鴉膽子油乳藥理學(xué)論文范文
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1材料與方法
1.1腫瘤接種選取傳代6～8d，腫瘤生長(zhǎng)良好、腹部隆起明顯的小鼠，無(wú)菌條件下抽取腹水，用無(wú)菌生理鹽水稀釋細(xì)胞懸液。于倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)后,將細(xì)胞濃度調(diào)整為1×107/mL。每只小鼠取0.2mL細(xì)胞懸液接種于右側(cè)腋后線皮下，觀察腫瘤生長(zhǎng)。
1.2動(dòng)物分組及給藥選取造模成功小鼠，隨機(jī)分為正常光節(jié)律組和異常光節(jié)律組。正常光節(jié)律組小鼠又隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、光照前期（6am）給藥組、光照中期（2pm）給藥組、暗期前期（10pm）給藥組；異常光節(jié)律組小鼠又隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、光照前期（11pm）給藥組、暗期中期（3pm）給藥組、暗期前期（7am）給藥組，每組15只。正常組、模型組每天腹腔注射生理鹽水，給藥組分別在設(shè)計(jì)時(shí)間腹腔注射鴉膽子油乳注射液（劑量為5mL/kg）。陽(yáng)性對(duì)照組按體質(zhì)量腹腔注射環(huán)磷酰胺（劑量為20mg/kg），各組均連續(xù)給藥10d。治療期間記錄小鼠的毛色、體質(zhì)量、小鼠死亡時(shí)間和數(shù)量。
1.3對(duì)實(shí)體瘤的抑制作用末次給藥24h后，稱量小鼠體質(zhì)量，隨后頸椎脫臼處死小鼠。剝?nèi)×鰤K，稱取質(zhì)量，計(jì)算瘤體質(zhì)量指數(shù)：w瘤質(zhì)量指數(shù)=m瘤質(zhì)量/mbody，以及腫瘤生長(zhǎng)抑制率（%）：p抑制=（m模型組-m治療組）/m模型組×100%。
1.4臟器指數(shù)的測(cè)定末次給藥24h后，稱量小鼠體質(zhì)量，隨后頸椎脫臼處死小鼠，剝?nèi)「闻K、腎臟、脾臟和胸腺，稱取質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)：p臟器指數(shù)=m臟器/mbody
1.5肝、腎功能指標(biāo)的測(cè)定末次給藥24h后，小鼠眼球取血，分離血清。按試劑盒步驟測(cè)定血清中ALT、AST、GGT、TP、Cr、BUN含量。
1.6統(tǒng)計(jì)方法所有結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。方差齊者，采用單因素方差分析；方差不齊者，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1不同光節(jié)律對(duì)小鼠生長(zhǎng)情況的影響正常光節(jié)律各組小鼠行為活動(dòng)、毛發(fā)正常；而異常光節(jié)律各組小鼠行為較遲鈍，進(jìn)食較少，毛發(fā)光澤較暗，毛發(fā)松散。從第6天開始，各組陸續(xù)出現(xiàn)死亡。體質(zhì)量生長(zhǎng)曲線見圖1。
2.2不同光節(jié)律對(duì)鴉膽子油乳抑瘤作用的影響表1結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，各治療組瘤體質(zhì)量不同程度減少，瘤質(zhì)量指數(shù)有所下降，其中陽(yáng)性對(duì)照組、暗期前期給藥組與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。光節(jié)律改變后，與正常光節(jié)律比較，各治療組瘤體質(zhì)量均有所上升，瘤質(zhì)量指數(shù)有所增加。異常光節(jié)律下，除光照前期給藥組外，各治療組瘤體質(zhì)量及瘤質(zhì)量指數(shù)均顯著下降，與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。
2.3不同光節(jié)律對(duì)各組臟器指數(shù)的影響表2結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，與模型組比較，暗期前期(10pm)給藥組的肝臟指數(shù)顯著下降（P<0.05），胸腺指數(shù)顯著上升（P<0.05）。改變光節(jié)律后，各臟器指數(shù)均有所下降。異常光節(jié)律下，暗期前期(7am)給藥組的脾臟指數(shù)顯著升高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
2.4不同光節(jié)律對(duì)各組肝功能指標(biāo)的影響表3結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，模型組AST水平與空白對(duì)照組比較顯著上升（P<0.05），各治療組AST，GGT水平有不同程度下降，其中陽(yáng)性對(duì)照組的AST水平與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。光節(jié)律改變后，與正常光節(jié)律比較，各組AST水平有所上升，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。異常光節(jié)律下，各治療組AST水平有所下降，GGT水平有所上升。
