理鹽水0.1ml，共0.6ml。對照組：每一位點皮下注射0.1ml肝素化生理鹽水，共0.6ml。藥物注射后，將皮瓣原位縫合，皮瓣遠段1/3打包加壓包扎。家豬麻醉清醒后，單籠飼養，每日肌肉注射青霉素400萬U預防感染。

1.4檢測指標及方法

1.4.1大體觀察術后6d將家豬再次全麻后拆除打包線，肉眼觀察各組皮瓣

顏色，質地及豬毛生長情況。

1.4.2皮瓣成活率術后6d，用透明硫酸紙標記出皮瓣壞死區域和成活區域。應用計算機圖像分析儀計算出各組皮瓣成活面積占總面積之比，即皮瓣成活率。

1.4.3組織學觀察分別在皮瓣近、中、遠1/3處切取1cm×1cm×1cm的組織塊，包括皮下脂肪組織和少量肌肉組織，10%福爾馬林固定，常規脫水，包埋，HE染色，光鏡下觀察組織學變化。

1.4.4血管密度檢測采用SP免疫組化染色顯示真皮下層新生的血管，然后利用10倍光鏡，隨機計算出每個組織切片中選出的5個視野中血管斷面的個數。利用計算機圖像自動處理系統計算出相同視野下的組織面積，即為1mm2組織中血管斷面的密度。

1.5統計學處理求出每組皮瓣成活率及血管密度的x±s。實驗測得的數據組間采用單因素方差分析比較，進行t檢驗。

2結果

2.1大體觀察兩組皮瓣近端呈粉白色，豬毛生長良好，質地柔軟，用刀切割出血活躍。兩組皮瓣中段為淡紫紅色。bFGF組皮瓣遠段呈粉白色，局部淡紅色，有豬毛生長，對照組皮瓣遠段部分發黑、結痂，無豬毛生長，質地硬，切割時不流血。

2.2皮瓣成活率術后6dSVNF成活率bFGF組為（81.2±1.7）%，對照組為（66.2±1.8）%(P＜0.05)。

2.3組織學觀察術后6d對照組遠段皮膚表皮層變偏平，真皮層細胞排列紊亂，膠原組織有斷裂現象，真皮層和真皮下層新生的血管生長不活躍，有大量的中性粒細胞和巨噬細胞浸潤。bFGF組皮瓣遠段皮膚各層結構無明顯改變，復層上皮細胞排列整齊，真皮層膠原組織無腫脹及斷裂，真皮層和真皮下層新生小血管生長活躍，無明顯炎癥細胞浸潤。

2.4血管密度檢測術后6d，兩組皮瓣遠段新生血管密度見表1和圖1-3。表1術后6d兩組皮瓣血管密度比較（略）

3討論

創面愈合過程包括炎癥反應、血管再生、細胞移行、細胞增殖以及細胞外基質的重建，創面愈合受多種肽類生長因子的調控，這些因子通過自分泌和旁分泌的機制影響著創面愈合的進程，其中堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）在創面愈合中起重要作用。bFGF不僅能促進皮膚成纖維細胞、內皮細胞等與組織修復有關的細胞生長增殖反應外，而且還能刺激成纖維細胞分泌膠原蛋白等合成新的細胞外基質［1］。本實驗結果表明，bFGF能夠通過促進皮瓣遠段血運重建，改善真皮下血管網皮瓣血供，促進皮瓣成活，縮短斷蒂時間，繼而提高SVNF的成活率。bFGF廣泛存在于體內所有細胞中，其中腦垂體含量最高，其他組織僅為其含量1/10~1/50，細胞外基質（ECM）是bFGF的貯存庫，細胞合成的bFGF釋放入ECM,與其中的硫酸肝素結合是非活性狀態，活性形式bFGF的釋放必須依賴于肝素酶的降解，一般以為，這些嚴格的調控機制對于bFGF隨時調節靶細胞的增殖和分泌對創傷組織的修復極為有利。bFGF有廣泛的生物活性，不僅能促進靶細胞的有絲分裂，還有非有絲分裂的激素樣效應，包括改變細胞趨化性，誘導或者抑制細胞合成，分泌一些特殊蛋白質和調節細胞的分化。誘導毛細血管的生長是bFGF的一個非常重要的功能，幾乎在所有富含血管的組織中均含有bFGF。真皮下血管網的血供包括［2］：（1）蒂部血供。血供通過蒂部較小的肌皮穿支的分支進入真皮下血管網，到達皮瓣遠端。（2）創基創緣血供。真皮下血管網充分暴露，與受區緊密接觸，有利于血管網與受區早期建立交通，隨著血管網逐步調整，原來的干血管被選擇性的部分保留下來，起著重要供血渠道的作用。bFGF能促進皮瓣早期斷蒂［3］，因為bFGF不僅有利于新生血管從受區基底部向皮瓣快速生長，還能加強基底與皮瓣間血管斷端的直接吻合。在皮瓣轉移后，新生血管尚未長入皮瓣組織，直接血管吻合可改善皮瓣血供，特別有利于處于存活與壞死交界區內的細胞向好的方向發展，對于皮瓣存活率的提高是有較大益處的。bFGF以肝素結合物的形式存在［4］，并以此形式與受體結合而產生生物學效應。肝素可提高其生物學活性，并可保護其不被各種理化因素滅活，外源性肝素有利于bFGF結合到靶細胞表面受體上，促進bFGF生理作用的發揮，故臨床應用時應加入肝素化生理鹽水以增加其活性。

參考文獻

［1］丁小邦，程寧新，陳兵，等.應用bFGF刺激的軟骨細胞構建自體組織工程化軟骨的研究［J］.中華整形外科雜志，2004，3：217.

［2］肖添有，司徒樸，趙吉森.真皮下血管網皮瓣的基礎研究進展［J］.中華整形燒傷雜志，1997，4：292.

［3］張強，蔡錦方，劉立峰，等.bFGFPLGA微球促進隨意皮瓣早期斷蒂［J］.中國矯形外科雜志，2004，12（5）：353355.

［4］趙煥童，李湘洲，王歧剛，等.堿性成纖維細胞生長因子對大鼠真皮下血管網皮片愈合的影響［M］.中國臨床康復，2003，7（23）：31683169.新晨