鴉膽子油乳藥理學論文范文

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1材料與方法

1.1腫瘤接種選取傳代6～8d，腫瘤生長良好、腹部隆起明顯的小鼠，無菌條件下抽取腹水，用無菌生理鹽水稀釋細胞懸液。于倒置顯微鏡下計數(shù)后,將細胞濃度調(diào)整為1×107/mL。每只小鼠取0.2mL細胞懸液接種于右側(cè)腋后線皮下，觀察腫瘤生長。

1.2動物分組及給藥選取造模成功小鼠，隨機分為正常光節(jié)律組和異常光節(jié)律組。正常光節(jié)律組小鼠又隨機分為模型組、陽性對照組、光照前期（6am）給藥組、光照中期（2pm）給藥組、暗期前期（10pm）給藥組；異常光節(jié)律組小鼠又隨機分為模型組、陽性對照組、光照前期（11pm）給藥組、暗期中期（3pm）給藥組、暗期前期（7am）給藥組，每組15只。正常組、模型組每天腹腔注射生理鹽水，給藥組分別在設計時間腹腔注射鴉膽子油乳注射液（劑量為5mL/kg）。陽性對照組按體質(zhì)量腹腔注射環(huán)磷酰胺（劑量為20mg/kg），各組均連續(xù)給藥10d。治療期間記錄小鼠的毛色、體質(zhì)量、小鼠死亡時間和數(shù)量。

1.3對實體瘤的抑制作用末次給藥24h后，稱量小鼠體質(zhì)量，隨后頸椎脫臼處死小鼠。剝?nèi)×鰤K，稱取質(zhì)量，計算瘤體質(zhì)量指數(shù)：w瘤質(zhì)量指數(shù)=m瘤質(zhì)量/mbody，以及腫瘤生長抑制率（%）：p抑制=（m模型組-m治療組）/m模型組×100%。

1.4臟器指數(shù)的測定末次給藥24h后，稱量小鼠體質(zhì)量，隨后頸椎脫臼處死小鼠，剝?nèi)「闻K、腎臟、脾臟和胸腺，稱取質(zhì)量，計算臟器指數(shù)：p臟器指數(shù)=m臟器/mbody

1.5肝、腎功能指標的測定末次給藥24h后，小鼠眼球取血，分離血清。按試劑盒步驟測定血清中ALT、AST、GGT、TP、Cr、BUN含量。

1.6統(tǒng)計方法所有結(jié)果均以均數(shù)±標準差（x±s）表示，均采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計。方差齊者，采用單因素方差分析；方差不齊者，采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1不同光節(jié)律對小鼠生長情況的影響正常光節(jié)律各組小鼠行為活動、毛發(fā)正常；而異常光節(jié)律各組小鼠行為較遲鈍，進食較少，毛發(fā)光澤較暗，毛發(fā)松散。從第6天開始，各組陸續(xù)出現(xiàn)死亡。體質(zhì)量生長曲線見圖1。

2.2不同光節(jié)律對鴉膽子油乳抑瘤作用的影響表1結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，各治療組瘤體質(zhì)量不同程度減少，瘤質(zhì)量指數(shù)有所下降，其中陽性對照組、暗期前期給藥組與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。光節(jié)律改變后，與正常光節(jié)律比較，各治療組瘤體質(zhì)量均有所上升，瘤質(zhì)量指數(shù)有所增加。異常光節(jié)律下，除光照前期給藥組外，各治療組瘤體質(zhì)量及瘤質(zhì)量指數(shù)均顯著下降，與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。

2.3不同光節(jié)律對各組臟器指數(shù)的影響表2結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，與模型組比較，暗期前期(10pm)給藥組的肝臟指數(shù)顯著下降（P<0.05），胸腺指數(shù)顯著上升（P<0.05）。改變光節(jié)律后，各臟器指數(shù)均有所下降。異常光節(jié)律下，暗期前期(7am)給藥組的脾臟指數(shù)顯著升高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.4不同光節(jié)律對各組肝功能指標的影響表3結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，模型組AST水平與空白對照組比較顯著上升（P<0.05），各治療組AST，GGT水平有不同程度下降，其中陽性對照組的AST水平與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。光節(jié)律改變后，與正常光節(jié)律比較，各組AST水平有所上升，但差異無統(tǒng)計學意義。異常光節(jié)律下，各治療組AST水平有所下降，GGT水平有所上升。