2.5不同光節(jié)律對(duì)各組腎功能指標(biāo)的影響表4結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，模型組BUN、Cr水平與空白對(duì)照組比較顯著下降（P<0.05），各治療組BUN、Cr水平有所上升。改變光節(jié)律后，與正常光節(jié)律比較，各組BUN水平有所上升，Cr水平有所下降。異常光節(jié)律下，模型組BUN、Cr水平與空白對(duì)照組比較顯著上升（P<0.05），各治療組BUN水平除暗期中期給藥組外，均有所下降；各治療組Cr水平均有所下降。
3討論
從本研究結(jié)果分析，采用H22肝癌細(xì)胞制備KM小鼠的腫瘤模型，經(jīng)鴉膽子油乳注射液治療后，在正常光節(jié)律和異常光節(jié)律下均可減小瘤體質(zhì)量，降低瘤質(zhì)量指數(shù)，具有一定的腫瘤抑制作用。
藥物在正常光節(jié)律下給藥，與異常光節(jié)律比較，瘤質(zhì)量指數(shù)的下降幅度更為顯著。相同光節(jié)律下，藥物在暗相期給藥，治療效果更佳。國(guó)內(nèi)外研究顯示：生物體晝夜節(jié)律的失調(diào)，會(huì)影響調(diào)控細(xì)胞增殖的鐘控基因（clock-controlledgenes，CCG），進(jìn)而引起細(xì)胞周期的紊亂，最終導(dǎo)致腫瘤的加速生長(zhǎng)。本研究結(jié)果顯示：改變光節(jié)律后，與正常光節(jié)律比較，小鼠的行為和狀態(tài)出現(xiàn)異常，瘤體質(zhì)量、瘤質(zhì)量指數(shù)均有所上升，表明晝夜節(jié)律的紊亂會(huì)加速腫瘤的生長(zhǎng)。在相同光節(jié)律下，與暗相期治療組比較，光照期治療組瘤體質(zhì)量增加，瘤質(zhì)量指數(shù)更高。經(jīng)鴉膽子油乳治療后，2種光節(jié)律下各治療組小鼠的瘤體質(zhì)量均有所減小，瘤質(zhì)量指數(shù)均有所降低，而且，在特定的時(shí)相（暗相期）下給藥，藥物的治療效果更好。既肯定了藥物本身的抗腫瘤作用，也可為日后的進(jìn)一步研究提供參考。
另一方面，機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有節(jié)律性。正常晝夜節(jié)律下，免疫系統(tǒng)中的某些成員在夜間的水平較高，往往容易出現(xiàn)峰值時(shí)相。免疫系統(tǒng)晝夜節(jié)律的改變，尤其是峰相位白細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞因子濃度的回落，使得機(jī)體原有的免疫監(jiān)視節(jié)律紊亂，不能有效地監(jiān)視腫瘤細(xì)胞，從而使腫瘤細(xì)胞逃脫免疫監(jiān)視，得以繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)展。ALT、AST、GGT是臨床上檢查肝功能的重要指標(biāo)。當(dāng)肝臟發(fā)生病變，如原發(fā)性肝癌時(shí)，由于肝細(xì)胞受到損傷等原因，使血清中3項(xiàng)指標(biāo)水平出現(xiàn)不同程度的升高。BUN是人體蛋白質(zhì)的主要終末產(chǎn)物，Cr主要由肌肉代謝產(chǎn)生，當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)率明顯下降時(shí)，血液中BUN和Cr才會(huì)明顯升高，一般作為檢查腎功能的重要指標(biāo)［8］。本研究結(jié)果顯示：2種光節(jié)律下的荷瘤小鼠AST、BUN、Cr水平均出現(xiàn)異常。改變光節(jié)律后，與正常光節(jié)律比較，荷瘤小鼠的脾臟、胸腺指數(shù)出現(xiàn)不同程度的下降，血清中AST、BUN水平有所升高。可以推斷，晝夜節(jié)律的改變可能對(duì)免疫系統(tǒng)的某些環(huán)節(jié)產(chǎn)生影響，并可能會(huì)加重肝腎功能損傷。使用藥物治療后，脾臟、胸腺指數(shù)有所回升，部分治療組的AST、BUN、Cr水平有所下降。
提示鴉膽子油乳的治療作用可能與晝夜節(jié)律有關(guān)，其具體機(jī)制仍有待探討。從中藥中尋找既具有一定的抗腫瘤作用，又可以增強(qiáng)患者免疫系統(tǒng)，改善組織器官損傷的藥物，正逐漸成為研究的熱點(diǎn)。本研究采用時(shí)辰藥理學(xué)概念，在2種不同的光節(jié)律影響下，觀察鴉膽子油乳對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及不同時(shí)相給藥對(duì)藥效的影響。結(jié)果表明鴉膽子油乳不僅具有一定的抗腫瘤作用，而且在特定時(shí)相下給藥能增大藥物的療效，其化學(xué)成分明確，性質(zhì)穩(wěn)定，具有良好的實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用前景。
作者：李濱萍林曦廖嘉儀劉方樂熊天琴單位：廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部廣州中醫(yī)藥大學(xué)