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《哈爾濱商業大學學報》2015年第三期
胃潰瘍是消化性潰瘍中的一種常見疾病,它的發病區主要位于賁門和幽門之間.目前在臨床上治療胃潰瘍的中藥及西藥很多,這些藥物雖然見效很快,但是復發率很高[1].近年來,中醫中藥治療胃潰瘍[2-4]越來越受到多數人的認可,其原因是療效顯著,毒副作用小.五味子作為傳統中藥[5],是木蘭科植物五味子的干燥成熟果實,具有斂肺滋腎、止瀉澀精、寧心安神等功效,常用于治療夢遺滑精、久咳虛喘、津傷口渴、遺尿尿頻、心悸失眠等癥狀[6].本實驗研究通過建立大鼠的胃潰瘍模型,以大鼠的病理切片及體重變化來研究五味子提取物對胃潰瘍的治療情況,為五味子提取物臨床治療胃潰瘍提供初步的實驗支持.
1實驗材料
1.1藥品和試劑高錳酸鉀、甲醇、二甲苯、無水乙醇、硫酸鋁鉀、氨水(分析純天津市天力化學試劑有限公司);磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉(分析純天津市密歐化學試劑有限公司);鹽酸(分析純天津市富宇精細化工有限公司);樹膠(加拿大進口分裝上海化學試劑分裝廠);水溶伊紅、蘇木色素(天津市百世化工有限公司);石蠟(LEICA德國萊卡公司);生理鹽水(醫用)(沈陽志鷹制藥廠);鹽酸雷尼替丁膠囊(杭州賽諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司);冰醋酸、乙醚為市售純品;實驗用中性福爾馬林溶液、鹽酸酒精溶液及五味子提取物等自制.
1.2實驗儀器組織脫水機、包埋機、切片機、攤片機、烘片機、封片機、染色機,以上均由德國萊卡公司制造;顯微鏡(NikonECLIPSEE600尼康公司)、電恒溫培養箱(DH4000B天津泰斯特儀器有限公司).
1.3實驗動物SD大鼠(雌雄各半),體重為180~220g,購自黑龍江中醫藥大學動物實驗中心,合格證號:SYXK黑2008001.
2實驗方法
2.1實驗動物分組將實驗動物隨機分為空白組,模型組,陽性給藥組,給藥治療組,每組10只,雌雄各半.
2.2給藥劑量給藥劑量按照人和大鼠的體型系數的換算公式求得.給藥劑量計算公式:D2=D1×K2/K1×(W1/W2)1/3.公式中,D1、K1、W1為人所要求的用藥劑量、體型指數、體重,D2、K2、W2為已知動物的用藥劑量、體型指數、體重.經計算各組給藥劑量如表1所示.
2.3冰醋酸法大鼠胃潰瘍模型的制備造模組是將大鼠在乙醚麻醉狀態下剖開腹部,暴露胃部,用30%醋酸溶液0.02mL注射至腺胃部前壁的漿膜下,再將腹壁縫合[7].造模術后從第2天開始,對大鼠進行給藥,空白組和模型組分別給以與陽性藥組和給藥治療組相同體積的蒸餾水,陽性藥組和給藥治療組按大鼠體重給藥,每天上午給藥灌胃1次,共計14d.
2.4指標觀察
2.4.1體重變化在實驗期間,對大鼠按實驗分組進行體重稱量,記錄,實驗結束后,比較各組大鼠的體重變化.
2.4.2病理組織切片觀察實驗大鼠末次給藥后,禁食不禁水24h,取出全胃,浸入10%福爾馬林固定后,對各組胃組織進行病理切片觀察,在電子顯微鏡下觀察各組大鼠胃組織的病理變化情況[8].
2.5實驗動物的取材和保存
2.5.1取材將處死后的大鼠腹腔打開,結扎幽門和賁門后取出胃,向胃腔注入1%的甲醛溶液10mL,然后將胃浸入10%中性福爾馬林固定一周.
2.5.2組織脫水將固定好的臟器進行修塊后,按甲醛(二次固定)—水洗—70%酒精—80%酒精—90%酒精—95%酒精—100%酒精I—100%酒精II—二甲苯I—二甲苯II—石蠟I—石蠟II—石蠟III順序進行臟器的脫水.
2.5.3組織切片用全自動切片機進行組織切片,放入恒溫箱保存.
2.5.4HE染色將保存一夜的切片放入染色機中,進行HE染色,染色順序為:二甲苯I—二甲苯II—無水乙醇I—無水乙醇II—95%乙醇—90%乙醇—80%乙醇—70%乙醇—蒸餾水—蘇木素—蒸餾水—鹽酸酒精—蒸餾水—伊紅—蒸餾水—70%乙醇—80%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—無水乙醇I—無水乙醇II—二甲苯I—二甲苯II,用中性樹膠封片.
3實驗結果
3.1體重變化實驗前后各組大鼠體重變化如表2所示.
3.2病理組織學圖片及觀察結果由圖1可見,空白組內實驗大鼠胃黏膜完整,黏膜上皮細胞未見壞死、脫落.有豐富的腺體,部分大鼠黏膜內有少量的炎細胞浸潤,但是黏膜下層、肌層、漿膜層均無明顯炎細胞浸潤.模型組內實驗大鼠胃部可見嚴重潰瘍面,肌層可見嚴重水腫,胃黏膜損傷嚴重,有大量炎細胞浸潤出現在表面.陽性給藥組相對于模型組病變程度大有好轉,潰瘍面幾乎不見,肌層僅有輕度水腫,黏膜表面無明顯炎細胞浸潤,血小管也沒有充血現象.給藥組相對于模型組癥狀明顯減輕,胃部無明顯潰瘍面,胃黏膜有少量脫落,無肌層水腫,僅有少量炎細胞浸潤,血小管無明顯充血現象.
4結語
通過對北五味子提取物對大鼠抗潰瘍作用藥效學的初步研究,可以得出以下結論:實驗前后大鼠體重變化結果顯示,體重變化大小為:空白組>陽性藥組≈給藥組>模型組,由此可以得出給藥組對大鼠的胃潰瘍有較好的療效;病理組織學切片圖顯示,給藥治療組的治療效果可以和陽性藥組的治療效果相比較,有很好的療效.這一結論為五味子的進一步臨床研究提供了前期實驗支持.
作者:楊連榮 李曉梅 崔闊 楊爽爽 宗可昕 范卓文 單位:黑龍江中醫藥大學 藥學院 通河縣人民醫院 北京秦脈醫藥咨詢有限責任公