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【摘要】［目的］研究五味子提取物的抑菌活性，為其合理開發(fā)提供參考。［方法］以大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌為供試菌種，采用濾紙片法和平板二倍稀釋法研究了五味子70%乙醇提取液的抑菌作用。［結(jié)果］五味子提取物對(duì)4種供試菌都有明顯的抑制作用。濾紙片法的MIC，金黃色葡萄球菌為62.5mg/ml，大腸埃希氏菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌為31.3mg/ml；二倍稀釋法的結(jié)果類似，除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其余3種菌均為25mg/ml。另外，五味子提取物經(jīng)短時(shí)間的高溫處理，仍具有較強(qiáng)的抑菌作用。［結(jié)論］五味子乙醇提取物具有明顯的抑菌作用，且其抑菌成分是熱穩(wěn)定的。
【關(guān)鍵詞】五味子提取物抑菌作用
五味子［Schisandrachinensis(Turcz.)Baill］別名北五味子、遼五味子、山花椒、烏梅子、軟棗子等，為木蘭科五味子屬植物。多年生落葉木質(zhì)藤本，以野生為主，為常用中藥材。主要以果實(shí)入藥，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有斂肺、滋腎、止汗、生津、止瀉、澀精等功能。可以治療咳嗽、哮喘、口渴自汗、盜汗、遺精、久瀉、神經(jīng)衰弱等癥，也是很好的果酒和飲料的原料［1］，具有極高的藥用價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值，是一種新型的“藥食同源”功能性保健食品，其果實(shí)在國際上已成為一種新興食品工業(yè)的重要原料［2，3］。本實(shí)驗(yàn)采用濾紙片法和二倍稀釋法，研究了五味子提取物對(duì)4種常見污染菌的抑制作用，為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。
1資料與方法
1.1菌種與培養(yǎng)基試驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省臺(tái)州醫(yī)院微生物實(shí)驗(yàn)室友情贈(zèng)送。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基按文獻(xiàn)［4］自制，PH為6.0（用PBS配制［5］）。
1.2五味子提取物的制備五味子飲片購自臨海市醫(yī)藥有限公司，經(jīng)70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超聲波清洗器中提取，反復(fù)多次，直至浸出液色淡。將浸出液濃縮，并定容到10ml，即1ml提取液為1g五味子的提取物［6］。提取液過0.22μm濾膜除菌，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>
1.3抑菌試驗(yàn)
1.3.1抑菌效力的測定將供試菌從斜面轉(zhuǎn)接到5ml液體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)24h，吸取50μl到5ml液體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)6h后取100μl菌液均勻涂布到平板上；再貼上濾紙圓片（φ6mm，提取液浸24h后風(fēng)干），每皿4片，重復(fù)3次。37℃倒置培養(yǎng)24h后測定抑菌圈大小，用無菌水作空白對(duì)照，確定抑菌效果。
1.3.2最低抑菌濃度（MIC）的測定采用二倍稀釋法［7］測定提取物對(duì)供試菌的MIC。取7支試管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml無菌水，從第1支吸取5ml提取液移至第2支，混勻后，再吸取5ml至第3支，以此類推，最后1支試管取出5ml棄去，每一試管的濃度分別為1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分別將5ml上述各濃度的提取物與20ml牛肉膏固體培養(yǎng)基混勻，制成提取物的濃度分別為200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml（w/v）的平板，接種菌液后倒置培養(yǎng)24h觀察，以沒有供試菌生長的最低濃度為提取物的MIC。
1.3.3熱穩(wěn)定性試驗(yàn)將五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃濕熱條件下［8］熱處理20min，再制成濃度為500mg/ml的提取液浸泡濾紙片，稍風(fēng)干后貼在涂有菌液的平板中，測定其抑菌效果。
2結(jié)果與分析
2.1提取物濃度對(duì)抑菌效力的影響濾紙片法測定結(jié)果顯示，五味子提取物對(duì)4種供試菌的生長均有很強(qiáng)的抑制作用，其中對(duì)綠膿桿菌的抑制作用最強(qiáng)，肺炎克雷伯氏菌其次，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌最弱。
表1五味子提取物的濃度對(duì)抑菌效率的影響（略）
2.2不同菌的MIC提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml外，其余3種菌均為25mg/ml（與濾紙片法基本一致）。
表2五味子提取物的MIC（mg/ml）（略）
“－”表示無菌生長，“+”表示細(xì)菌生長
2.3提取物的熱穩(wěn)定性試驗(yàn)提取物經(jīng)3種溫度的熱處理20min后，仍具有較強(qiáng)的抑菌效力，其抑菌圈直徑與未經(jīng)高溫處理的樣品接近，其中只有對(duì)綠膿桿菌抑制作用，經(jīng)100℃處理和濕熱滅菌后有顯著下降，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用，經(jīng)濕熱滅菌后有顯著降低；而對(duì)大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3種處理與對(duì)照均無顯著差異（見表3）。說明五味子的抑菌成分具有一定的熱穩(wěn)定性。
表3熱處理對(duì)五味子提取物抑菌效力的影響（略）
不同字母表示P＜0.05水平顯著，ns為不顯著
3結(jié)論
經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明五味子提取物的濃度在31.3～1000mg/ml范圍內(nèi)，對(duì)4種供試菌的抑制效應(yīng)依次為：綠膿桿菌>肺炎克雷伯氏菌>大腸桿菌>金黃色葡萄球菌。濾紙片瓊脂擴(kuò)散法結(jié)果顯示，除金黃色葡萄球菌MIC為62.5mg/ml外，其余3種供試菌MIC均為31.3mg/ml；采用二倍稀釋法測得的MIC也顯示類似的結(jié)果，金黃色葡萄球菌的MIC為50mg/ml，另3種菌的MIC均為25mg/ml。另外，五味子提取物經(jīng)短時(shí)高溫處理后，其活性成分不中國論文聯(lián)盟-