2.5不同光節(jié)律對各組腎功能指標的影響表4結(jié)果顯示：正常光節(jié)律下，模型組BUN、Cr水平與空白對照組比較顯著下降（P<0.05），各治療組BUN、Cr水平有所上升。改變光節(jié)律后，與正常光節(jié)律比較，各組BUN水平有所上升，Cr水平有所下降。異常光節(jié)律下，模型組BUN、Cr水平與空白對照組比較顯著上升（P<0.05），各治療組BUN水平除暗期中期給藥組外，均有所下降；各治療組Cr水平均有所下降。

3討論

從本研究結(jié)果分析，采用H22肝癌細胞制備KM小鼠的腫瘤模型，經(jīng)鴉膽子油乳注射液治療后，在正常光節(jié)律和異常光節(jié)律下均可減小瘤體質(zhì)量，降低瘤質(zhì)量指數(shù)，具有一定的腫瘤抑制作用。

藥物在正常光節(jié)律下給藥，與異常光節(jié)律比較，瘤質(zhì)量指數(shù)的下降幅度更為顯著。相同光節(jié)律下，藥物在暗相期給藥，治療效果更佳。國內(nèi)外研究顯示：生物體晝夜節(jié)律的失調(diào)，會影響調(diào)控細胞增殖的鐘控基因（clock-controlledgenes，CCG），進而引起細胞周期的紊亂，最終導致腫瘤的加速生長。本研究結(jié)果顯示：改變光節(jié)律后，與正常光節(jié)律比較，小鼠的行為和狀態(tài)出現(xiàn)異常，瘤體質(zhì)量、瘤質(zhì)量指數(shù)均有所上升，表明晝夜節(jié)律的紊亂會加速腫瘤的生長。在相同光節(jié)律下，與暗相期治療組比較，光照期治療組瘤體質(zhì)量增加，瘤質(zhì)量指數(shù)更高。經(jīng)鴉膽子油乳治療后，2種光節(jié)律下各治療組小鼠的瘤體質(zhì)量均有所減小，瘤質(zhì)量指數(shù)均有所降低，而且，在特定的時相（暗相期）下給藥，藥物的治療效果更好。既肯定了藥物本身的抗腫瘤作用，也可為日后的進一步研究提供參考。

另一方面，機體的免疫系統(tǒng)具有節(jié)律性。正常晝夜節(jié)律下，免疫系統(tǒng)中的某些成員在夜間的水平較高，往往容易出現(xiàn)峰值時相。免疫系統(tǒng)晝夜節(jié)律的改變，尤其是峰相位白細胞數(shù)與細胞因子濃度的回落，使得機體原有的免疫監(jiān)視節(jié)律紊亂，不能有效地監(jiān)視腫瘤細胞，從而使腫瘤細胞逃脫免疫監(jiān)視，得以繼續(xù)生長發(fā)展。ALT、AST、GGT是臨床上檢查肝功能的重要指標。當肝臟發(fā)生病變，如原發(fā)性肝癌時，由于肝細胞受到損傷等原因，使血清中3項指標水平出現(xiàn)不同程度的升高。BUN是人體蛋白質(zhì)的主要終末產(chǎn)物，Cr主要由肌肉代謝產(chǎn)生，當腎小球濾過率明顯下降時，血液中BUN和Cr才會明顯升高，一般作為檢查腎功能的重要指標［8］。本研究結(jié)果顯示：2種光節(jié)律下的荷瘤小鼠AST、BUN、Cr水平均出現(xiàn)異常。改變光節(jié)律后，與正常光節(jié)律比較，荷瘤小鼠的脾臟、胸腺指數(shù)出現(xiàn)不同程度的下降，血清中AST、BUN水平有所升高。可以推斷，晝夜節(jié)律的改變可能對免疫系統(tǒng)的某些環(huán)節(jié)產(chǎn)生影響，并可能會加重肝腎功能損傷。使用藥物治療后，脾臟、胸腺指數(shù)有所回升，部分治療組的AST、BUN、Cr水平有所下降。

提示鴉膽子油乳的治療作用可能與晝夜節(jié)律有關，其具體機制仍有待探討。從中藥中尋找既具有一定的抗腫瘤作用，又可以增強患者免疫系統(tǒng)，改善組織器官損傷的藥物，正逐漸成為研究的熱點。本研究采用時辰藥理學概念，在2種不同的光節(jié)律影響下，觀察鴉膽子油乳對H22肝癌荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及不同時相給藥對藥效的影響。結(jié)果表明鴉膽子油乳不僅具有一定的抗腫瘤作用，而且在特定時相下給藥能增大藥物的療效，其化學成分明確，性質(zhì)穩(wěn)定，具有良好的實用價值和應用前景。

作者：李濱萍林曦廖嘉儀劉方樂熊天琴單位：廣東省中醫(yī)院藥學部廣州中醫(yī)藥大學